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    脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選

    2015-12-10 06:22:00劉俊杰劉茜陳曉寧姜俊慧
    中國(guó)果菜 2015年4期
    關(guān)鍵詞:橄欖油脂肪酶瓊脂

    劉俊杰 劉茜 陳曉寧 姜俊慧

    (山東綠葉制藥有限公司,山東煙臺(tái) 264003)

    脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選

    劉俊杰 劉茜 陳曉寧 姜俊慧

    (山東綠葉制藥有限公司,山東煙臺(tái) 264003)

    脂肪酶主要應(yīng)用于食品工業(yè),本研究從10份土壤樣品中通過(guò)富集培養(yǎng)分離出6株產(chǎn)脂肪酶發(fā)酵,平板劃線(xiàn);然后對(duì)脂肪酶的性質(zhì)進(jìn)行研究,以葡萄糖1.5%、硫酸銨0.7%、磷酸氫二鉀0.1%、牛肉膏1.25%、硫酸鎂0.211%、橄欖油乳化液1.41%為發(fā)酵培養(yǎng)基,在250r/min、30℃下培養(yǎng)72h。此時(shí)可獲得高產(chǎn)的脂肪酶菌株。酶活力的最適條件:溫度50℃,pH 8.5,水浴30min。此時(shí)測(cè)定的酶活力最大。最后,對(duì)分離菌株進(jìn)行常規(guī)方法的細(xì)菌鑒定。

    微生物;脂肪酶;篩選

    脂肪酶是一類(lèi)非常重要的水解酶,是目前應(yīng)用最為廣泛的工業(yè)用酶之一,脂肪酶目前主要應(yīng)用于食品工業(yè)。利用脂肪酶作用后釋放出的鏈較短的脂肪酸,增加和改進(jìn)食品的風(fēng)味和香味;利用脂肪酶催化的醇解和酯化反應(yīng)來(lái)生產(chǎn)各種香精酯,作調(diào)料劑;使用具有1,3-專(zhuān)一性的微生物脂肪酶提高食用油營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和增加食用油的花色品種,制備代可可酯等高檔油脂;另外,脂肪酶還可以用于酒類(lèi)的去濁除渣、改善面包質(zhì)量,改善蛋白的發(fā)泡等等方面。脂肪酶廣泛存在于動(dòng)植物和微生物中,來(lái)源廣泛。在各種來(lái)源的脂肪酶中,以細(xì)菌脂肪酶在有機(jī)相催化的反應(yīng)類(lèi)型最多、反應(yīng)活性及穩(wěn)定性最高,其中假單孢菌屬菌株所產(chǎn)脂肪酶尤為顯著。脂肪酶(Lipase EC3.1.1.3)又稱(chēng)三?;视王;饷福且环N特殊的酯鍵水解酶,它不需要輔酶即可催化油水界面的甘油三酯水解生成甘油及長(zhǎng)鏈脂肪酸。脂肪酶的水解底物一般為天然油脂,水解部位是底物甘油三酯中1(或3)位和2位的酯鍵,反應(yīng)產(chǎn)物為甘油二酯、甘油單酯、甘油和脂肪酸。從催化特性來(lái)看,脂肪酶可以催化酯類(lèi)化合物的分解、合成以及酯交換,具有化學(xué)選擇性和高度的立體異構(gòu)專(zhuān)一性,且此反應(yīng)不需輔酶,反應(yīng)條件溫和,副產(chǎn)物少。脂肪酶反應(yīng)的重要特征是異相系統(tǒng)反應(yīng)(即在油—水的界面上作用)或有機(jī)相中的作用。這不僅發(fā)展了“界面酶學(xué)”,也促進(jìn)了“非水酶學(xué)”的研究[1-5]。脂肪酶主要采用從生物體中提取的方法來(lái)獲得,但由于動(dòng)植物含酶量少、生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、培養(yǎng)條件復(fù)雜,因此在制取酶時(shí)常以微生物作為原料,并且微生物資源豐富,生產(chǎn)不受自然環(huán)境的影響,可用人工控制來(lái)大量生產(chǎn)目的酶。此種方法產(chǎn)酶周期短,生產(chǎn)成本低,是一種經(jīng)濟(jì)而實(shí)用的方法。

