• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    傳統(tǒng)奶豆腐中產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的分離篩選及其潛在益生菌特性

    2015-12-16 07:44:00楊亞威趙愛梅王輯楊貞耐
    中國乳品工業(yè) 2015年12期
    關鍵詞:膽鹽耐受性乳酸菌

    楊亞威,趙愛梅,王輯,楊貞耐

    (北京工商大學 食品質(zhì)量與安全北京實驗室,北京100048)

    0 引言

    乳酸菌(LAB)是一類可以利用碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)生大量乳酸的細菌的總稱。一些乳酸菌在發(fā)酵過程中能產(chǎn)生有利于人體健康的生理活性物質(zhì)胞外多糖[1-7]乳酸菌胞外多糖作為生物大分子,能夠改善發(fā)酵乳的流變學特性,增強產(chǎn)品的穩(wěn)定性和持水能力,并賦予產(chǎn)品良好的口感和風味[2]。

    傳統(tǒng)內(nèi)蒙古奶豆腐是采用新鮮牛奶或羊奶經(jīng)乳酸菌的天然發(fā)酵而制成的具有獨特風味的一類乳制品。自然發(fā)酵奶豆腐中蘊藏著許多具有優(yōu)良特性的乳酸菌,為乳酸菌的研究開發(fā)提供了寶貴的資源。

    本研究從內(nèi)蒙古不同地區(qū)采集奶豆腐樣品,對其中的乳酸菌進行分離鑒定,篩選具有優(yōu)良功能特性的菌株,重點對產(chǎn)胞外多糖菌株的潛在益生菌特性進行研究,以期獲得具有潛在應用價值的功能性乳酸菌菌株。

    1 實驗

    1.1 材料與試劑

    內(nèi)蒙古不同地區(qū)牧民自制的奶豆腐樣品;鼠李糖乳桿菌GG,由作者所在實驗室保藏;牛膽鹽、膽固醇、胃蛋白酶,氫氧化鉀,國藥集團;正己烷、冰醋酸、濃硫酸,蛋白酶K,PCR反應所需相關試劑,乳酸菌16S rDNA通用引物。

    1.2 儀器與設備

    高壓蒸汽滅菌器(MLS-3750),立式高速冷凍離心機(CR21GⅢ),紫外可見分光光度計(U-3900),數(shù)顯pH 計,正置熒光顯微鏡(BX53F),PCR儀(T100TM Thermal Cycler)。

    1.3 培養(yǎng)基

    SDM液體培養(yǎng)基:胰蛋白胨10 g,酵母氮源6.7 g,磷酸氫二鉀2 g,無水乙酸鈉5 g,檸檬酸鈉5 g,七水硫酸鎂0.2 g,硫酸錳0.05 g,葡萄糖20 g,吐溫-80(聚氧乙烯油酸基脫水山梨酸)1 mL,加水至1 000 mL,濃度為1 mol/L乙酸調(diào)pH=6.6。

    MRS液體培養(yǎng)基:葡萄糖20 g,蛋白胨10 g,牛肉膏10 g,酵母浸粉5 g,無水乙酸鈉5 g,檸檬酸鈉5 g,磷酸氫二鈉2 g,吐溫80 1 mL,七水硫酸鎂0.5 g,硫酸錳0.05 g,加水至1 000 mL,濃度為1 mol/L乙酸調(diào)pH=6.6。

    耐酸試驗培養(yǎng)基:用濃度為1 mol/L的鹽酸將MRS液體培養(yǎng)基的pH值調(diào)至2.5,115℃滅菌15 min。

    耐膽鹽試驗培養(yǎng)基:配制膽鹽質(zhì)量分數(shù)為1.0%的MRS液體培養(yǎng)基,115℃滅菌15 min。

    1.4 方法

    1.4.1 菌株的分離鑒定及系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建

    稱取1 g內(nèi)蒙古奶豆腐樣品,加入99 mL無菌PBS緩沖液(pH=6.5)中,充分振蕩混勻后,稀釋到10-4和10-5,取100 μL稀釋液涂布于MRS瓊脂平板上,置于37℃厭氧培養(yǎng)24~72 h,挑取典型單菌落,劃線分離純化。

    提取菌株的基因組DNA進行片段擴增:采用乳酸菌16S rDNA基因的通用引物,正向引物:A27F 5'-AGCGGATCACTTCACACAGGACTACGGC TACCTTGTTACGA-3',反向引物:A1495R 3'-GCAGAGTTCTCGGAGTCACGAAGAGTTTATCCTGGCTCAG-5',1.5%瓊脂糖凝膠電泳,目標片段長度約1 500 bp。PCR產(chǎn)物委托北京鼎國生物有限公司進行測序,將測序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫中的核酸序列進行比對。

    將所測菌株的16S rDNA序列用Blast軟件在GenBank數(shù)據(jù)庫中進行相似性比較,選取同源性較高的相關菌株的16S rDNA區(qū)域序列作為參比對象,采用MEGA5.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

    1.4.2 產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的篩選

    (1)胞外多糖標準曲線的繪制。葡萄糖標準曲線的繪制參照Dubois等[3]的方法

    (2)胞外多糖產(chǎn)量的測定。將活化好的菌株按2%接種于滅菌的SDM培養(yǎng)基中,置37℃培養(yǎng)18 h,然后于100℃水浴加熱15 min以滅活可能存在的降解多糖的酶類[4]。

