液相色譜儀示差折光率檢測器的檢定*

何海紅，何雅娟，王衛(wèi)華

(中國計量科學(xué)研究院化學(xué)與分析研究所，北京 100029)

液相色譜儀示差折光率檢測器的檢定*

何海紅，何雅娟，王衛(wèi)華

(中國計量科學(xué)研究院化學(xué)與分析研究所，北京 100029)

以配置日本島津制作所生產(chǎn)的RID-10A示差折光率檢測器的液相色譜系統(tǒng)的檢定為例，介紹了按照新版液相色譜儀檢定規(guī)程JJG 705-2014的要求對液相色譜儀示差折光率檢測器進(jìn)行檢定的過程。說明了檢定方法更改的原因、新方法的優(yōu)點及所解決的問題，總結(jié)了檢定過程中的注意事項。

液相色譜儀；檢定規(guī)程；示差折光率檢測器

示差折光率檢測器（RID）是通用型檢測器［1］，常用于檢測沒有紫外吸收或無發(fā)色基團(tuán)的物質(zhì)，如醇類［2-5］、糖類與防腐劑［6］、聚合物［7］等，其原理是通過連續(xù)測定參比池和測量池中溶液的折光率之差(樣品流路和參比流路之間折光率的變化)來測定樣品的含量，只要樣品組分與流動相的折光率不同就可以被檢測，二者折光率相差越大，檢測器對該樣品靈敏度越高［8］。但是RID檢測器不能進(jìn)行梯度洗脫，而且對溫度非常敏感，因為室溫的變化會影響基線的穩(wěn)定性。

新版液相色譜儀檢定規(guī)程JJG 705-2014［9］（于2014年8月14日實施）中更改了RID的檢定方法，主要原因如下：（1）在實際的檢定工作中經(jīng)常碰到客戶配置該檢測器而又不用來檢測糖類物質(zhì)或者不使用的情況，但是客戶要保留這方面的測量能力，所以必須要對該檢測器進(jìn)行檢定，按照舊規(guī)程［10］的要求需使用純水作為流動相，這樣難免會遇到客戶缺少可以使用純水作流動相的色譜柱的情況，從而導(dǎo)致檢定工作變得困難，不得不采取其它方式解決或者強(qiáng)制采用普通C18色譜柱，這些做法都存在隱患；（2）筆者經(jīng)過長時間的實驗發(fā)現(xiàn)，RID對于膽固醇樣品的最小檢測濃度約為10-6g／mL，與丙三醇最小檢測濃度相當(dāng)。鑒于以上兩點，為了方便檢定工作，在新規(guī)程中更改了檢定方法。

1 主要儀器與試劑

液相色譜系統(tǒng)：LC-20AT型，配置RID-10A型示差折光率檢測器，日本島津制作所；

甲醇：色譜純，德國Merk公司；

甲醇中膽固醇溶液：200 μg／mL，編號為GBW(E) 130405，不確定度為2.0%（k=2）；

甲醇中膽固醇溶液：5.0 μg／mL，編號為GBW(E) 130406，不確定度為5.0%（k=2）。

2 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18柱（50 mm×4.6 mm，3.5μm）；流動相：甲醇；流量：1.0 mL／min；柱溫箱溫度：35℃；檢測池溫度：40℃；進(jìn)樣體積：20 μL。

3 RID檢定

3.1 檢定方法

（1）以甲醇為流動相（流動相需提前用超聲波震蕩器脫氣約10 min），并將色譜柱安裝到柱溫箱中；

（2）連接色譜工作站后進(jìn)入檢測器參數(shù)設(shè)定部分，設(shè)定檢測池溫度；

（3）進(jìn)入柱溫箱參數(shù)設(shè)定界面，設(shè)定柱溫箱溫度；

（4）設(shè)定泵流量并運(yùn)行，然后沖洗參比池，等儀器達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)后（約需60 min），停止沖洗參比池，準(zhǔn)備進(jìn)樣；

（5）定性定量重復(fù)性檢定。用200 μg／mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定性定量重復(fù)性檢定，連續(xù)進(jìn)樣7次，每次進(jìn)樣20 μL，取連續(xù)6次數(shù)據(jù)作為定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)，記錄每次進(jìn)樣中膽固醇色譜峰的保留時間和峰面積，分別計算保留時間和峰面積測定結(jié)果的的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差；

（6）用5.0 μg／mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行最小檢測濃度檢定，連續(xù)進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣20 μL，記錄每次進(jìn)樣中膽固醇的色譜峰高，取3個峰高的平均值作為最終峰高值；