    脂肪酶作為新的生物催化劑有著得天獨(dú)厚的優(yōu)越性,其在此方面的應(yīng)用需進(jìn)行更深入的研究。利用脂肪酶催化技術(shù)轉(zhuǎn)化廢棄油脂為生物柴油,不僅拓寬了脂肪酶的應(yīng)用范圍,提供了可替代能源,而且可變廢為寶,減少環(huán)境污染。本課題的目的是篩選具有脂肪酶高產(chǎn)活性的菌株,為下一步研究其催化活性作準(zhǔn)備。

    1 材料與設(shè)備

    1.1 材料與試劑

    聚乙烯醇(PVA),上海石化水處理廠(chǎng)。橄欖油,化學(xué)純,上海化學(xué)試劑供應(yīng)站。蛋白胨、牛肉膏、瓊脂、黃豆粉、葡萄糖,青島高科園海博生物技術(shù)有限公司。磷酸二氫鉀,七水硫酸鎂、氯化鈉、硝酸鈉、氫氧化鈉,化學(xué)純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。硫酸銨,化學(xué)純,天津市永大化學(xué)試劑有限公司。碳酸鈉,化學(xué)純,天津博迪化工股份有限公司。維多利亞藍(lán)B,化學(xué)純,天津河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠(chǎng)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    HC-TP11-5架盤(pán)藥物天平,上海精科天平儀器廠(chǎng);

    ALC110.4電子天平,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;

    DK-S24型電熱恒溫水浴鍋,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;

    臺(tái)式離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng);

    SW-CJ-1G型凈化工作臺(tái),蘇州凈化設(shè)備有限公司;

    SK-1快速混勻器,金壇市富華儀器有限公司;

    SHP-2500型低溫生化培養(yǎng)箱,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;

    HZQ-Q全溫振蕩器,東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司;

    顯微鏡,奧林巴斯;

    高溫滅菌鍋。

    2 方法

    2.1 培養(yǎng)基的制備

    2.1.1 富集培養(yǎng)基的配置

    富集培養(yǎng)基的組成包括橄欖油2.0%、硫酸銨0.5%、蛋白胨1.0%、磷酸氫二鉀0.5%、七水硫酸鎂0.1%,用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至9.5~10.0。

    2.1.2 肉汁胨培養(yǎng)基的配置

    肉汁胨培養(yǎng)基的組成成分主要包括牛肉膏為0.3%,蛋白胨為1.0%,氯化鈉為0.5%,瓊脂為1.5%~2.0%,pH為7.0~7.2。

    2.1.3 平板分離培養(yǎng)基的配置

    在肉汁胨培養(yǎng)基中加入2.5%橄欖油和1.5%瓊脂,用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至9.5~10.0,滅菌后冷卻到60℃,加入維多利亞藍(lán)B(4mg/100mL),保持無(wú)菌條件乳化1min倒平板。

    2.1.4 初篩培養(yǎng)基的配置

    橄欖油雙層瓊脂平板,底層含瓊脂1.5%、橄欖油0.5%,分裝試管(10mL/支),滅菌后乳化(快速混勻),倒平板;表層為肉汁胨培養(yǎng)基(含1.5%瓊脂),分裝試管(10mL/支)滅菌,待底層凝固后倒平板。

    2.1.5 復(fù)篩培養(yǎng)基的配置

    復(fù)篩培養(yǎng)基的組成包括黃豆粉2.0%、玉米漿2.0%、可溶性淀粉1.0%、磷酸氫二鉀0.5%、硝酸鈉0.5%,pH為9.0,300mL三角瓶裝液30mL,0.1MPa滅菌20min。

    2.1.6 發(fā)酵培養(yǎng)基的配置組成

    發(fā)酵培養(yǎng)基的組成包括葡萄糖1.5%、硫酸銨0.7%、磷酸氫二鉀0.1%、牛肉膏1.25%、硫酸鎂0.211%、橄欖油乳化液1.41%,300mL三角瓶裝液,121℃滅菌20min。

    2.2 土樣的采集

    從濟(jì)南、威海、青島、濰坊、煙臺(tái)等地采集了啤酒廠(chǎng)、面粉廠(chǎng)、菜市場(chǎng)、污水場(chǎng)附近土樣10份。

    2.3 土樣的處理

    稱(chēng)取1g土樣,加入盛有10mL無(wú)菌水的試管中,充分震蕩,靜置。

    2.4 菌種的篩選

    2.4.1 富集培養(yǎng)