    胞外多糖的提取參照RIMADA[5]等的方法,往滅酶冷卻的發(fā)酵液中加入質(zhì)量濃度為800 g/L的三氯乙酸溶液至終質(zhì)量濃度為40 g/L,室溫下攪拌2 h。在10 000 r/min下離心45 min去除細胞和蛋白。取上清液并加入兩倍體積的無水乙醇,4℃冷藏靜置12 h后10 000 r/min離心30 min,沉淀用蒸餾水溶解,再加兩倍體積無水乙醇,4℃靜置12 h后于10 000 r/min離心30 min,沉淀用蒸餾水溶解,裝入分子截流量為8 000~14 000的透析袋中透析24 h,每8 h換一次水。

    1.4.3 菌株在模擬人工胃液中的耐受性測定

    活化好的菌株按體積分數(shù)2%接種于pH值調(diào)至2.5的MRS液體培養(yǎng)基中;以MRS培養(yǎng)基(pH=6.6)為空白。在培養(yǎng)的第0,1,3 h時取出,用質(zhì)量分數(shù)為0.9%的滅菌生理鹽水進行梯度稀釋,并于MRS平板上涂布,每個稀釋梯度做3個平行樣,37℃培養(yǎng)48 h后計數(shù)。

    存活率=Nt/N0×100%,

    式中:N0和Nt分別為經(jīng)pH值為2.5的MRS液體培養(yǎng)基處理0和t小時后的活菌數(shù)(N0和Nt均為對數(shù)值)。

    1.4.4 菌株對高濃度膽鹽的耐受性測定

    將活化好的菌液按體積分數(shù)2%接種于膽鹽質(zhì)量分數(shù)為0.5%的MRS培養(yǎng)基中,以未添加膽鹽的MRS培養(yǎng)基為空白。在培養(yǎng)的第0,2,4 h時取出,用質(zhì)量分數(shù)為0.9%的滅菌生理鹽水進行梯度稀釋,并于MRS平板上涂布,每個稀釋梯度做3個平行樣,37℃培養(yǎng)48 h后計數(shù)。

    存活率=Nt/N0×100%,

    式中:Nt為含牛膽鹽MRS培養(yǎng)基處理t小時后活菌數(shù);N0為含牛膽鹽MRS培養(yǎng)基處理0小時后活菌數(shù)(N0和Nt均為對數(shù)值)。

    1.4.5 菌株疏水性測定

    參照WANG等的方法[6],將待測菌液于4℃、10 000 g下離心5 min,收集菌體,用滅菌的PBS緩沖液(pH=7.2)洗滌兩次,以緩沖液作為調(diào)零液,用PBS調(diào)整菌體濃度使其在560 nm下吸光度為1.00。然后取3 mL吸光度為1.00的菌液,分別加入0.6 mL的十六烷和甲苯,漩渦震蕩使其充分混合,待其靜置分層后取下層水相測定其在560 nm下測吸光度。疏水率計算公式為疏水率=(A0-A)/A×100%,

    式中:A0為菌液與吸附劑混勻前的吸光度;A為菌液與吸附劑混勻后的吸光度。

    1.4.6 菌株的體外降膽固醇能力測定

    將待測菌株依次傳代活化3代后使其恢復活力,按體積分數(shù)為3%接種于含有質(zhì)量濃度約100 μg/mL膽固醇的MRS-THIO培養(yǎng)基中,37℃恒溫培養(yǎng)24 h后,采用鄰苯二甲醛比色法[7]測定培養(yǎng)基中殘留膽固醇質(zhì)量濃度。

    將培養(yǎng)后的菌液離心(6 000 g,4 ℃,10 min),取上清液0.5 mL于18 mm×18 cm試管中,依次加入3 mL體積分數(shù)為95%的乙醇和2 mL質(zhì)量濃度為0.5 g/mL的氫氧化鉀溶液,漩渦震蕩混勻后置于60℃水浴中皂化10 min,迅速冷卻后加入5 mL正己烷,漩渦震蕩1 min進行萃取,靜置10 min后加入3 mL水,重復震蕩1 min后在室溫下靜置10 min,待分層后取2.5 mL正己烷層于15 mm×15 cm試管中,置于60℃水浴中用氮氣吹干溶劑,加入4 mL鄰苯二甲醛顯色劑,漩渦震蕩1 min后靜置10 min,加入2 mL濃硫酸震蕩1 min,室溫下靜置10 min后于550 nm處測吸光度,以不加菌株的含膽固醇培養(yǎng)基為空白對照,計算其膽固醇移除率(實驗重復3次),即膽固醇移除率=(A0-A1)/A0×100%,式中:A0為未接菌的MRS-THIO液體培養(yǎng)基在550 mm處的吸光度;A1為發(fā)酵上清液在550 mm處的吸光度。

    1.4.7 菌株的抑菌活性測定

    采用改進的Hechard等[8]的瓊脂平板擴散法。選取4株常見的致病菌:金黃色葡萄球菌CMCC26071、大腸桿菌CMCC44825、福氏志賀氏菌CMCC51061和鼠傷寒沙門氏菌CMCC50115,分別接種到適宜的瓊脂培養(yǎng)基上,無菌條件下放置5 h。待瓊脂板凝固后用直徑為8 mm的牛津杯在瓊脂培養(yǎng)基上打孔。將活化好的菌液,經(jīng)1 000 g、4℃離心10 min,收集上清液備用。為了排除過氧化氫以及乳酸的干擾,上清液應經(jīng)微孔濾膜過濾后再調(diào)pH6.0,同時添加無菌的過氧化氫酶(1 000 U/L)。取處理過的上清液50 μL加入到瓊脂板上的孔中,然后放到適宜條件下培養(yǎng)48 h。用直尺測量抑菌圈的直徑。抑菌效果按以下標準評定:當無抑菌圈時,代表無抑制作用(-);當抑菌圈直徑在0~3 mm之間,代表抑菌效果弱(+);當抑菌圈直徑在3~6 mm之間,代表抑菌效果良好(++);當抑菌圈直徑大于6 mm,代表抑菌效果強(+++)[9]。

