三陰性乳腺癌中E-鈣黏蛋白的表達(dá)及其臨床意義

洪超群，莊軼軒，陳繼明，吳 曉，張 凡

三陰性乳腺癌中E-鈣黏蛋白的表達(dá)及其臨床意義

洪超群，莊軼軒，陳繼明，吳 曉，張 凡

目的 探討三陰性乳腺癌組織中的E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)的表達(dá)及其與臨床病理指標(biāo)和預(yù)后的關(guān)系。方法 2002年1月—2008年10月在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院接受治療的女性三陰性乳腺癌組織35例，采用免疫組織化學(xué)GTvision兩步法檢測(cè)樣本中E-cad的表達(dá)，采用卡方檢驗(yàn)分析其與臨床病理特征的關(guān)系，應(yīng)用Kaplan-Meier法和Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析E-cad表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響。結(jié)果 E-cad主要定位在細(xì)胞膜，35例三陰性乳腺癌組織中E-cad的低表達(dá)率為51.4%(18/35)，其表達(dá)與臨床腫瘤分期(P＝0.009)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＝0.044)。E-cad低表達(dá)和高表達(dá)患者總體生存曲線差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rank檢驗(yàn)，P＝0.014)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析示E-cad是三陰性乳腺癌患者獨(dú)立的預(yù)后因素(風(fēng)險(xiǎn)比0.241，95%置信區(qū)間0.072～0.814，P＝0.022)。結(jié)論 E-cad低表達(dá)或缺失更容易引起三陰性乳腺癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移，在三陰性乳腺癌的發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，可以作為三陰性乳腺癌患者預(yù)后的一個(gè)重要的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。

E-鈣黏蛋白；免疫組織化學(xué)；三陰性乳腺癌

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其中三陰性乳腺癌是指雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長(zhǎng)因子受體2均為陰性的乳腺癌，以惡性程度高、侵襲性強(qiáng)、化療敏感及預(yù)后差為主要特征，占所有乳腺癌的10%～20%[1-2]。復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是乳腺癌患者的主要致死因素。E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)是一種細(xì)胞黏附分子，具有維持組織結(jié)構(gòu)完整性等作用，其在乳腺癌組織中表達(dá)降低甚至缺失[3]，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用[4]。作者回顧性分析在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)治療的35例三陰性乳腺癌病理組織中E-cad的表達(dá)及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2002年1月—2008年10月在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)，并且具有完整臨床資料和隨訪資料的乳腺癌患者35例，均病理確診，且免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長(zhǎng)因子受體2表達(dá)為陰性的三陰性乳腺癌。所有患者均為女性，術(shù)前均未進(jìn)行任何輔助治療(放療、化療和內(nèi)分泌治療)，平均年齡49.1 (29～75)歲。

1.2 免疫組織化學(xué)方法

1.2.1 主要試劑及方法 術(shù)后樣本在常規(guī)10%中性甲醛溶液中固定，經(jīng)脫水、浸蠟、石蠟包埋后用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)。石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化，檸檬酸微波高壓抗原修復(fù)，3%過(guò)氧化氫封閉內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶，滴加正常羊血清以封閉非特異性的背景染色。滴加適當(dāng)稀釋一抗(1∶200)，兔抗人E-cad多克隆抗體(上?；蚩萍加邢薰?，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)沖洗后滴加適量GTVision即用型二抗(上?；蚩萍加邢薰?。二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine，DAB，廈門邁新生物技術(shù)有限公司)染色，蘇木素復(fù)染。用已知陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照用PBS代替一抗，陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞膜。

1.2.2 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 由2位病理學(xué)醫(yī)生對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。以半定量法判定結(jié)果，鏡下隨機(jī)觀察5個(gè)高倍鏡視野，每個(gè)視野分別計(jì)算200個(gè)細(xì)胞，共計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞。按著色程度評(píng)分，未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；按陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜6%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分:2項(xiàng)評(píng)分結(jié)果相乘，0～4分為低表達(dá)，5～12分為高表達(dá)。根據(jù)2002年美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)第6版分期標(biāo)準(zhǔn)，確定臨床腫瘤分期。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件，E-cad的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析用卡方檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier方法Log-rank檢驗(yàn)比較不同E-cad表達(dá)水平生存曲線的差異；應(yīng)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析比較相對(duì)危險(xiǎn)度，分析各因素對(duì)生存率的影響；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

35例中，年齡≤50歲19例，年齡＞50歲16例。臨床病理資料見表1。全組患者的隨訪時(shí)間為6～139個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為57個(gè)月。

2.1 E-cad的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系 E-cad主要表達(dá)于細(xì)胞膜，呈黃色或棕黃色(圖1)。35例三陰性乳腺癌組織中E-cad高表達(dá)17例(48.6%)，低表達(dá)18例(51.4%)。E-cad的表達(dá)與患者的年齡(P＝0.877)、腫瘤大小(P＝0.600)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P＝0.967)均無(wú)關(guān)；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P＝0.044)、臨床腫瘤分期(P＝0.009)顯著相關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N0～N1與N2～N3比較(60.9%比25.0%)或臨床腫瘤分期Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ期比較(70.6%比25.0%)，患者E-cad的高表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在2例臨床腫瘤分期為Ⅳ期的患者中，E-cad高表達(dá)和低表達(dá)各1例。見表1。

