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    當(dāng)歸芍藥散對肝硬化腹水大鼠血管緊張素Ⅱ、內(nèi)皮素-1的影響

    2015-12-19 07:14:02岳曉莉王成業(yè)潘永福王運來
    關(guān)鍵詞:凝血酶原門脈芍藥

    岳曉莉,王成業(yè),姚 瑤,蔡 衡,潘永福,王運來,許 釩

    (安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,安徽 合肥 230012)

    肝硬化腹水是肝硬化失代償期的重要臨床標(biāo)志,以肝功能損害及門靜脈高壓為主要臨床表現(xiàn),并常出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥,屬于中醫(yī)學(xué)“臌脹”范疇。其主要病機特點是由多種原因使肝脾腎受損,三臟功能失調(diào),導(dǎo)致氣滯、血瘀、水飲互結(jié)為病,屬本虛標(biāo)實之證。當(dāng)歸芍藥散出自《金匱要略》,最初用于治療婦科疾病。全方由當(dāng)歸、芍藥、川芎、澤瀉、茯苓、白術(shù)6味藥組成?,F(xiàn)代研究[1]表明,當(dāng)歸芍藥散方中諸藥均有保肝或利尿的藥理作用:當(dāng)歸有保護肝細胞和促進肝功能恢復(fù)的作用;白芍具有顯著抗肝損傷作用;川芎具有改善門靜脈循環(huán)障礙,促進肝臟纖維組織溶解的作用;白術(shù)有保肝作用,且利尿作用顯著;澤瀉有保肝、抗脂肪肝、利尿作用;茯苓具有增強免疫、保肝的作用。因此,當(dāng)歸芍藥散抗肝硬化腹水具有良好的實驗基礎(chǔ)。近年來研究發(fā)現(xiàn),多種血管活性物質(zhì)與門靜脈高壓癥的形成有關(guān),如血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、內(nèi)皮素-1(endothelin-1,ET-1),這些活性物質(zhì)以不同的方式和途徑影響肝臟和門靜脈的血流動力學(xué)[2-4]。本研究通過觀察當(dāng)歸芍藥散對肝硬化腹水大鼠血漿AngⅡ、ET-1水平的影響,探討AngⅡ、ET-1與肝硬化腹水形成的關(guān)系。

    1 材料

    1.1 藥物及試劑 當(dāng)歸、芍藥、川芎、白術(shù)、茯苓、澤瀉的飲片,均購自安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司,并經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院金傳山教授鑒定,均符合《中華人民共和國藥典》(2010年版)項下標(biāo)準(zhǔn)。按原方比例(當(dāng)歸3g,芍藥16g,川芎、澤瀉各8g、白術(shù)、茯苓各4g)稱量藥材,加10倍量50%乙醇浸泡60min,水浴回流1.5h,冷卻后收集濾液;再加8倍量50%乙醇水浴回流1.5h,冷卻后收集濾液。合并兩次濾液,過濾,水浴濃縮至所需濃度藥液。分別制備生藥濃度為0.43、0.86、1.72g/mL的當(dāng)歸芍藥散低、中、高劑量全方藥液[5]。甘利欣:江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司,批號100702;CCl4:分析純,江蘇強盛化工有限公司,批號2008121;福臨門一級菜子油:中糧東海糧油工業(yè)有限公司,批號20111010;甲醛:分析純,上海中試化工總公司,批號20101010;苯巴比妥片:上海信誼藥廠有限公司,國藥準(zhǔn)字H31022038;無水乙醚:分析純,上海中試化工總公司,批號20101010。

    1.2 儀器 MP6001電子天平:上海恒平科學(xué)儀器有限公司;TGL-16B高速臺式離心機:上海安亭科學(xué)儀器廠;島津全自動生化分析儀;Eppendorf移液器;Labsystem Multiskan-MK2酶標(biāo)儀;CA-7000全自動血液凝固分析儀:希森美康醫(yī)用電子上海有限公司。

    1.3 動物 SD大鼠,60只,雄性,SPF級,體質(zhì)量(220±20)g,由江蘇南京青龍山動物繁殖場提供,生產(chǎn)許可證號為SCXK(蘇)2009-0001。

    2 方法

    2.1 模型復(fù)制、分組及給藥 將雄性SD大鼠隨機分為正常組,模型組,甘利欣組,當(dāng)歸芍藥散低、中、高劑量組,每組10只。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,除正常組外,其余動物給予35%苯巴比妥溶液作為飲用水[6],1周后恢復(fù)正常飲水。參考文獻[7]的方法,給予以下濃度CCl4腹腔注射復(fù)制模型:第2~3周為12%CCl4油溶液,第4~5周為14%CCl4油溶液,第6~14周為16%CCl4油溶液,每周2次,給藥劑量為1mL/kg。正常組給予等容積生理鹽水。當(dāng)歸芍藥散低、中、高劑量組在復(fù)制模型同時分別灌胃給予當(dāng)歸芍藥散低劑量(4.3g/kg)、中劑量(8.6 g/kg)、高劑量(17.2g/kg)藥液,給藥容積均為10 mL/kg。甘利欣組給予甘利欣藥液(相當(dāng)于甘草酸二銨0.005 25g/kg),每日1次。連續(xù)給藥13周,末次給藥12h后,所有大鼠禁食不禁水,于次日乙醚麻醉,取材。

    2.2 檢測指標(biāo)

    2.2.1 凝血酶原時間檢測 于第14周末,大鼠乙醚麻醉后,腹主動脈取血,加入枸櫞酸鈉抗凝管,室溫放置30min,3 500r/min,離心10min,分離血漿,全自動血液凝固分析儀檢測血漿凝血酶原時間。