    1.4.8 菌株的抗生素藥敏性測定

    采用改進的Charteris等[10]的方法。選用8種抗生素:青霉素、氯霉素、硫酸鏈霉素、硫酸慶大霉素、硫酸卡那霉素、鹽酸萬古霉素、頭孢噻肟和利福平。將活化好的菌株按體積分數(shù)3%接種到MRS液體培養(yǎng)基中,37 ℃培養(yǎng)至對數(shù)期(106~107mL-1)。取50 μL菌液到MRS瓊脂培養(yǎng)基平板上,涂布均勻,無菌條件下室溫放置1 h。待平板凝固后將抗生素藥敏紙片放至平板上,37℃培養(yǎng)24 h??股氐乃幟粜詤⒄誛HO提供的NCCLS最新版本的標準進行。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 奶豆腐中乳酸菌的分離鑒定

    從15個內(nèi)蒙古奶豆腐樣品中共分離得到51株革蘭氏染色陽性、過氧化氫酶陰性的菌株。對各菌株經(jīng)過DNA提取,16S rDNA PCR擴增,并進行瓊脂糖凝膠電泳,獲得片段長度在1 500 bp左右的特異性條帶。將獲得的特異性片段純化后進行測序,測序結(jié)果用Blast進行序列同源性比對,采用16S rDNA序列分析的方法鑒定,鑒定結(jié)果如表1所示。

    由表1可以看出,從奶豆腐中分離得到的51株乳酸菌包括植物乳桿菌13株(占25.49%),發(fā)酵乳桿菌9株,鼠李糖乳桿菌8株,乳酸片球菌7株,戊糖片球菌6株,融合魏斯氏菌4株,糞腸球菌2株,瑞士乳桿菌1株和副干酪乳桿菌1株。采用MEGA5.0軟件,選取本研究部分代表性菌株繪制系統(tǒng)發(fā)育樹,如圖1所示,這些菌株與對應NCBI上公布的菌株之間具有良好的親緣關系,進一步佐證了上述鑒定結(jié)果。由此可見,奶豆腐中乳酸菌種類豐富,數(shù)量繁多,其中以乳桿菌為優(yōu)勢菌株。周雨霞[11]對內(nèi)蒙古地區(qū)傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品中乳酸菌進行了分離鑒定,認為植物乳桿菌是該地區(qū)乳制品中的優(yōu)勢菌,與本文研究結(jié)果一致。

    2.2 產(chǎn)胞外多糖乳酸菌的篩選

    表1 奶豆腐中乳酸菌菌株鑒定結(jié)果

    用苯酚-硫酸法繪制葡萄糖標準曲線,公式為

    Y=0.0087X+0.0232,R2=0.9994,

    式中:Y為波長為490 nm處的吸光度A,X為溶液中胞外多糖質(zhì)量濃度。多糖產(chǎn)量質(zhì)量濃度在0到220 mg/L范圍內(nèi)線性關系良好。本研究選取了SDM[12]培養(yǎng)基來檢測乳酸菌代謝產(chǎn)生胞外多糖的情況。其中SDM培養(yǎng)基為改良的MRS培養(yǎng)基,去除了牛肉膏、蛋白胨等復雜成分的干擾。胞外多糖含量為樣品含糖量減去空白培養(yǎng)基的背景干擾值[13]。

    圖1 基于16SrRNA基因序列建立的系統(tǒng)發(fā)育樹

    對奶豆腐樣品中分離得到的51株乳酸菌在SDM培養(yǎng)基中的產(chǎn)胞外多糖情況進行了測定,結(jié)果表明,植物乳酸桿菌1-2、3-1、12-4和副干酪乳桿菌6-1在SDM培養(yǎng)基中的胞外多糖產(chǎn)量分別為31.27,15.04,22.02和24.10 mg/L,明顯高于對照益生性鼠李糖乳桿菌菌株GG的胞外多糖產(chǎn)量(7.62 mg/L)。鑒定結(jié)果表明編號為1-2、3-1和12-4的菌株為植物乳桿菌(GenBank登錄號分別為AB795645.1,EU419598.1和KM495856.2),編號為6-1的菌株為副干酪乳桿菌(GenBank登錄號KF149312.1)。本研究以下實驗對上述4株乳酸菌進行了潛在益生菌特性的分析測定,以鼠李糖乳桿菌GG作為對照菌株。

    2.3 菌株在模擬人工胃液中的耐受性

    益生菌通常是以食物攜帶或以制劑形式口服進入人體消化系統(tǒng)。然而,人體消化道系統(tǒng)不斷分泌胃液的酸性環(huán)境構(gòu)成了阻止大多數(shù)微生物進入腸道的天然屏障。人體空腹時胃液pH值一般在1.3~1.8之間,進食后上升到3.0左右或更高,食物在胃中需停留約3 h。因此,經(jīng)口腔攝入的益生菌必須耐受胃液的酸性環(huán)境、腸道的膽鹽環(huán)境和厭氧環(huán)境,并定植于腸道中,才能有效地在人體內(nèi)發(fā)揮其益生作用[14]。圖2為植物乳桿菌1-2、3-1和12-4和副干酪乳桿菌6-1對模擬人工胃液(pH=2.5)表現(xiàn)出不同程度的耐受性。在培養(yǎng)時間為1 h時,對照菌株鼠李糖乳桿菌GG的存活率為93.45%,而植物乳桿菌菌株1-2、3-1和12-4的存活率也均大于90%,副干酪乳桿菌6-1的存活率約80%。在模擬人工胃液中培養(yǎng)3 h后,各菌株的存活率明顯下降,鼠李糖乳桿菌GG存活率為51.62%,植物乳桿菌1-2和3-1的存活率達到65%以上,而植物乳桿菌12-4和副干酪乳桿菌6-1的存活率較低,約為47%。