（7）按照色譜條件，不進(jìn)樣，采集30 min空白基線，記錄色譜圖。

3.2 檢定數(shù)據(jù)

3.2.1 定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)

利用200 μg／mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對RID-10A型示差折光率檢測器進(jìn)行定性定量重復(fù)性［11］檢定，色譜圖見圖1，色譜峰面積及保留值數(shù)據(jù)見表1。

圖1 定性定量重復(fù)性色譜圖

表1 定性定量重復(fù)性檢定數(shù)據(jù)

3.2.2 最小檢測濃度數(shù)據(jù)

利用5.0 μg／mL甲醇中膽固醇溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對RID-10A型示差折光率檢測器進(jìn)行最小檢測濃度檢定，色譜圖見圖2，色譜峰高數(shù)據(jù)見表2，根據(jù)式(1)計算最小檢測濃度，檢定結(jié)果見表3。

圖2 最小檢測濃度色譜圖

表2 最小檢測濃度峰高數(shù)據(jù)

式中：cL——最小檢測濃度，g／mL；

Nd——基線噪聲峰高，mV；

c——標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，g／mL；

V——進(jìn)樣體積，μL；

20——系數(shù)，μL；

H——標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜峰高，mV。

表3 最小檢測濃度檢定結(jié)果

3.2.3 檢測器的噪音、漂移數(shù)據(jù)

對RID-10A型示差折光率檢測器進(jìn)行檢測器噪音與漂移檢定，檢定數(shù)據(jù)見表4，色譜圖分別見圖3、圖4。

表4 RID-10A示差折光率檢測器噪音、漂移數(shù)據(jù)

圖3 RID-10A示差折光率檢測器噪音色譜圖

圖4 RID-10A示差折光率檢測器漂移色譜圖

4 注意事項

（1）示差折光率檢測器檢定過程中，由于檢定機(jī)構(gòu)配制溶液所用的甲醇試劑與現(xiàn)場流動相所用的甲醇試劑有差別，這就導(dǎo)致色譜圖中有一個大的溶劑峰，該峰會對積分結(jié)果有影響。目前色譜工作站均可以進(jìn)行積分事件的設(shè)定，把積分開始時間設(shè)定在溶劑峰之后就可以保證積分結(jié)果不會產(chǎn)生誤差。

（2）膽固醇樣品在不同廠家的儀器上重復(fù)性都很好，儀器狀態(tài)正常情況下進(jìn)樣7次即可滿足要求。

（3）膽固醇樣品在色譜柱內(nèi)保留較強(qiáng)，所用色譜柱長度不宜超過150 mm，這樣可以保證出峰時間在10 min以內(nèi)。

（4）RID檢測器對溫度變化比較敏感，所以必須設(shè)定柱溫箱溫度，一般原則是柱溫箱溫度要比室溫高約10℃，與檢測池溫度相近。

（5）現(xiàn)場檢定之前最好用甲醇試劑預(yù)先沖洗參比池，在1.0 mL／min的流量下沖洗約1 h。

［1］于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005: 36-37.

［2］戴傳波.采用帶示差折光檢測器的高效液相色譜法檢測肌醇［J］.化學(xué)工業(yè)與工程技術(shù)，2006，27(4): 57-58.

［3］戴傳波.示差折光檢測法檢測肌醇含量［J］.食品工業(yè)科技，2007，2007(4): 222-223.

［4］李風(fēng)華.液相色譜法測定山梨醇等幾種多元醇的含量［J］.當(dāng)代化工，2008，37(6): 669-671.

［5］顧艷杰.甘露醇注射液中甘露醇的含量測定［J］.中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2012，29(4): 108.

［6］徐燁.高效液相色譜法測定飲料中防腐劑和甜味劑［J］.分析檢測，2008，29(6): 339-341.

［7］霍芳.高效液相色譜-示差折光檢測技術(shù)研究進(jìn)展［J］.家畜生態(tài)學(xué)報，2013，34(7): 81-83.

［8］張慶合.高效液相色譜實用手冊［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008: 90-101.

［9］JJG 705-2014 液相色譜儀檢定規(guī)程［S］.

［10］JJG 705-2002 液相色譜儀檢定規(guī)程［S］.

［11］汪正范.色譜定性與定量［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000: 17-19.

