2011—2012年廣東省人類免疫缺陷病毒/獲得性免疫缺陷綜合征患者的耐藥情況分析※

鐘活麟 梁志偉 蔡衛(wèi)平 蘭 蕓

2011—2012年廣東省人類免疫缺陷病毒/獲得性免疫缺陷綜合征患者的耐藥情況分析※

鐘活麟 梁志偉 蔡衛(wèi)平 蘭 蕓

目的 探討2011—2012年廣東省人類免疫缺陷病毒（HIV）/獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）患者的耐藥情況。方法 分別收集廣東省2011－2012年接受抗病毒治療滿1年以上的患者血漿，檢測HIV病毒載量，對病毒載量（VL）＞1 000 Copies/ml患者行HIV-1基因分型及耐藥位點(diǎn)檢測，比較2011—2012年患者的病毒抑制情況、HIV-1基因亞型與感染途徑分布、耐藥突變的發(fā)生情況、治療藥物的耐藥情況。結(jié)果 2012年治療失敗率明顯低于2011年下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=59.57，P＜0.01）；通過靜脈吸毒、同性和異性性傳播的感染患者主要為CRF01_AE亞型，而輸血傳播感染的患者為CRF01_AE及CRF02_AG亞型；2012年NRT區(qū)主要耐藥位點(diǎn)M184I/V突變比例明顯低于2011年，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.37，P＜0.05）；2012年患者3TC、FTC、NVP耐藥率均明顯低于2011年，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.97，P＜0.05）。結(jié)論 2011—2012年廣東省HIV/AIDS患者基因亞型以CRF01_AE為主，兩年間各類藥物主要耐藥位點(diǎn)未發(fā)生變化；耐藥突變是HIV耐藥性產(chǎn)生的主要原因，2012年耐藥率下降和耐藥突變率相符。

人類免疫缺陷病毒；耐藥突變；基因型；序列分析

隨著高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的開展，越來越多的人類免疫缺陷病毒（HIV）/獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）患者得到了治療。但隨著抗病毒治療時(shí)間的延長，療效因HIV對藥物耐受而受到抑制，耐藥基因的產(chǎn)生是影響抗病毒治療效果的重要因素。本研究以2011—2012年廣東省接受抗病毒治療1年以上患者為研究對象，對其耐藥情況進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年廣東省檢測治滿 1年的HIV/AIDS患者1 720例（占2011年廣東省HIV/AIDS在治例數(shù)的54.0%，1 720/3 184）；2012年治滿1年的

HIV/AIDS患者3 951例（占2012年廣東省HIV/AIDS在治例數(shù)的67.5%，3 951/5 851）。359例（2011年79例、2012年280例）病毒載量（VL）＞1 000 Copies /ml患者治療前CD4+值均低于350×106/L。

1.2 方法

1.2.1 檢測VL 采用羅氏COBAS AmpliPrep/TaqMan 96病毒載量檢測系統(tǒng)檢測HIV病毒載量（檢測下限20 Copies /ml）。按照美國衛(wèi)生與人類服務(wù)部（DHHS）的標(biāo)準(zhǔn)VL＞200 Copies /ml定義為治療失敗。

1.2.2 HIV-1基因亞型分析 分別對2011—2012年VL＞1 000 cp/ml患者進(jìn)行基因分型，分析人群存在5種 HIV-1基因亞型 CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC、B及CRF02_AG亞型。利用MEGA 4軟件構(gòu)建基于POL區(qū)序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹，采用臨近法及Kimura 2-parameter模式，Bootstrap設(shè)定為1 000次。

1.2.3 病毒核酸提取及目的片段擴(kuò)增 采用QIAamp viral RNA mini kit（QIAGEN），具體操作按試劑說明書進(jìn)行，擴(kuò)增片度大小為1.3 kb。對產(chǎn)物進(jìn)行測序（Invitrogen）。測序圖譜經(jīng)軟件拼接，拼接后的序列利用斯坦福耐藥數(shù)據(jù)庫進(jìn)行耐藥位點(diǎn)分析，確定耐藥突變基因及治療藥物的耐藥情況。

