CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細(xì)胞在食管鱗癌中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

張艷芳

CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細(xì)胞在食管鱗癌中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

張艷芳

目的 探討食管鱗癌組織中CD44v6蛋白和浸潤的CD3+T淋巴細(xì)胞表達(dá)情況及對(duì)預(yù)后的影響。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法（SP）檢測(cè)CD44v6蛋白、CD3+T細(xì)胞在60例食管鱗癌患者中的表達(dá)，另選取30例癌旁正常組織為對(duì)照，分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果 CD44v6蛋白在食管癌及癌旁正常組織陽性表達(dá)率分別為53.3%、16.7%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CD3+T淋巴細(xì)胞在食管癌及癌旁正常組織陽性表達(dá)率分別為56.7%、80.0%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CD44v6蛋白高表達(dá)及CD3+T淋巴細(xì)胞低表達(dá)均與食管鱗癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P＜0.05），但與分化程度、病變長度無關(guān)（P＞0.05）；食管癌中CD3+T淋巴細(xì)胞和CD44V6蛋白的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.481，P＜0.01）。結(jié)論 CD44v6蛋白高表達(dá)和CD3+T淋巴細(xì)胞低表達(dá)與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

食管腫瘤；CD44v6蛋白；CD3+T淋巴細(xì)胞；免疫組織化學(xué)法；表達(dá)；預(yù)后

細(xì)胞免疫是機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)的重要組成部分。腫瘤組織中浸潤的淋巴細(xì)胞（TILs），主要是指位于腫瘤間質(zhì)內(nèi)的T淋巴細(xì)胞，TILs的密度、活化狀態(tài)及類型在一定程度上反映了機(jī)體的免疫水平，與臨床預(yù)后密切相關(guān)。同時(shí)，又有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中雖然有大量TILs，但并未對(duì)腫瘤的生長起到抑制作用[1-3]，反而促進(jìn)了癌細(xì)胞的浸潤、轉(zhuǎn)移。CD44v6蛋白是屬于黏附分子家族成員，研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，而在正常組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)[4-5]，且與腫瘤預(yù)后密切相關(guān)。因此，本研究通過免疫組織化學(xué)法（SP）研究CD44v6蛋白和CD3+T淋巴細(xì)胞在食管鱗癌中的表達(dá)與關(guān)系，進(jìn)一步明確其與食管癌病理分級(jí)、浸潤及轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料 60例食管癌手術(shù)標(biāo)本來自安陽市腫瘤醫(yī)院2009年1月1日至2010年1月1日收治的胸科手術(shù)患者。所有標(biāo)本經(jīng)胃鏡或手術(shù)病理確診，術(shù)前均未行化療或放療，臨床病例資料完整。其中男23例，女37例，年齡42～79歲，平均（56±3）歲。參照國際抗癌聯(lián)盟（UICC）2009年第7版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期18例、Ⅱ期30例、Ⅲ期12例；鱗癌高、中、低分化者分別為16、29和15例。另選取30例癌旁正常組織（距食管癌原發(fā)灶3 cm，并經(jīng)病理證實(shí)）作為對(duì)照。

1.2 方法 鼠抗人CD44v6特異性抗體和鼠抗人CD3 特異抗體均購于北京中杉生物技術(shù)公司，標(biāo)本經(jīng) 4%甲醛固定，石蠟包埋組織連續(xù)切片 3張（厚度4～5 μm），進(jìn)行常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色，SP檢測(cè)CD44v6蛋白和CD3+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)情況。常規(guī)設(shè)陽性對(duì)照，并以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作陰性對(duì)照，光學(xué)顯微鏡下觀察顯色結(jié)果。