    圖2 乳酸菌菌株在模擬人工胃液中的耐受性

    2.4 菌株對高濃度膽鹽的耐受性

    正常人體小腸中膽鹽質(zhì)量分數(shù)為0.03%~0.3%,經(jīng)口腔攝入的活性乳酸菌必須有一定的膽鹽耐受能力才能定植于小腸發(fā)揮其有益于人體健康的作用[15]。據(jù)報道,小腸是人體吸收膽固醇的重要場所,同時也是乳酸菌發(fā)揮其降膽固醇作用的主要部位[16]。由圖3可以看出,各菌株在膽鹽(0.5%)中的生長受到了不同程度的抑制。植物乳桿菌1-2、3-1和副干酪乳桿菌6-1對膽鹽的耐受性較強,培養(yǎng)4h后菌株的存活率達到90%以上,高于植物乳桿菌12-4(低于70%)和對照菌鼠李糖乳桿菌GG(低于80%)。據(jù)Cotter等[17]報道,乳酸菌必須以活性狀態(tài)能夠耐受胃液的酸性環(huán)境和膽鹽的抑制作用,才能順利到達腸道,因此同時具備較好的耐酸和耐膽鹽特性是益生菌的前提條件。本研究中,植物乳桿菌1-2和3-1的耐酸和耐膽鹽特性相對較強。

    圖3 不同膽鹽質(zhì)量分數(shù)下乳酸菌菌株的生長情況

    2.5 菌株的疏水性

    益生菌必須能夠有效地粘附于腸道粘膜并形成穩(wěn)定的生物屏障,才能抑制病原菌的入侵和增殖[18]。乳酸菌的疏水作用是乳酸菌與宿主之間相互作用的因素之一,與多種生物黏附現(xiàn)象有關,如組織表面的粘附、細菌間的集聚等[19]。本研究對各菌株的疏水性測定結(jié)果如圖4所示。對照菌鼠李糖乳桿菌GG對甲苯和十六烷的疏水率分別為19.47和15.68%,高于實驗菌株。而植物乳桿菌1-2的疏水性優(yōu)于其他3株受試菌,其對甲苯和十六烷的疏水率分別為15.07%和14.03%。趙維俊[20]等研究發(fā)現(xiàn),菌株的黏附特性與疏水性成正相關,疏水性高的菌株更有利于定植于腸道內(nèi)。本實驗篩選出的植物乳桿菌1-2具有較好的疏水性,有利于其黏附定植于腸道。

    2.6 菌株的體外降膽固醇能力

    血清膽固醇水平偏高易引起心腦血管疾病,雖然使用藥物可有效地降低膽固醇含量,但是同時具有一定的副作用,如橫紋肌溶解、肝功能損害以及使人嗜睡、惡心嘔吐等[21]。有研究表明,服用乳酸菌及其相關制品可以有效地減少人體血清中膽固醇的含量。WANG等[22]和ZHANG等[23]分別從西藏靈菇中分離出植物乳桿菌菌株MA2和菌株K25,通過體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn),2株植物乳桿菌均具有一定的降低小鼠體內(nèi)膽固醇的能力。

    圖4 乳酸菌菌株的疏水性比較

    由圖5中可以看出,本研究的4株乳酸菌均具有不同程度的體外降低膽固醇的能力。植物乳桿菌1-2的膽固醇降解率為44.33%。高于其他3株菌(降解率30%以上),但低于對照菌株鼠李糖乳桿菌LGG(降解率56%)。

    圖5 乳酸菌菌株對培養(yǎng)基中膽固醇的移除率

    2.7 菌株的抑菌活性

    乳酸菌在代謝過程中能產(chǎn)生各種具有抑菌活性的成分,如有機酸、過氧化氫和細菌素等,這些代謝產(chǎn)物通過抑制胃腸道中的有害菌,如大腸桿菌、沙門氏菌等,可以改善胃腸道的微生態(tài)環(huán)境[24,25]。

    由表2可知,本研究的4株乳酸菌對病原菌具有不同的抑制效果。4株受試菌株及對照菌株鼠李糖乳桿菌GG都對沙門氏菌和志賀氏菌具有較好的抑制作用,植物乳桿菌3-1和12-4還對大腸桿菌具有明顯的抑制作用。韓省等[26]從自釀酸奶中篩選出一株具有高抑菌活性的乳桿菌,其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有良好的抑菌效果。

    表2 乳酸菌菌株的抑菌作用

    表3 乳酸菌菌株的抗生素藥敏性

    2.8 菌株的抗生素敏感性

    抗生素藥敏性一般分為耐藥(R)、中度敏感(M)和敏感(S)3個等級。據(jù)Miller[27]和Simpson[28]等報道,Lactobacilli、Pediococci和 Leuconostoc spp.對萬古霉素具有天然的抗性。Essid等利用瓊脂片擴散法對分離自腌肉中的17株植物乳桿菌進行了藥敏性分析,結(jié)果表明,所有菌株均對諾氟沙星、慶大霉素、卡那霉素、頭孢呋辛和硫酸鏈霉素敏感,但對四環(huán)素具有耐藥性。由表3可知,本研究的4株乳酸菌對不同抗生素具有不同程度的耐藥性。4株乳酸菌對鏈霉素和萬古霉素都表現(xiàn)為耐藥,對卡那霉素、慶大霉素和青霉素的耐受性較好。而對于氯霉素、利福平和頭孢噻肟較為敏感。植物乳桿菌1-2和副干酪乳桿菌6-1可以耐受5種抗生素,而植物乳桿菌12-4可以耐受3種抗生素。

