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    外陰白色病變組織中cyclin D1、p16和CD34表達情況及其與血清cAMP和cGMP含量的關(guān)系

    2015-12-07 08:11:22肖雪蓮趙建武梁文通吳倩
    中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志 2015年25期
    關(guān)鍵詞:外陰負相關(guān)細胞周期

    肖雪蓮,趙建武,梁文通,吳倩

    (貴州省人民醫(yī)院婦科,貴州 貴陽 550002)

    ·論著·

    外陰白色病變組織中cyclin D1、p16和CD34表達情況及其與血清cAMP和cGMP含量的關(guān)系

    肖雪蓮,趙建武,梁文通,吳倩

    (貴州省人民醫(yī)院婦科,貴州 貴陽 550002)

    目的分析外陰白色病變組織中cyclin D1、p16和CD34表達情況及其與血清cAMP和cGMP含量的關(guān)系。方法選擇在該院接受治療的外陰白色病變患者36例作為觀察組對象,另取同期在該院進行體檢的健康女性35例作為對照組,比較觀察組患者外陰病變組織及非病變組織中cyclin D1、p16和CD34的表達情況,觀察組及對照組的血清cAMP和cGMP含量。結(jié)果觀察組患者病變組織皮膚的cyclin D1和CD34表達高于正常組織,p16表達明顯低于正常皮膚組織(P<0.05)。觀察組患者的血清cAMP含量及cAMP/cGMP低于對照組、cGMP含量高于對照組(P<0.05)。觀察組患者的血清cAMP含量與病變組織cyclin D1和CD34表達呈負相關(guān),與p16表達呈正相關(guān);血清cGMP含量與病變組織cyclin D1和CD34表達呈正相關(guān),與p16表達呈負相關(guān)。結(jié)論外陰白色病變組織中cyclin D1和CD34表達增高,p16表達降低,同時患者血清cAMP和cGMP含量變化與病變組織中的各調(diào)控因子表達呈直接相關(guān)關(guān)系。

    外陰白色病變;cyclin D1;p16;CD34;cAMP;cGMP

    外陰白色病變指女性外陰皮膚發(fā)生變性及色素改變的一系列慢性疾病,臨床癥狀包括外陰瘙癢、灼痛、病變區(qū)域皮膚色素減退甚至變白,皮膚粗糙和潰瘍等。該病反復發(fā)作、遷延不愈,給患者的正常生活帶來巨大困擾[1]。外陰白色病變發(fā)病機制尚不明了,臨床治療較差,成為婦科多見及難治性疾病。本次研究主要分析外陰白色病變組織中cyclin D1、p16和CD34表達情況及其與血清cAMP和cGMP含量的關(guān)系?,F(xiàn)報道如下:

    1 資料與方法

    1.1一般資料

    選擇2012年6月-2014年11月在本院接受治療的外陰白色病變患者36例作為觀察組對象。其中,鱗狀上皮增生20例,硬化性苔蘚16例;年齡25~69歲,平均(43.81±9.62)歲;病程3個月~11年,平均(7.28±1.53)年。每例患者在接受治療干預前于病變部位取材1次,同時取外陰正常皮膚作為對照。所有標本經(jīng)10%福爾馬林固定,常規(guī)石蠟切片(厚度為4μm)。選擇同期在本院進行健康體檢、外陰無病變的女性35例作為對照組,年齡28~62歲,平均(42.17±8.75)歲。兩組女性的基線資料差異無統(tǒng)計學意義,具有可比性。

    1.2檢測方法

    1.2.1Western blot檢測取觀察組患者病變皮膚組織及正常皮膚組織,分別加入RIPA蛋白裂解液1 ml抽提蛋白用于下一步Western blot檢測。檢測時,按照配方配置4%的濃縮膠和10%的分離膠,加入蛋白樣本和marker后進行垂直電泳(90 V、20 min,120 V、80 min)和電轉(zhuǎn)膜(100V、90 min);取出NC膜置于5%脫脂牛奶封閉1~2 h,TBST洗5 min×3遍后,根據(jù)抗體說明書預測的蛋白分子量裁剪NC膜,分別孵育cyclin D1、p16、CD34第一抗體,過夜后取出NC膜并用TBST洗5 min×3遍,加入HPR標記的第二抗體孵育1~2 h,TBST洗15 min×2遍后進行顯影。用Image J軟件分析蛋白條帶灰度值,按照目的基因灰度值/actin灰度值作為蛋白含量,設(shè)置對照組腫瘤組織中目的基因蛋白含量為100,計算觀察組腫瘤組織基因的蛋白含量。