    取處理后的土樣上清液5mL加入盛有25mL富集培養(yǎng)基的三角瓶中,30℃、150r/min搖瓶培養(yǎng)。3~5d后,移取5mL培養(yǎng)液至另一盛有富集培養(yǎng)基的三角瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。重復(fù)同樣操作2~3次,平板分離[6]。

    2.4.2 平板分離

    用接種環(huán)沾取一定量的經(jīng)過(guò)富集培養(yǎng)的菌液,在平板上劃線(xiàn),30℃培養(yǎng)2~3d。

    2.4.3 斜面保藏

    將平板中有藍(lán)綠色變色圈的菌落挑至肉汁胨培養(yǎng)基上保藏,供初篩用。

    2.4.4 初篩

    將平板分離到的菌株從新鮮斜面上用無(wú)菌水洗下,經(jīng)適當(dāng)稀釋后涂布初篩培養(yǎng)基,30℃培養(yǎng)3d。將初篩中透明圈較大的菌落挑至肉汁胨斜面培養(yǎng)基上保藏,供復(fù)篩用。

    2.4.5 復(fù)篩培養(yǎng)

    挑取一環(huán)新鮮肉汁胨斜面種子,接入肉汁胨液體種子培養(yǎng)基中,30℃、150r/min培養(yǎng)24h。然后取1mL液體種子于發(fā)酵培養(yǎng)基中,在溫度30℃、搖床轉(zhuǎn)速150r/min條件下,搖瓶發(fā)酵72h。發(fā)酵液離心(3000r/min,20min),取上清液測(cè)酶活。

    2.4.6 發(fā)酵培養(yǎng)

    取酶活性高的菌株發(fā)酵液5mL,接入到發(fā)酵培養(yǎng)集中,30℃、220r/min下72h。然后取發(fā)酵液于3000r/min條件下離心20min,取上清液測(cè)酶活。

    2.5 脂肪酶活性的檢測(cè)

    2.5.1 酶活的定義

    在40℃、pH9.0的條件下,水解橄欖油每分鐘產(chǎn)生1μmol游離脂肪酸所需的酶量單位(U)[7]。

    2.5.2 固體瓊脂平板測(cè)定法

    1)瓊脂平板的制備

    分別將2.5g瓊脂粉、6.25mL橄欖油、0.2g/L聚乙烯醇18.75mL、0.1g/L維多利亞藍(lán)B 2.5mL,加入500mL三角瓶中,加熱溶解瓊脂粉,趁熱用高速組織搗碎機(jī)均質(zhì),倒平皿,靜置冷卻,制成含酶作用底物和指示劑的固體瓊脂平板。

    2)應(yīng)用平板法測(cè)定酶活性

    在已制成的固體瓊脂平板上用打孔器打孔(直徑3.5mm),打孔后用注射針頭將孔內(nèi)瓊脂挑出,在酒精燈上烘烤背面,使瓊脂與平皿底部貼緊,將30μL待測(cè)酶液加入孔中,置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)一段時(shí)間,定時(shí)觀(guān)察孔周?chē)淖兩闆r。變色圈越大說(shuō)明產(chǎn)酶的能力越強(qiáng),反之則越弱。

    3)堿性脂肪酶活力測(cè)定

    橄欖油與2%聚乙烯醇溶液以1:5體積比進(jìn)行混合,高速勻漿,成為乳白色均勻穩(wěn)定的乳化液。以橄欖油乳化液為底物,在pH 9.5、40℃下,反應(yīng)30min,用滴定法測(cè)定產(chǎn)生的脂肪酸,以分解底物(橄欖油)釋放出1mmol/min游離脂肪酸所需酶量定義為1個(gè)堿性脂肪酶活力國(guó)際單位(IU),以IU/mL表示[8]。