    3 結(jié)論

    本研究從內(nèi)蒙古奶豆腐中分離出51株乳酸菌,經(jīng)16S rDNA鑒定和菌株產(chǎn)胞外多糖情況分析,其中乳桿菌32株,有4株乳桿菌產(chǎn)胞外多糖,即植物乳桿菌菌株1-2、3-1和12-4以及副干酪乳桿菌6-1。對這些產(chǎn)胞外多糖菌株進行了模擬人工胃液耐受性、膽鹽耐受性、疏水性、體外降膽固醇、抗生素耐受性和過氧化氫耐受性的測定分析,植物乳桿菌菌株1-2和12-4具有良好的潛在益生菌特性,可應用于功能性產(chǎn)品的研究開發(fā)。

    [1]孫寶國,曹雁平,李健,等.食品科學研究前沿動態(tài)[J].食品科學技術(shù)學報,2014,32(2):1—11

    [2]RUAS-MADIEDOP,AL TINGAC,ZOONP.Effect of exopolysaccharides and proteolytic activity of Lactococcus lactis subsp.cremoris strains on the viscosity and structure of fermented milks[J].International Dairy Journal,2005,15:155-164.

    [3]DUBOIS M,GILLES K A,HAMILTOM H K,et al.Colorimetric method for determination of sugars and related substances[J].Analytical Chemistry,1956,28(3):350-356.

    [4]RIMADAPS,ABRAHAMAG.Comparative study of different methodologies to determine the exopolysaccharide produced by kefir grains in milk and whey[J].Lait,2003,83(1):79-87.

    [5]RIMADA P S,ABRAHAM A G.Comparative study of different methodologies to determine the exopolysaccharide produced by kefir grains in milk and whey[J].Lait,2003,83(1):79-87.

    [6]WANG Y C,YU R C,CHOU C C.Antioxidative activities of soymilks fermented with lactic acid bacteria and bifidobacteria[J].Food Microbiology,2006,23(2):128-135.

    [7]GILLILAND S E,NELSON C R,MAXWELL C.Assimilation of eholesterol by Laetobaeillus aeidophilus[J].Applied and Environmental Microbiology,1985,49(2):377-381.

    [8]HECHARDY,DHERBOMEZM,CENATIEMPO Y.et al.Antagonism of lactic acid bacteria from goat's milk agains pathogenic strains acessed by sandwich method.Lett.Appl.Microbiol,v.11,p.185-188,1990.

    [9]PAN XIAO DONG,CHEN FE QIN,WU TIAN-XING,et al.The acid,bile tolerance and antimicrobial property of Lactobacillus acidophilus NIT[J].Food Control,2009,20:598-602

    [10]CHARTERIS W P,KELLY P M,MORELLI L,et al.Antibiotic Susceptibility of Potentially Probiotic Lactobacillus Species[J].Food Prot,1998,61:1636-1643.

    [11]周雨霞.內(nèi)蒙古牧區(qū)傳統(tǒng)乳制品中乳桿菌生物學特性及其益生作用的研究[D].呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學,2005.

    [12]KIMMEL S A,ROBERTS R F.Development of a growth medium suitable for exopolysaccharide production by Lactobacillus delbrueckiissp.bulgaricus RR[J].International Journal of Food Microbiology 1998,40(1/2):87-92.

    [13]RIMADAP S,ABRAHAMAG.Comparative study of different methodologies to determine the exopolysaccharide produced by kefir grains in milk and whey[J].Lait,2003,83(1):79-87.

    [14]王玉華,高晶,馮印,等.鼠李糖乳桿菌耐酸及膽鹽能力研究[J].食品科學,2008,29(12):449-451.

    [15]GILL ILAND S E,STALEY T E,BUSH L J.Importance in bile tolerance of Lactobacillus acidophilus used as diatery adjunct[J].J Dairy Sci,1984,67:3045-3051.

    [16]劉長建,劉秋,姜波.類植物乳桿菌的耐酸、耐膽鹽及降解膽固醇特性[J].微生物學報 49(9):1176-1179.

    [17]COTTER P D,HILL C.Surviving the acid test:Responses of gram positive bacteria to low pH[J].Microbiol Mol Bio Rev,2003,67:429-453.

    [18]郭興華.益生菌基礎與臨床[M].北京科學技術(shù)出版社,20021361.

    [19]JONES D S,GORMAN S P,Mc CAFFERTY D F,et aL The effects of three non-antibiotic,antimicrobial agents on the surface hydrophobicity of certain micro-organisms evaluated by different methods[J].Applied Microbiology,1991,71:218-227.

    [20]趙維俊,呂嘉櫪,馬強,等.嗜酸乳桿菌的表面疏水性分析[J].乳品工業(yè),2011,39(10):8-11.

    [21]MASON W F CHRISTINE J.The Harvard Medical School Guide to Lowering Your Cholesterol[M].侯米莎等,譯.北京:中國婦女出版社,2006:100-10.

    [22]WANG YAN PING,XU NV,XI AO-DENG,et al.Effects of Lactobacillus plantarum MA2 isolated from Tibet kefir on lipid metabolism and intestinal microflora of rats fed on high-cholesterol diet[J].Applied Microbiology and Biotechnology,2009,84(2):341-347.