    2.2.2 血漿AngⅡ、ET-1檢測 大鼠乙醚麻醉,腹主動脈取血,肝素鈉抗凝,室溫放置30min,3 500 r/min,離心10min,分離血漿。酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測血漿AngⅡ、ET-1水平。

    2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 11.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。連續(xù)型變量采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)”進行統(tǒng)計學(xué)描述。多組間均數(shù)比較,采用單因素方差分析;組間均數(shù)多重比較,采用LSD法。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    3 結(jié)果

    與正常組比較,模型組大鼠凝血酶原時間顯著延長(P<0.05),血漿 AngⅡ、ET-1水平顯著升高(P<0.05)。與模型組比較,甘利欣組、當(dāng)歸芍藥散各劑量組凝血酶原時間均顯著縮短(P<0.05),血漿AngⅡ、ET-1水平顯著降低(P<0.05)。當(dāng)歸芍藥散各劑量組及甘利欣組之間凝血酶原時間和血漿AngⅡ、ET-1水平相比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    4 討論

    肝硬化腹水因肝、脾、腎三臟功能失調(diào),氣滯血瘀,血行不利,水液積于腹中而成,水停為標(biāo),血虛為本。當(dāng)歸芍藥散重用白芍以柔肝血,緩急止痛,佐以川芎疏肝理氣,與當(dāng)歸配合又可以行血活血;白術(shù)、茯苓崇土健脾,運化水濕,澤瀉淡滲利水。課題組前期研究[7]發(fā)現(xiàn),當(dāng)歸芍藥散可以明顯減少肝硬化腹水模型大鼠腹水生成以及延緩肝臟病理改變過程,改善肝硬化腹水大鼠肝功能,具有保肝護肝之效。

    表1 各組凝血酶原時間、血漿AngⅡ和ET-1水平比較(±s,n=10)

    表1 各組凝血酶原時間、血漿AngⅡ和ET-1水平比較(±s,n=10)

    注:同列含有相同右上標(biāo)符號的組別相比較,P>0.05;同列不含相同右上標(biāo)符號的組別相比較,P<0.05。

    組 別 凝血酶原時間/s AngⅡ/(ng/L)ET-1/(ng/L)正 常 10.95±0.78* 31.49±2.84* 19.60±2.16*模 型 12.44±1.29# 37.58±6.16# 24.49±4.26#甘利欣 10.96±0.99* 34.44±4.77*# 21.43±2.88*當(dāng)歸芍藥散低劑量 11.02±0.89* 32.54±5.66* 19.16±3.17*當(dāng)歸芍藥散中劑量 10.93±1.20* 31.72±5.83* 19.07±2.78*當(dāng)歸芍藥散高劑量 10.81±0.62* 30.67±3.56* 18.76±3.55*

    凝血酶原時間主要由肝臟合成的凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平?jīng)Q定,與肝細胞受損程度呈正相關(guān)。肝硬化代償期凝血酶原時間正常,失代償期則有不同程度延長。實驗結(jié)果表明,當(dāng)歸芍藥散高、中、低劑量組凝血酶原時間明顯縮短,表明當(dāng)歸芍藥散可以改善肝功能受損程度。

    AngⅡ廣泛分布于下丘腦、正中隆起、腦干等中樞神經(jīng)系統(tǒng),是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)中最有生物活性的物質(zhì),是一種強收縮血管活性因子,其生理作用主要是促進腎上腺皮質(zhì)球狀帶釋放醛固酮,促進腎小管對鈉和水的重吸收,造成機體鈉水潴留。本實驗中,當(dāng)歸芍藥散各藥物組AngⅡ均顯著性降低,表明當(dāng)歸芍藥散可能通過影響腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)而使血漿AngⅡ降低。AngⅡ的減少,可以減少腎臟對水的重吸收,減輕水鈉潴留,從而達到消除腹水的目的。

    ET是由21個氨基酸組成的多肽,是目前已知的體內(nèi)最強的縮血管物質(zhì)。ET有3種異構(gòu)體:ET-1、ET-2和 ET-3,其中 ET-1縮血管作用最強。ET-1的主要合成部位是已激活的肝臟星形細胞,與肝臟疾病及其并發(fā)癥有重要關(guān)系,且與肝臟門靜脈系統(tǒng)有重要的生物學(xué)效應(yīng)[8-9]。ET-1在門脈高壓血管病變過程中起關(guān)鍵作用[10-12]:其參與門脈高壓血流動力學(xué)的形成,參與腹水的形成,肝硬化患者出現(xiàn)腹水時,血漿ET-1明顯升高,但其機制尚不明確。本實驗中,模型組大鼠血漿ET-1較正常組大鼠明顯升高,可能是因為肝硬化腹水模型大鼠的肝臟受損,肝功能減退,降低了ET-1的清除能力;當(dāng)歸芍藥散各劑量組ET-1水平明顯降低,且呈現(xiàn)劑量依賴性,表明當(dāng)歸芍藥散可能通過改善肝硬化腹水大鼠肝功能水平,增強ET-1的清除能力,從而調(diào)節(jié)門脈高壓系統(tǒng),減少腹水生成。

    本實驗中當(dāng)歸芍藥散各給藥組均可以降低肝硬化腹水模型大鼠血漿AngⅡ、ET-1水平,表明當(dāng)歸芍藥散對肝硬化腹水的治療作用可能是通過降低AngⅡ、ET-1而實現(xiàn)的。

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