    2.6 菌種的保藏

    經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)篩到合適的菌株后,需要將菌株進(jìn)行保藏。

    2.6.1 凍存液的配置

    配置凍存液10mL,凍存液的組成包括甘油1g、氯化鈉0.09g、純化水9.2mL。

    2.6.2 方法

    10mL凍存液分裝到10個(gè)無(wú)菌的1.5mL離心管,在無(wú)菌條件下,從相應(yīng)斜面上挑取一大環(huán)菌體(因?yàn)樵趦龃孢^(guò)程中會(huì)有部分菌體死亡)接入離心管中,做好標(biāo)記,然后放入冰箱中凍存。

    2.7 脂肪酶酶學(xué)性質(zhì)的測(cè)定

    2.7.1 酶最適作用溫度

    在不同溫度下(20℃、30℃、40℃、50℃、60℃)進(jìn)行酶活測(cè)定,得到相同的酶液在不同的反應(yīng)溫度下所具有的酶活力單位[9]。

    2.7.2 酶最適作用pH

    配制11種從pH 5~10,間隔為0.5pH單位的緩沖液,利用平板測(cè)定法測(cè)出酶反應(yīng)的最適pH。

    2.7.3 反應(yīng)時(shí)間對(duì)酶活的影響

    將酶在不同的靜置時(shí)間(5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min)取樣測(cè)定酶反應(yīng)液中酶的活力,作圖。

    2.7.4 穩(wěn)定時(shí)間對(duì)酶活的影響

    根據(jù)反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短在5~40min間隔相同時(shí)間取樣,測(cè)定反應(yīng)結(jié)束后酶活性的變化情況并作圖。

    2.8 高活性菌株的分離鑒定

    根據(jù)菌株的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征及主要生理生化特征對(duì)篩選出的高活力的菌株進(jìn)行鑒定。菌種生理生化鑒定主要參考《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[10]。

    通過(guò)對(duì)所篩選出的菌株進(jìn)行普通的細(xì)菌染色,觀(guān)察其形態(tài)特征。進(jìn)行革蘭氏染色進(jìn)一步確定該菌株的各種主要特性。通過(guò)整個(gè)篩選過(guò)程了解菌株的培養(yǎng)特性了解該菌株生長(zhǎng)所需的最佳溫度、pH、產(chǎn)酶活性最高的反應(yīng)時(shí)間及靜置時(shí)間。采用生理生化及16sRNA方法鑒定最終確定我們所篩選出的菌株的類(lèi)型。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選

    從10份土樣中,經(jīng)過(guò)富集培養(yǎng)、平板劃線(xiàn)、初篩、斜面接種、復(fù)篩共獲得6株產(chǎn)脂肪酶的菌株。根據(jù)菌株產(chǎn)生脂肪酶后再加入維多利亞藍(lán)B的培養(yǎng)基中可產(chǎn)生藍(lán)綠色變色圈這一特征,挑選出產(chǎn)脂肪酶的菌株,并與不產(chǎn)脂肪酶的菌株進(jìn)行對(duì)照(圖1)。

    圖1 菌種篩選結(jié)果Fig.1Strain screening results

    3.2 酶活測(cè)定

    3.2.1 固體瓊脂平板法

    圖2 固體瓊脂平板法測(cè)定結(jié)果Fig.2Test result with solid agar plate method

    圖2顯示的是固體瓊脂平板法測(cè)定結(jié)果。圖中,平板上的1、2、3、4、5、6個(gè)透明圈分別代表所篩選出的六株不同的產(chǎn)脂肪酶的菌株菌懸液所產(chǎn)生的透明圈。平板中加入維多利亞藍(lán)B作為指示劑,遇酸變藍(lán)。其作用機(jī)理為:脂肪酶產(chǎn)生菌可產(chǎn)生脂肪酶,脂肪酶可以分解加入培養(yǎng)集中的橄欖油,使其轉(zhuǎn)變成酸,維多利亞藍(lán)B遇酸變藍(lán)。所以可以根據(jù)所產(chǎn)生的變色圈的大小來(lái)判斷其產(chǎn)脂肪酶的能力。圖中變色圈的大小表示不同菌株產(chǎn)脂肪酶的能力,變色圈越大說(shuō)明其產(chǎn)脂肪酶的能力越強(qiáng)。2號(hào)變色圈最大說(shuō)明其產(chǎn)脂肪酶的能力最強(qiáng)。