1.3 觀察指標(biāo) 比較2011年與2012年患者的病毒抑制情況、HIV-1基因亞型與感染途徑分布、耐藥突變的發(fā)生情況、治療藥物的耐藥情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病毒抑制情況比較 2011年VL＞200 Copies/ml患者324例，該年治療失敗率為18.8%（324/1 720）；2012年VL＞200 Copies /ml患者443例，該年治療失敗率為11.2%（443/3 951），2012年治療失敗率明顯低于2011年，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=59.57，P＜0.01）。2011年對VL＞1 000 Copies /ml的79例患者行基因分型及耐藥檢測，獲得序列 70例，檢測成功率為88.6%（70/79）；2012年對280例＞1 000 cp/ml的患者檢測，261例獲得序列，檢測成功率為 93.2%（261/280），兩年檢測成功率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.82，P＞0.05）。

2.2 HIV-1基因亞型與感染途徑分布 兩年流行基因亞型比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；通過靜脈吸毒、同性和異性性傳播的感染患者主要為 CRF01_AE亞型，而輸血傳播感染的患者為CRF01_AE及CRF02_AG亞型，兩年間人群傳播途徑比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 2011—2012年廣東省病毒未抑制HIV感染者基因亞型分布與傳播途徑[例(%)]

2.3 耐藥突變的發(fā)生情況 2011年有51例患者發(fā)生1個(gè)或多個(gè)耐藥位點(diǎn)變化，共檢出248個(gè)耐藥突變位點(diǎn)；2012年170例患者發(fā)生1個(gè)或多個(gè)耐藥位點(diǎn)變化，共檢出620個(gè)耐藥突變位點(diǎn)。兩年中核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶（NRT）區(qū)耐藥位點(diǎn)以 M184I/V為主（2011年42/51、82.4%，2012年108/170、63.5%），其次為D67N/S/G；而非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶（NNRT）區(qū)常見的耐藥突變位點(diǎn)以 Y181C/V、K103N/S、G190A/S為主；蛋白酶（PR）區(qū)次要突變位點(diǎn)以L10I/V為主，未發(fā)現(xiàn)主要位點(diǎn)突變。2012年NRT區(qū)主要耐藥位點(diǎn)M184I/V突變比例明顯低于2011年，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.37，P＜0.05），而其余常見耐藥位點(diǎn)變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 治療藥物的耐藥情況分析 2011年患者的耐藥率為72.9%（51/70），其中1例NRTIs、3例NNRTIs單一耐藥，47例對NRTIs和NNRTIs耐藥，無針對PI的耐藥；而2012患者的耐藥率為57.1%（149/261），其中32例NRTIs或NNRTIs單一耐藥，117例對NRTIs和NNRTIs耐藥，無針對PI的耐藥；2012年患者3TC、FTC、NVP耐藥率均明顯低于2011年，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.97，P＜0.05），其余藥物耐藥率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

3 討論

本研究對2011—2012廣東省HIV/AIDS患者治療失敗率及耐藥情況進(jìn)行比較分析，2012年該省治療患者例數(shù)及檢測量均較2011年有所增多，而2012年治療失敗率明顯低于2011年，考慮與2012年擴(kuò)大治療、加強(qiáng)宣教有關(guān)。兩年間HIV/AIDS患者基因亞型以 CRF01_AE為主，另有 CRF07_BC、CRF08_BC、B、CRF02_AG亞型存在，兩年間基因亞型變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與早期調(diào)查[1-2]結(jié)果一致，說明CRF01_AE在廣東仍占有絕對優(yōu)勢。比較2011年和2012年各傳播途徑中亞型分布，發(fā)現(xiàn)靜脈吸毒感染途徑中CRF01_AE亞型的變化較其他感染途徑大，考慮本研究樣本中，靜脈吸毒人群兩年間所占比例存在差異，該數(shù)據(jù)可能不能完全客觀地