    1.2.2ELISA法抽取觀察組與對照組患者的空腹外周靜脈血,分離得血清后采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)測定cAMP和cGMP含量。

    1.3統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 18.0軟件錄入和分析數(shù)據(jù),計量資料的兩組間比較采用t檢驗、4組間比較采用方差分析,相關(guān)性分析采用多元線性回歸,P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1cyclin D1、p16和CD34表達情況

    觀察組患者病變組織皮膚的cyclin D1和CD34表達高于正常組織,p16表達明顯低于正常皮膚組織(P<0.05)。具體見附圖。

    附圖 cyclin D1、p16及CD34的蛋白含量比較

    2.2cAMP和cGMP含量

    觀察組患者的血清cAMP含量及cAMP/cGMP低于對照組、cGMP含量高于對照組(P<0.05)。具體見表1。

    表1 兩組患者的血清cAMP、cGMP含量比較(±s)

    表1 兩組患者的血清cAMP、cGMP含量比較(±s)

    組別cAMP/(ng/ml)cGMP/(ng/ml)cAMP/cGMP觀察組10.82±1.158.59±0.881.17±0.38對照組19.72±1.676.05±1.053.32±0.21 t值7.295.386.93 P值0.0150.0210.019

    2.3相關(guān)性

    觀察組患者的血清cAMP含量與病變組織cyclin D1、CD34表達呈負相關(guān),與p16表達呈正相關(guān);血清cGMP含量與病變組織cyclin D1和CD34表達呈正相關(guān),與p16表達呈負相關(guān)。具體見表2。

    表2 觀察組患者病變組織cyclin D1、p16及CD34表達與血清cAMP和cGMP含量的相關(guān)性

    3 討論

    外陰白色病變是發(fā)生在女性外陰的皮膚和黏膜良性病變,以外陰瘙癢及色素減退為臨床特征,屬于皮膚和黏膜非贅生性上皮病變,惡變率約為2%~5%[2]。根據(jù)病理表現(xiàn)不同可以將外陰白色病變分為外陰鱗狀上皮增生、硬化性苔蘚和硬化性苔蘚合并鱗狀上皮增生。外陰白色病變原因不明,可能與多種細胞周期調(diào)控因子表達異常、自身免疫異常等相關(guān)。

    細胞周期是一個精密調(diào)控的過程,其控制位點在調(diào)控細胞分裂增殖過程中發(fā)揮十分重要的作用,這些因子主要包括細胞周期蛋白cyclin、cyclin依賴性激酶(cyclin-dependent kinases,CDK)及一些抑癌基因如Rb和p16蛋白產(chǎn)物[3]。目前認為cyclin D(主要是D1)在細胞周期由G1期進入S期的調(diào)控中起到關(guān)鍵作用。Cyclin D與CDK4和CDK6結(jié)合可激活其活性并磷酸化Rb,釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F,啟動某些基因轉(zhuǎn)錄,推動細胞周期從G1向S期轉(zhuǎn)化,啟動細胞分裂增殖周期的進程[4]。P16是CDK抑制蛋白(CDK inhibitor,CKI)的一種,可以直接抑制CDK活性,與cyclin一起參與CDK的活性調(diào)節(jié)。P16蛋白特異性與CDK4、CDK6結(jié)合,可以抑制其活性,從而維持抑癌基因Rb活性狀態(tài)。目前已經(jīng)將cyclin D1定義為癌基因,其局部擴增或者易位至強啟動子下游,導致cyclin D1蛋白過度表達,可以誘發(fā)多種人類腫瘤。很多腫瘤組織中因p16基因突變或者啟動子甲基化,可以使p16基因功能喪失。上述研究結(jié)果顯示外陰白色病變患者的病變皮膚組織中cyclin D1表達增加,p16表達降低,提示患者存在細胞增殖過程過度激活、抑癌基因活性不足[5]。