    [23]ZHANG LI,ZHANG XUE,LIU CHUN HONG,et al.Manufacture of Cheddar cheese using probiotic Lactobacillus plantarum K25 and its cholesterol-lowering effects in a mice model[J].World Journal of Microbiology and Biotechnology,2013,29(1):127-135.

    [24]GULAHMADOV S G,ABDULLAEVA N F,GUSEINOVA N F,et al.Isolation and characterization of bacterio cinlike inhibitory Substances from lactic acid bacteria isolated from azerbaijan Cheeses[J].Applied Biochemistry and Microbiology,2009,45:266-271.

    [25]郭本恒.益生菌[M].北京:化學工業(yè)出版社,2004:5-120.

    [26]韓省,馮書珍.高抑菌活性乳酸桿菌的篩選及性質(zhì)[J].生物加工過程,2011,9(2):45-48.

    [27]HAMILTON-MILLER J M T,SHAH S.Vancomycin susceptibility as an aid to the identification of lactobacilli[J].Letters in Applied Microbiology,1998,26(2):153-154.

    [28]SIMPSON W J,HAMMOND J R M,MILLER R B.Avoparcin and vancomycin:useful antibiotics for the isolation of brewery lactic acid bacteria[J].Journal of Applied Microbiology,1988,64(4):299-309.