微生物污染成食品安全首要問題

在國家食品藥品監(jiān)督管理總局指導(dǎo)下，中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會與幾十名包括院士、教授等在內(nèi)的專家聯(lián)合發(fā)布2014年國內(nèi)外食品安全熱點問題解讀報告。報告顯示，微生物污染成為2014年食品安全首要問題。

報告顯示，2014年，食品安全惡意造假事件受到扼制并開始逐漸減少，微生物污染、重金屬超標(biāo)及原料污染等常態(tài)食品安全事件成為主要的食品安全問題，并且這一類問題將是未來我國食品工業(yè)面臨的主要問題。38個熱點共涉及肉制品等12個主要行業(yè)，其中出現(xiàn)頻次較高的行業(yè)包括6個：肉制品、白酒、休閑食品、油脂、主糧、乳制品；38個熱點涉及到的關(guān)鍵詞主要包括7類：微生物、食品添加劑、重金屬、轉(zhuǎn)基因、塑化劑、地溝油、反式脂肪酸。微生物污染首次列為第一熱點。有專家指出，這顯示出公眾對食品安全的關(guān)注點正逐漸回歸中國食品安全的本源，與全球食品安全面臨的問題相吻合。

對于未來食品行業(yè)的發(fā)展，專家們指出，影響中國食品安全的主要因素——由于環(huán)境污染引發(fā)的我國產(chǎn)品原料污染等問題尚未有效化解。而原料污染必然傳導(dǎo)到食品工業(yè)，且這種困局短期內(nèi)難以有效化解。食品安全應(yīng)下功夫從產(chǎn)業(yè)鏈前端發(fā)力，從優(yōu)質(zhì)原料入手。

（ 中國分析計量網(wǎng)）

歐盟成功研制工業(yè)污染毒素檢測裝置

歐盟第七研發(fā)框架計劃(FP7)提供270萬歐元資助，總研發(fā)投入350萬歐元，由歐盟5個成員國荷蘭(總協(xié)調(diào))、德國、瑞典、捷克和斯洛伐克科技人員參與組成的歐洲SYSTEQ研發(fā)團(tuán)隊，從2009年2月開始，利用先進(jìn)的生物基因標(biāo)記技術(shù)，成功研制開發(fā)出更準(zhǔn)確的工業(yè)污染毒素檢測裝置。

SYSTEQ研發(fā)團(tuán)隊首先開發(fā)出工業(yè)污染物系統(tǒng)性毒素參照(TEQs)用于毒理學(xué)評估，并在此基礎(chǔ)上確認(rèn)毒素新的生物基因標(biāo)記。進(jìn)而通過生物基因表記與口服毒性標(biāo)記的比較研究，通過大量的反復(fù)實驗，從TEQs確認(rèn)的生物基因標(biāo)記中優(yōu)化篩選出被稱作為AHRR的基因標(biāo)記，同時證實被稱作CYP1A1的基因，也可作為人體毒素的檢測標(biāo)記。

研發(fā)團(tuán)隊利用AHRR生物基因表記對人體毒素和實驗動物類毒素之間的差異進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)人類相對實驗動物類對DLCs毒素具有更低的敏感性，意味著傳統(tǒng)上基于實驗動物類口服毒性標(biāo)記的毒素檢測被高估。

研發(fā)團(tuán)隊已在國際著名學(xué)術(shù)刊物上發(fā)表6篇科學(xué)論文，并為其新的檢測裝置申請了發(fā)明專利。研究成果已向歐委會提出申請，有可能成為新的全球工業(yè)污染毒素檢測標(biāo)準(zhǔn)。

(中國化工儀器網(wǎng))

Verification of the Differential Refractive Index Detector in Liquid Chromatographs

He Haihong, He Yajuan, Wang Weihua
(Chemical Metrology & Analytical Science Division, National Institute of Metrology, Beijing 100029, China)

A detailed interpretation about the verification of RID-10A type differential refractive index detector produced by SHIMADZU in liquid chromatographs as an example, the process was introduced to verify the differential refractive index detector of HPLC by the new verification regulation of liquid chromatographs JJG 705-2014. The reason of changes of the verification method was given and the advantages were introduced. A summary of the matters need to be attention for verification officers was made.

liguid chromatograph; verification regulation; differential refractive index detector

O657.7

A

1008-6145(2015)02-0095-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2015.02.028

*國家重大科學(xué)儀器設(shè)備開發(fā)專項(2013YQ51039104)

聯(lián)系人：何海紅；E-mail: hehh@nim.ac.cn

2015-01-29