    3.2.2 滴定法

    由于透明圈法只能定性測(cè)定脂肪酶酶活,不能定量,因此采用滴定法進(jìn)行定量。利用脂肪酶可以分解脂肪產(chǎn)生酸,用0.05mol/L的氫氧化鈉滴定,同時(shí)用酚酞作為指示劑。當(dāng)指示劑由無(wú)色變成粉紅說(shuō)明到達(dá)到滴定終點(diǎn)。對(duì)篩選出來(lái)的6株具有較大透明圈的菌株在不同溫度(20、30、40、50、60℃)、不同pH(7、7.5、8、8.5、9、9.5、10)下進(jìn)行實(shí)驗(yàn),同時(shí)作平行實(shí)驗(yàn)。共測(cè)定5次。酶活最高的一株到達(dá)7.2U。然后進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),在同樣的情況下測(cè)定3次酶活,最高的一株活性達(dá)到12U。酶活的計(jì)算如下列公式如下。

    式中:V—樣品所消耗堿的體積,mL;

    V0—空白對(duì)照所消耗堿的體積,mL;

    t—反應(yīng)時(shí)間,min;

    50—1 mL0.05mol/L氫氧化鈉的微摩爾數(shù);

    n—稀釋倍數(shù)。

    3.3 酶學(xué)性質(zhì)的研究

    3.3.1 酶最適作用溫度

    酶都有其最適的反應(yīng)溫度,因而在不同溫度下酶所表現(xiàn)的活性也不同。溫度對(duì)酶促反應(yīng)的影響表現(xiàn)為兩個(gè)方面:一是,在一定范圍內(nèi),當(dāng)溫度升高時(shí),反應(yīng)速度加快,酶活力高。二是,由于酶是生物催化劑,是一類(lèi)特殊的蛋白質(zhì),超過(guò)一定的溫度,酶會(huì)發(fā)生變性而失活。實(shí)驗(yàn)中酶液濃度相同,pH為8,溫度選擇20、30、40、50、60℃,研究溫度對(duì)酶活的影響,反應(yīng)30min,測(cè)量其在不同反應(yīng)溫度下對(duì)相同底物的作用酶活。實(shí)驗(yàn)中用的酶是上面實(shí)驗(yàn)分離得到酶活最高(12U)的脂肪酶(下同),實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3(見(jiàn)下頁(yè))。

    圖3 酶反應(yīng)的最適溫度Fig.3The optimum temperature of the enzyme reaction

    由圖3可以看出,在一定范圍內(nèi)溫度升高反應(yīng)速度加快,酶活力升高,當(dāng)溫度升高到50℃時(shí),酶活力達(dá)到最大值,超過(guò)這個(gè)溫度后,酶活力開(kāi)始下降。因此,50℃為脂肪酶的最適溫度。

    3.3.2 酶最適作用pH

    環(huán)境pH影響酶蛋白的構(gòu)象和酶分子的解離狀態(tài),因此不同的酶具有各自的最適pH值。為了測(cè)定不同pH條件對(duì)酶活性的影響,選用堿性脂肪酶,在30℃及相同底物下,pH為7、7.5、8、8.5、9、9.5、10,反應(yīng)30min,測(cè)定脂肪酶的酶活。利用平板測(cè)定法測(cè)出酶反應(yīng)的最適pH。其原理是觀(guān)察其產(chǎn)生變色圈直徑的大小來(lái)粗測(cè)酶活性的大小。變色圈直徑越大說(shuō)明酶活性越大,反之則越小。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖4。

    圖4 酶反應(yīng)的最適pHFig.4The optimum pH of the enzyme reaction

    由圖4可以看出,在一定范圍內(nèi),pH升高,反應(yīng)速度加快,酶活力升高,當(dāng)pH升高到8.5時(shí),酶活力達(dá)到最大值,超過(guò)這個(gè)pH后酶活力開(kāi)始下降。

    3.3.3 酶的最適反應(yīng)時(shí)間

    酶反應(yīng)過(guò)程中達(dá)到最高活力需要一段時(shí)間。不同酶在相同的底物濃度、溫度、pH的條件下,測(cè)量不同反應(yīng)時(shí)間(5、10、15、20、25、30、35min),酶活的大小,研究該脂肪酶達(dá)到最高點(diǎn)所需的時(shí)間。這對(duì)酶在生產(chǎn)應(yīng)用中時(shí)間的控制有一定的影響。在不同反應(yīng)時(shí)間下對(duì)所篩出的脂肪酶進(jìn)行了比較。