    猜你喜歡
    膽鹽耐受性乳酸菌
    乳桿菌在膽鹽 MRS 培養(yǎng)基中的傳代穩(wěn)定性
    Ligilactobacillus sp.BD7642關鍵膽鹽水解酶的發(fā)掘
    禽用乳酸菌SR1的分離鑒定
    4個地被菊新品系對濕熱脅迫的耐受性研究
    園林科技(2020年2期)2020-01-18 03:28:18
    提高乳酸菌耐膽鹽能力的研究
    生物化工(2020年3期)2020-01-07 23:51:31
    巴氏醋桿菌核酸修復酶UvrA對大腸桿菌耐受性的影響
    miR-29b通過靶向PI3K/Akt信號通路降低胃癌細胞對順鉑的耐受性
    乳酸菌成乳品市場新寵 年增速近40%
    阿米替林治療腦卒中后中樞痛的療效和耐受性分析
    乳飲品中耐胃酸乳酸菌的分離鑒定與篩選
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:04
    精品一区二区三区视频在线 | 一区二区三区激情视频| 色老头精品视频在线观看| 黄色日韩在线| 一本综合久久免费| netflix在线观看网站| 精品国产乱子伦一区二区三区| 精品一区二区三区av网在线观看| 最新美女视频免费是黄的| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 夜夜夜夜夜久久久久| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 人妻久久中文字幕网| 美女 人体艺术 gogo| 黄色片一级片一级黄色片| 国产真实乱freesex| 日韩有码中文字幕| 青草久久国产| 欧美日韩一级在线毛片| 熟女人妻精品中文字幕| 国内精品久久久久久久电影| 青草久久国产| 99精品久久久久人妻精品| 国产成人aa在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 老司机午夜福利在线观看视频| 婷婷丁香在线五月| 99久久综合精品五月天人人| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国产久久久一区二区三区| av黄色大香蕉| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 婷婷亚洲欧美| 亚洲专区国产一区二区| 国产精品亚洲一级av第二区| 又紧又爽又黄一区二区| 国产乱人伦免费视频| 国产视频一区二区在线看| 一区二区三区激情视频| 三级国产精品欧美在线观看 | 午夜精品久久久久久毛片777| 成人性生交大片免费视频hd| 99久久精品国产亚洲精品| 性欧美人与动物交配| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 欧美大码av| 可以在线观看毛片的网站| 欧美日本视频| 日韩国内少妇激情av| 手机成人av网站| 国产极品精品免费视频能看的| 男人舔奶头视频| 国产三级在线视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品不卡国产一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日本黄大片高清| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产97色在线日韩免费| 狂野欧美激情性xxxx| 国产精品永久免费网站| 免费观看精品视频网站| 看黄色毛片网站| netflix在线观看网站| 国产黄片美女视频| 三级国产精品欧美在线观看 | 又大又爽又粗| 国产淫片久久久久久久久 | 一本综合久久免费| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品99久久久久久久久| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国内精品美女久久久久久| 亚洲真实伦在线观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 一a级毛片在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 宅男免费午夜| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲九九香蕉| 久久中文字幕人妻熟女| 91在线精品国自产拍蜜月 | 天堂网av新在线| 日本一本二区三区精品| 国产精品野战在线观看| 看片在线看免费视频| 99精品在免费线老司机午夜| 人人妻人人看人人澡| 搡老熟女国产l中国老女人| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲专区国产一区二区| 国产爱豆传媒在线观看| 免费看a级黄色片| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 十八禁网站免费在线| 亚洲无线在线观看| 久久中文字幕一级| 久久亚洲真实| 国产淫片久久久久久久久 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产成+人综合+亚洲专区| 婷婷亚洲欧美| 国产精品久久久久久久电影 | 三级国产精品欧美在线观看 | 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产日本99.免费观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美一级a爱片免费观看看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 精品国产亚洲在线| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲乱码一区二区免费版| 欧美午夜高清在线| 国产精品女同一区二区软件 | 热99re8久久精品国产| www.精华液| 亚洲成av人片在线播放无| 岛国在线观看网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久久国产欧美日韩av| 久久亚洲精品不卡| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 免费看美女性在线毛片视频| 岛国在线免费视频观看| 亚洲人成电影免费在线| 人妻久久中文字幕网| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久精品国产综合久久久| 一本综合久久免费| 在线观看免费视频日本深夜| 一区二区三区高清视频在线| 日韩成人在线观看一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 舔av片在线| 美女cb高潮喷水在线观看 | 亚洲 国产 在线| 少妇丰满av| 成年女人永久免费观看视频| 久久亚洲真实| 美女高潮的动态| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品影院久久| 97超视频在线观看视频| 性色av乱码一区二区三区2| 久久九九热精品免费| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久久久久久久免费视频了| 欧美乱色亚洲激情| 国产99白浆流出| www日本黄色视频网| 亚洲精品色激情综合| 极品教师在线免费播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美最黄视频在线播放免费| 黄色成人免费大全| 无遮挡黄片免费观看| 久久香蕉国产精品| 国模一区二区三区四区视频 | 97碰自拍视频| 一进一出好大好爽视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 香蕉国产在线看| 少妇的丰满在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久国产精品影院| 亚洲美女视频黄频| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产美女午夜福利| 99国产精品99久久久久| 1000部很黄的大片| 午夜影院日韩av| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 男女床上黄色一级片免费看| a在线观看视频网站| 免费看日本二区| 99国产精品一区二区三区| 动漫黄色视频在线观看| 在线视频色国产色| 久久香蕉国产精品| 成人无遮挡网站| 无人区码免费观看不卡| 天堂影院成人在线观看| 看黄色毛片网站| 国产一区二区三区视频了| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久久久精品国产欧美久久久| 免费在线观看日本一区| 特级一级黄色大片| 999久久久国产精品视频| 免费电影在线观看免费观看| 国产成人精品无人区| 无人区码免费观看不卡| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 此物有八面人人有两片| 丰满人妻一区二区三区视频av | 男人舔奶头视频| 亚洲熟妇熟女久久| 中亚洲国语对白在线视频| 国产97色在线日韩免费| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩欧美 国产精品| 久久久久久国产a免费观看| 成人av在线播放网站| 一级毛片女人18水好多| 亚洲专区国产一区二区| 啦啦啦免费观看视频1| 九九热线精品视视频播放| 99国产精品一区二区蜜桃av| 男女视频在线观看网站免费| 后天国语完整版免费观看| 国产久久久一区二区三区| 一个人看视频在线观看www免费 | 18禁观看日本| 天堂动漫精品| 久久午夜亚洲精品久久| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 一区二区三区高清视频在线| 丰满人妻一区二区三区视频av | 久久这里只有精品中国| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 男女那种视频在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲七黄色美女视频| 桃色一区二区三区在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久天堂一区二区三区四区| 国产成人影院久久av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产高清激情床上av| 国产成人精品久久二区二区91| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 成人三级黄色视频| 国产高清有码在线观看视频| 免费看日本二区| 超碰成人久久| 91av网一区二区| 成人午夜高清在线视频| 精品久久蜜臀av无| 757午夜福利合集在线观看| av天堂在线播放| 亚洲精品粉嫩美女一区| 青草久久国产| 久久伊人香网站| 在线观看免费视频日本深夜| av国产免费在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产探花在线观看一区二区| 久久香蕉精品热| 香蕉av资源在线| 禁无遮挡网站| www.