1.3 染色結(jié)果判斷 以雙盲法進(jìn)行染色判斷，CD44v6陽性染色為棕黃色顆粒，主要為胞膜顯色，部分胞質(zhì)顯色，CD3+陽性染色為棕黃色，為胞膜顯色。每例標(biāo)本隨機(jī)選5個(gè)高倍視野，染色強(qiáng)度計(jì)分：不著色為0分；淡黃色為1分；著色呈黃色為2分；棕褐色為3分。染色陽性細(xì)胞百分比計(jì)分：＜5%為0分；5%～25%為1分；26%～50%為2分；＞50%為3分。根據(jù)染色強(qiáng)度、陽性細(xì)胞百分比乘積判斷結(jié)果：≥2者為陽性，＜2者為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)錄入計(jì)算機(jī)，采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性檢驗(yàn)行Spearman相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細(xì)胞的表達(dá) CD44v6蛋白在癌旁正常食管組織陽性表達(dá)率為 16.7%（5/30），在食管原發(fā)灶中的陽性表達(dá)率為 53.3%（32/60），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。CD3+T淋巴細(xì)胞在癌旁組織陽性表達(dá)率為80.0%（24/30），在食管原發(fā)灶中的陽性表達(dá)率為56.7%（34/60），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1及圖1、2。CD44v6高表達(dá)及CD3+T淋巴細(xì)胞低表達(dá)與食管

鱗癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P＜0.05），但與分化程度及病變長度無關(guān)（P＞0.05），見表2。

表1 癌旁正常食管組織和食管鱗癌組織中CD44v6蛋白及CD3+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)

圖1 食管鱗癌組織中CD44v6蛋白的表達(dá)（×400）

圖2 食管鱗癌組織中CD3+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)（×400）

表2 CD44v6蛋白及CD3+T淋巴細(xì)胞與食管鱗癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

2.2 CD44v6蛋白與CD3+T細(xì)胞在食管癌中表達(dá)的相關(guān)性分析 60例食管鱗癌組織中，CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細(xì)胞同時(shí)表達(dá)陽者11例（18.3%），同時(shí)表達(dá)陰性者5例（8.3%），僅CD44v6蛋白表達(dá)者21例（35.0%），僅CD3+T淋巴細(xì)胞表達(dá)者23例（38.3%）；采用 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，CD44v6蛋白與 CD3+T淋巴細(xì)胞之間呈負(fù)相關(guān)（r=-0.481，P＜0.01）。

3 討論

CD44具有不同亞型，分為標(biāo)準(zhǔn)型 CD44（standard CD44）即CD44s，變異型即CD44v，其中CD44v又可根據(jù)其外顯子拼接方式、種類不同分為CD44v1～10等10多種。CD44v可與透明質(zhì)酸結(jié)合，介導(dǎo)參與細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合及細(xì)胞偽足形成，從而使細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)，CD44v6在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)，與腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)。目前，關(guān)于CD44v6在食管癌中的研究結(jié)果不一。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，食管癌中CD44v6的表達(dá)明顯高于正常組織，且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組及T3/T4組患者中，CD44v6的表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[6]。也有報(bào)道認(rèn)為，CD44及CD44v6在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中的表達(dá)明顯比對(duì)應(yīng)的原發(fā)灶弱，轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的數(shù)目越多，表達(dá)也越弱[7]。本研究顯示，CD44v6在食管癌組織中表達(dá)高于正常組織，且陽性表達(dá)者較易發(fā)生脈管浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，研究結(jié)果與文獻(xiàn)[7]報(bào)道相似，CD44v6隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤深度加深而增高，腫瘤的浸潤深度（T1-2/T3-4）、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移（N0/N+）表達(dá)之間存在差異，表明CD44v6在食管癌的浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起重要作用。CD44v6過表達(dá)提示預(yù)后不良，可作為判斷食管癌預(yù)后的一項(xiàng)指標(biāo)。

淋巴細(xì)胞的浸潤需要腫瘤微環(huán)境內(nèi)一系列黏附分子、趨化因子的參與。本研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)TILs主要位于食管癌間質(zhì)內(nèi)，在癌旁組織內(nèi)可見較多的CD3+T淋巴細(xì)胞浸潤，而在癌巢內(nèi)CD3+T淋巴細(xì)胞減少，提示腫瘤組織內(nèi)存在T淋巴細(xì)胞的排斥現(xiàn)象。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，在中晚期腫瘤組織內(nèi)，浸潤的淋巴細(xì)胞明顯減少，提示腫瘤微環(huán)境內(nèi)存在負(fù)向調(diào)節(jié)因子，阻止了T淋巴細(xì)胞向腫瘤內(nèi)的浸潤。從CD44v6蛋白和CD3+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，CD44v6蛋白與CD3+T淋巴細(xì)胞在食管癌中同時(shí)出現(xiàn)，但呈負(fù)相關(guān)，并且均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度有關(guān)，提示腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的CD44v6蛋白，可促使淋巴細(xì)胞歸巢，從而使腫瘤組織中浸潤的淋巴細(xì)胞明顯減少，進(jìn)一步削弱了免疫反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞逃脫了免疫系統(tǒng)的監(jiān)視與清除[8]，促進(jìn)了腫瘤的進(jìn)展。