    圖5 反應(yīng)時(shí)間對(duì)脂肪酶活力的影響Fig.5The influence of reaction time for Lipase activity

    由圖5可以看出,在一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)隨時(shí)間延長(zhǎng),酶活力升高,當(dāng)反應(yīng)時(shí)間達(dá)到15min時(shí)酶活力達(dá)到最大值,隨后酶活力開(kāi)始下降。

    3.3.4 穩(wěn)定時(shí)間對(duì)酶活的影響

    反應(yīng)終止后體系并沒(méi)有穩(wěn)定,反應(yīng)尚未結(jié)束,需要一段時(shí)間才能達(dá)到平衡。酶在30℃、pH8.5的條件下反應(yīng)30min后終止,然后間隔不同的靜置時(shí)間后測(cè)定酶反應(yīng)液的酶活。

    圖6 穩(wěn)定時(shí)間對(duì)脂肪酶活力的影響Fig.6The influence of standing time for Lipase activity

    由圖6可知,在一定穩(wěn)定時(shí)間內(nèi)隨時(shí)間的推移,酶活力升高,當(dāng)穩(wěn)定時(shí)間達(dá)到10min時(shí),酶活力達(dá)到最大值,超過(guò)這個(gè)穩(wěn)定時(shí)間后酶活力開(kāi)始下降。

    3.4 菌種鑒定

    通過(guò)對(duì)所篩出的高產(chǎn)菌株進(jìn)行革蘭氏染色和普通的細(xì)菌染色法最終確定該菌菌種,其顯微鏡照片顯示為革蘭氏陰性短桿菌,如圖7(見(jiàn)下頁(yè))所示。

    4 討論

    本文通過(guò)篩選到了預(yù)期的產(chǎn)脂肪酶的菌株,而且產(chǎn)量較高。特別是通過(guò)對(duì)篩選出的高產(chǎn)菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)后,其產(chǎn)酶活性有了很大的提高,酶活達(dá)到12U。進(jìn)一步的優(yōu)化培養(yǎng)將在后續(xù)的工作中進(jìn)行。

    對(duì)脂肪酶酶活的測(cè)定是一個(gè)比較困難的問(wèn)題,測(cè)定結(jié)果與底物的種類(lèi)、底物的形態(tài)、體系的pH、溫度、反應(yīng)時(shí)間和穩(wěn)定時(shí)間都有關(guān)系。除了上述影響條件以外,還有PVA的聚合度、乳化液制備的攪拌速度及終止劑等因素。需要以后進(jìn)一步研究。

    本文只對(duì)菌株進(jìn)行了形態(tài)觀(guān)察,采用生理生化及16sRNA方法鑒定正在進(jìn)行中,有望篩選到一株具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的脂肪酶產(chǎn)生菌。

    [1]孫宏丹,孟秀香,賈莉,等.微生物脂肪酶及其相關(guān)研究進(jìn)展[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,(23):293-295.

    [2]盧世珩,劉光燁,江躍林,等.合成己酸乙酯脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及產(chǎn)酶條件[J].微生物學(xué)通報(bào),1994,(21):23-26.

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    Screening of Lipase Producing Strain

    LIU Jun-jie LIU Qian CHEN Xiao-ning JIANG Jun-hui
    (Shandong Lvye Pharmaceutical Co.,Ltd.,Yantai 264003,China)

    The main research aspects and results are as following:First,6 strains producing lipase were isolated from 10 soil samples by enrichment culture,plate streaking and fermentation.Second,the properties of lipase were studied,after fermentation under the medium including 1.5%glucose,0.7%(NH4)2SO4,0.1%K2HPO4,1.25%beef cream,0.211% MgSO4·7H2O,1.41%olive oil and the conditions 250r/min,30℃and 72h.The optimum reaction temperature,pH,reaction time were 50℃,8.5 and 30min respectively.Finally,the isolated strain was conserved and identified by using conventional methods for bacteria identification.

    Microorganism;lipase;screening

    X172

    A

    1008-1038(2015)04-0033-06

    2014-10-25

    劉俊杰(1984—),男,助理工程師,研究方向?yàn)榫N篩選

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