精华液| av天堂中文字幕网| 久久中文看片网| 国产亚洲精品久久久com| 99热这里只有是精品50| 亚洲电影在线观看av| АⅤ资源中文在线天堂| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产高清三级在线| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲片人在线观看| 欧美黑人巨大hd| 国产激情久久老熟女| 成人欧美大片| 欧美日韩综合久久久久久 | 中文资源天堂在线| 日本黄大片高清| 欧美日本亚洲视频在线播放| 香蕉丝袜av| 成年免费大片在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 嫩草影院入口| 亚洲在线自拍视频| 久久久久久人人人人人| 九九热线精品视视频播放| 又爽又黄无遮挡网站| 91九色精品人成在线观看| 国产野战对白在线观看| 久久久国产精品麻豆| 欧美日韩一级在线毛片| 看免费av毛片| 91字幕亚洲| 听说在线观看完整版免费高清| 精品无人区乱码1区二区| 欧美日韩国产亚洲二区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 99riav亚洲国产免费| 怎么达到女性高潮| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 三级毛片av免费| 国产免费男女视频| 久久亚洲精品不卡| 免费人成视频x8x8入口观看| 婷婷丁香在线五月| 国产视频一区二区在线看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 精品一区二区三区四区五区乱码| 人人妻人人看人人澡| 亚洲无线在线观看| 国产成人av教育| 亚洲午夜理论影院| 午夜影院日韩av| 国产精品久久视频播放| 男女那种视频在线观看| 午夜福利高清视频| 久久精品综合一区二区三区| 午夜激情欧美在线| 黑人操中国人逼视频| 国产一区在线观看成人免费| 俺也久久电影网| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久精品人妻少妇| 亚洲中文av在线| 国产成人av教育| 免费看光身美女| 国产精品久久久人人做人人爽| www.www免费av| 成人欧美大片| 成人三级黄色视频| 午夜亚洲福利在线播放| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日本黄色视频三级网站网址| 久久人人精品亚洲av| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美在线黄色| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| av国产免费在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 啦啦啦免费观看视频1| 午夜视频精品福利| 国产视频一区二区在线看| 精品国产亚洲在线| 一区二区三区高清视频在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲欧美精品综合久久99| av天堂中文字幕网| 国产精品九九99| 99久久综合精品五月天人人| 99视频精品全部免费 在线 | 观看免费一级毛片| 大型黄色视频在线免费观看| 黄色视频,在线免费观看| 午夜成年电影在线免费观看| 1000部很黄的大片| 黄色视频,在线免费观看| 日本在线视频免费播放| 国产高清视频在线播放一区| 黄频高清免费视频| 99热这里只有是精品50| 999久久久国产精品视频| 亚洲国产精品成人综合色| 怎么达到女性高潮| 人人妻人人澡欧美一区二区| www.www免费av| 9191精品国产免费久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| tocl精华| 99国产精品一区二区三区| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲人与动物交配视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 88av欧美| 色视频www国产| 一级黄色大片毛片| 国产午夜精品久久久久久| 成人亚洲精品av一区二区| 全区人妻精品视频| 综合色av麻豆| www.精华液| 91字幕亚洲| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 哪里可以看免费的av片| 国产日本99.免费观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 成人特级av手机在线观看| 在线播放国产精品三级| 成人国产一区最新在线观看| 久久久久国内视频| 中文资源天堂在线| 久久中文看片网| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美日韩综合久久久久久 | АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 久久中文字幕人妻熟女| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲美女黄片视频| 亚洲成av人片免费观看| 不卡av一区二区三区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产99白浆流出| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 成人一区二区视频在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 后天国语完整版免费观看| 日本熟妇午夜| 十八禁网站免费在线| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产亚洲av高清不卡| 久久久精品欧美日韩精品| 精品久久久久久久久久久久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久久久九九精品影院| 搡老熟女国产l中国老女人| 美女黄网站色视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲黑人精品在线| 国产亚洲精品av在线| 波多野结衣高清作品| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产亚洲精品av在线| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 91麻豆av在线| 成年女人看的毛片在线观看| 久久香蕉国产精品| 亚洲国产精品久久男人天堂| av天堂在线播放| tocl精华| 手机成人av网站| 听说在线观看完整版免费高清| 最近最新中文字幕大全电影3| 精华霜和精华液先用哪个| 在线免费观看不下载黄p国产 | 婷婷六月久久综合丁香| 桃色一区二区三区在线观看| 黄色 视频免费看| 又大又爽又粗| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| aaaaa片日本免费| 桃色一区二区三区在线观看| 日韩欧美 国产精品| 俺也久久电影网| 国产乱人伦免费视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲激情在线av| 成人三级做爰电影| 午夜福利高清视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 99久国产av精品| 日本成人三级电影网站| 亚洲av免费在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 午夜免费成人在线视频| 日本a在线网址| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 一进一出好大好爽视频| 亚洲国产色片| 特级一级黄色大片| av欧美777| 一本久久中文字幕| 国产激情欧美一区二区| 日韩欧美国产一区二区入口| 听说在线观看完整版免费高清| 中出人妻视频一区二区| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 桃色一区二区三区在线观看| 不卡av一区二区三区| 在线永久观看黄色视频| 久久午夜亚洲精品久久| 中文字幕av在线有码专区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国内精品久久久久精免费| 好男人电影高清在线观看| 成人午夜高清在线视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 露出奶头的视频| 亚洲av片天天在线观看| 变态另类丝袜制服| 国产成人av激情在线播放| 丰满的人妻完整版| 国产久久久一区二区三区| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 成年女人毛片免费观看观看9| 午夜影院日韩av| 免费在线观看成人毛片| 日本黄大片高清| 一本久久中文字幕| 日本成人三级电影网站| 色播亚洲综合网| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 日韩欧美免费精品| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久久久国产a免费观看| 成人欧美大片| 国产成人福利小说| 国内精品久久久久精免费| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美大码av| 91麻豆精品激情在线观看国产| 级片在线观看| 免费av毛片视频| 一本精品99久久精品77| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 中出人妻视频一区二区| 精华霜和精华液先用哪个| 女人被狂操c到高潮| 日韩成人在线观看一区二区三区| 一进一出抽搐动态| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 日本黄大片高清| 午夜精品久久久久久毛片777| 999精品在线视频| 国产淫片久久久久久久久 | 黄片大片在线免费观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 精品不卡国产一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 日本 欧美在线| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 夜夜爽天天搞| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲五月婷婷丁香| 在线a可以看的网站| 亚洲五月婷婷丁香| 国产一区二区三区视频了| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 日本三级黄在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 精品久久久久久久久久久久久| 91麻豆精品激情在线观看国产| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲专区字幕在线| 国产成人福利小说| 日韩欧美国产在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 久久精品91无色码中文字幕| 国产伦一二天堂av在线观看| www.999成人在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 欧美一区二区精品小视频在线| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲人成电影免费在线| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 制服人妻中文乱码| 亚洲美女视频黄频| xxxwww97欧美| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久精品91无色码中文字幕| 一本综合久久免费| 哪里可以看免费的av片| 亚洲国产精品久久男人天堂| 一个人看的www免费观看视频| 久久久精品欧美日韩精品| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲国产看品久久| 在线免费观看不下载黄p国产 | 99久国产av精品| 成人国产一区最新在线观看| 久久久久国内视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 综合色av麻豆| 99热精品在线国产| 香蕉av资源在线| 国产激情久久老熟女| 日韩成人在线观看一区二区三区| 一本一本综合久久| 久久精品人妻少妇| 久久草成人影院| 亚洲激情在线av| 国产av麻豆久久久久久久| 嫩草影院精品99| 欧美不卡视频在线免费观看| 中国美女看黄片| 亚洲电影在线观看av| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产亚洲欧美在线一区二区| 9191精品国产免费久久| 两个人视频免费观看高清|