反映靜脈吸毒感染與耐藥率的相關(guān)性，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量、細(xì)分感染途徑以得出準(zhǔn)確結(jié)論。

表2 2011—2012年廣東省病毒未抑制HIV感染患者基因型耐藥情況比較

2011—2012年耐藥突變患者中NRT區(qū)耐藥位點(diǎn)均以M184I/V為主，其余各主要耐藥位點(diǎn)的發(fā)生情況與國外其他研究結(jié)果類似[3]，M184I/V位點(diǎn)的變異主要與3TC、FTC有關(guān)，該位點(diǎn)在NRTIs類藥物中變異發(fā)生率最高。2012年M184I/V位點(diǎn)突變率明顯低于2011年，結(jié)果與3TC、FTC耐藥率降低相一致，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮與規(guī)范選擇治療方案、加強(qiáng)耐藥監(jiān)測有關(guān)。NNRT區(qū)耐藥突變位點(diǎn)兩年數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PR區(qū)未檢出主要耐藥突變位點(diǎn)。已有研究表明，蛋白酶基因區(qū)次要突變不直接影響病毒對藥物的敏感性[4-5]，只有與主要突變同時(shí)存在時(shí)，才可降低對藥物的敏感性，但隨著其的累積，在以后的抗病毒治療中將加快其他耐藥突變的產(chǎn)生和耐藥水平的增高[6]。兩年間NNRTIs中 EFV的耐藥率均在 56%以上。因此，需重視NNRTIs的藥物耐藥相關(guān)突變。

本研究通過對 2011—2012年廣東省治療患者的病毒亞型及耐藥突變進(jìn)行比較分析，闡述兩年間耐藥情況的變化，及時(shí)了解患者的HIV-1亞型及基因型耐藥的動(dòng)態(tài)變化特點(diǎn)，為今后臨床選擇抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療方案提供了參考，對艾滋病疫情預(yù)防控制具有重要意義。

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In Guangdong Drug Resistance of Patients with Human Immunodeficiency Virus/Acquired Immunodeficiency Syndrome in 2O11 and 2O12

Zhong Huolin Liang Zhiwei Cai Weiping Lan Yun

Objective To investigate the characteristic of anti-HIV drug resistance of failure treatment HIV/AIDS patients in Guangdong Province in 2011 and 2012.Methods In Guangdong Province the plasma of Patients,who receive antiretroviral treatment for more than one year,were collected in 2012 and 2011.the detection of HIV virus load,the viral load(VL)and 1000cp/ml in patients with HIV-1 genotype and mutation detection.Viral suppression,HIV-1 genotype and distribution of infection,drug resistance,the occurrence of drug resistance of patients in 2012 were compared with 2011,Results In 2012 the failure rate was significantly lower than in 2011,the difference was statistically significant(X2=59.57,P＜0.01);Gene subtype of patients infected through intravenous drug use,homosexual and heterosexual transmission is mainly CRF01_AE,and transfusion transmitted infections of patients with CRF01_AE and CRF02_AG subtype;main resistance loci M184I/V of NRT mutation in 2012 was significantly lower than that of in 2011,the difference was statistically significant(X2=6.37,P＜0.05);In 2012 resistant rates of 3TC、FTC、NVP were significantly lower than that in 2011,there were statistically significant differences(X2=6.97,P＜0.05).Conclusion In 2011 and 2012 gene subtype of patients with HIV/AIDS is still CRF01_AE subtypes,primarily resistance loci of various types of drugs did not change in Guangdong.Resistance mutations are the main causes of HIV drug resistance,the declined rates of drug resistance were the same as mutation rate in 2012.

HIV;Resistance mutations;Genotype;Sequence analysis

R512.91

A

1673-5846(2015)07-0072-03

廣州市第八人民醫(yī)院，廣東廣州 510000

十二五國家科技重大專項(xiàng)（2012ZX10001003-003）

鐘活麟（1974-），醫(yī)學(xué)學(xué)士，主治醫(yī)師。研究方向：艾滋病的臨床診療

蔡衛(wèi)平，E-mail：caiwp@163.net