因此，通過檢測(cè)食管癌組織中CD44v6蛋白和CD3+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)情況，篩查高危復(fù)發(fā)患者，能更好地判斷食管癌患者的預(yù)后，指導(dǎo)臨床輔助治療。

[1] Galon J,Costes A,Sanchaz F,et al.Type,density,and location of immune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome[J].Science,2006,313(5795):1960-1964.

[2] Gao.Q,Qiu SJ,Fan J,et al.Intratumoral banlance of regulatory and cytotoxic T cells is associated with prognosis of hepatocellular carcinoma after resection[J].J Clin Oncol,2007,20(25):2586-2593.

[3] Grabenbauer G,Lahmer G,Distel L,et al.Tumor-infiltrating cytotoxic T cells but not regulatory T cells predict outcome in anal squamous cell carcinoma[J].Clin Cancer Res,2006,12(11):3355-3360.

[4] Winder T,Ning Y,Yang D,et al.Germline polymorphisms in genes involved in the CD44 signaling pathway are associated with clinical outcome in localized gastric adenocarcinoma[J].Int J Cancer,2011, 129(5):1096-1104.

[5] Okayama H,Kumamoto K,Saitou K,et al.CD44v6,MMP-7 and Ha -clear Cdx2 are significant biomarkers for prediction of lymph node metastasis in primary gastric caneer[J].Oncol Rep,2009,22(4): 745-755.

[6] Liu WK,Fu Q,Li YM,et al.The relationship between cy-clooxygenase-2,CD44v6,and nm23hl in esophagea1 squamous cell carcinoma[J].Onkologie,2009,32(10):574-578.

[7] Takayama N,Arima S,Haraoka S,et al.Relationship between the expression of adhesion molecules in primary esophageal squamous cell carcinoma and metastatic lymphnodes[J].Anticancer Res,2003, 23(6a):4435-4442.

[8] Murai T,Miyazaki Y,Nishinakamura H,et al.Engagement of CD44 promotes Rac activation and CD44 cleavage during tumor cell migration[J].J Biol Chem,2004,279(6):4541-4550.

Relationship CD44v6 protein Expression and CD3+T lymphocytes and Prognosis in Esophageal Squamous Cell Carcinoma

Zhang Yanfang

Objective To explore the expression of CD44v6 protein and CD3+T cells and their prognostic value in esophageal squamous cell carcinoma.Methods Immunohistochemical method(SP)detection of CD44v6,CD3+T cells expressing esophageal squamous cell carcinoma in 60 cases,and another 30 cases selected normal tissues adjacent to cancer as control,analyze its relationship with clinicopathological parameters.Results CD44v6 protein in esophageal cancer and adjacent normal tissue expression rate was 53.3%,16.7%,respectively,the difference was statistically significant(P＜0.05);CD3+T lymphocytes in esophageal cancer and adjacent normal tissue expression rate respectively 56.7%,80.0%,the difference was statistically significant(P＜0.05);CD44v6 protein expression and CD3+T lymphocytes were associated with low expression in esophageal squamous cell invasion,lymph node metastasis was positively correlated(P＜0.05)However,the degree of differentiation, independent of lesion length(P＞0.05); esophageal cancer in CD3+T lymphocytes and CD44V6 protein expression

Esophageal neoplasm;CD44v6;CD3+T cells;Immunohistochemistry;Expression;Prognosis

R735.1

A

1673-5846(2015)06-0073-03

安陽市腫瘤醫(yī)院內(nèi)五科，河南安陽 455000

showed a significant negative correlation(r=-0.481,P＜0.01).Conclusion CD44v6 protein expression and low expression of CD3+T lymphocytes in the development of esophageal squamous cell carcinoma occurs in closely related to invasion and metastasis.