    有研究顯示外陰白色病變的發(fā)病可能與局部自身免疫物質(zhì)沉積、微循環(huán)缺陷有關(guān)。CD34是一種單鏈穿膜蛋白,被認為是抗原特異性最高的血管內(nèi)皮細胞的標志物,可以顯示較小的不成熟的為血管內(nèi)皮細胞,可反映組織血管情況并進一步提示組織微循環(huán)狀況[1]。上述研究結(jié)果顯示外陰白色病變患者的病變皮膚組織中CD34表達均增加,說明局部血管過度增生是外陰白色病變的發(fā)病原因之一[6]。

    以往的研究證實,外陰白色病變的發(fā)生與表皮及真皮的代謝功能紊亂、細胞異常增殖相關(guān)。cAMP和cGMP在許多信號通路中起到重要的“第二信使”作用,可以利用改變蛋白構(gòu)象的機制,實現(xiàn)調(diào)節(jié)受體、離子通道、酶及結(jié)構(gòu)蛋白的功能。已知cAMP抑制細胞增殖,而cGMP促進細胞有絲分裂,正常細胞生長增殖依賴促進及抑制因子的相互平衡,若是兩者含量及比例失衡可能導致上皮組織增殖與分化異常,進而引起一系列疾病[4]。上述研究顯示觀察組患者的血清cAMP含量及cAMP/cGMP低于對照組、cGMP含量高于對照組(P<0.05),提示其比值失調(diào)可能是患者局部細胞增殖過速的主要生化基礎(chǔ)之一。在進一步對患者血清cAMP和cGMP含量與病變組織cyclin D1、p16和CD34表達相關(guān)性進行分析發(fā)現(xiàn):觀察組患者的血清cAMP含量與病變組織cyclin D1和CD34表達呈負相關(guān),與p16表達呈正相關(guān);血清cGMP含量與病變組織cyclin D1和CD34表達呈正相關(guān),與p16表達呈負相關(guān)[7]。

    綜上所述,得出以下結(jié)論:外陰白色病變組織中cyclin D1和CD34表達增高,p16表達降低,同時患者血清cAMP和cGMP含量變化與病變組織中的各調(diào)控因子表達呈直接相關(guān)關(guān)系,對于臨床病情評估及治療具有一定指導價值。

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    (張立芳 編輯)

    Expressions of cyclin D1,p16,CD34 in vulvar white lesion and their relationship with serum content of cAMP and cGMP

    Xue-lian XIAO,Jian-wu ZHAO,Wen-tong LIANG,Qian WU
    (Department of Gynecology,Guizhou People's Hospital,Guiyang,Guizhou 550002,P.R.China)

    【Objective】To analyse the expressions of cyclin D1,p16,CD34 in vulvar white lesion and their correlation with serum content of cAMP and cGMP.【Methods】Thirty-six patients with vulvar white lesions received treatment in our hospital were enrolled in observation group,35 cases of healthy women received physical examination in the same period were enrolled in control group.Then the expressions of cyclin D1,p16,CD34 in vulvar white lesion tissue and normal tissue of observation group patients,serum content of cAMP and cGMP in observation group and control group were compared.【Results】In lesion tissue of observation group patients,cyclin D1,CD34 expressions were higher than in normal tissue,p16 expression was significantly lower than in normal tissue(P<0.05). Serum cAMP,cAMP/cGMP levels of observation group patients were lower than those of control group patients,and cGM P contents of observation group patients were higher than those of control group patients(P<0.05).Observation group patients'serum contents of cAMP showed a negative correlation with cyclin D1,CD34 expression in diseased tissue,and had a positive correlation with p16 expression.Serum content of cGMP was positively correlated with cyclin D1,CD34 expression in diseased tissue,and negatively correlated with p16 expression.【Conclusion】Cyclin D1,CD34 expressions increase in vulvar white lesion,p16 expression reduces,at the same time patients'serum cAMP and cGMP contents have a direct relationship with regulatory factor expression in diseased tissue.

    white lesions of vulva;cyclin D1;p16;CD34;cAMP;cGMP

    R711.1

    A

    1005-8982(2015)25-0050-03

    2015-01-17

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