圖1 E-cad在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)(免疫組織化學(xué)染色×400)

表1 35例E-cad表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.2 E-cad的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 35例中，E-cad低表達(dá)18例，平均生存期71.5個(gè)月[95%置信區(qū)間(confidence interval，CI)40.07～101.00]；E-cad高表達(dá) 17例，平均生存期 103.0個(gè)月(95%CI 287.28～118.85)。E-cad低表達(dá)和高表達(dá)總體生存曲線差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rank檢驗(yàn)，P＝0.014，圖2)。

圖2 E-cad低表達(dá)和高表達(dá)的三陰性乳腺癌患者總體生存曲線

Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型單因素分析顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[風(fēng)險(xiǎn)比(hazard ratio，HR)7.378，95%CI 1.614～33.721，P＝0.010]、E-cad表達(dá)(HR 0.241，95%CI 0.072～0.814，P＝0.022)均為三陰性乳腺癌患者生存的預(yù)后因子；多因素分析顯示E-cad高表達(dá)是三陰性乳腺癌患者獨(dú)立的保護(hù)預(yù)后因子(HR 0.241，95%CI 0.072～0.814，P＝0.022)。見表2。

表2 三陰性乳腺癌患者生存影響因素的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析

3 討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移是一個(gè)多階段、多因素的復(fù)雜過(guò)程，而浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者死亡的主要原因。E-cad是鈣黏素家族的一員，廣泛分布于上皮組織中，是一種細(xì)胞跨膜糖蛋白，是調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附反應(yīng)的重要媒介。其在癌細(xì)胞中的表達(dá)不穩(wěn)定，在多種上皮性腫瘤細(xì)胞如胃癌、直腸癌、甲狀腺癌和卵巢癌等中表達(dá)下調(diào)，從而降低細(xì)胞間的連接，進(jìn)而誘發(fā)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。研究表明，不同癌細(xì)胞株的浸潤(rùn)能力與E-cad表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)[5]，通過(guò)小干擾RNA技術(shù)干擾E-cad可使細(xì)胞獲得侵襲能力[6-7]，而過(guò)表達(dá)E-cad則可有效抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)能力[8]。

E-cad表達(dá)降低是促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵機(jī)制之一[9]，人群研究顯示E-cad表達(dá)降低與乳腺癌病死率升高有關(guān)[10-11]。與非三陰性乳腺癌相比，三陰性乳腺癌是一種惡性程度高、侵襲性強(qiáng)及預(yù)后差為主要特征的乳腺癌臨床病理類型，是目前乳腺癌治療的難點(diǎn)之一。Tang等[12]研究顯示，在三陰性乳腺癌中，E-cad的表達(dá)與腫瘤大小、臨床腫瘤分期無(wú)關(guān)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中缺失率更高(P＝0.016)，并且指出E-cad可以作為三陰性乳腺癌預(yù)后指標(biāo)。本研究中，E-cad在三陰性乳腺癌中低表達(dá)率為51.4%，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＝0.044)，與Tang的研究一致。此外，E-cad表達(dá)還與臨床腫瘤分期有關(guān)，隨著臨床腫瘤分期的進(jìn)展而降低(P＝0.009)。多因素生存分析顯示，E-cad是影響三陰性乳腺癌患者生存的獨(dú)立影響因素(P＝0.022)。

既往研究發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌中，E-cad啟動(dòng)子區(qū)域高甲基化狀態(tài)是導(dǎo)致E-cad表達(dá)水平下調(diào)的機(jī)制之一，應(yīng)用去甲基化藥物可恢復(fù)E-cad表達(dá)并抑制腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)特征[13]，E-cad啟動(dòng)子高甲基化是促成腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要因素之一[14]。有研究指出，E-cad甲基化在乳腺癌中達(dá)50%以上，與E-cad低表達(dá)顯著相關(guān)[15]。

由于E-cad在三陰性乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移中具有重要作用，重新恢復(fù)E-cad的表達(dá)能夠抑制其侵襲轉(zhuǎn)移?；騿?dòng)子區(qū)域的異常甲基化是E-cad表達(dá)下調(diào)的主要原因之一，反轉(zhuǎn)基因的甲基化狀態(tài)可用于腫瘤的治療。目前DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑已經(jīng)正式用于臨床腫瘤的治療[16]。未來(lái)應(yīng)進(jìn)一步分析E-cad甲基化和E-cad表達(dá)在三陰性乳腺癌中關(guān)系，并研究DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑在乳腺癌治療方面的作用。

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Expression of E-cadherin and its prognostic significance in triple negative breast carcinoma

HONG Chaoqun1，ZHUANG Yixuan1，CHEN Jiming2，WU Xiao1，ZHANG Fan1
(1.Guangdong Province Key Laboratory for Breast Cancer Diagnosis and Treatment，Cancer Hospital of Shantou University Medical College，Shantou Guangdong 515041，China；2.Traditional Chinese Medicine，Cancer Hospital of Shantou University Medical College，Shantou Guangdong 515041，China)

Objective To study the protein expression of E-cadherin(E-cad)to understand its relationship with clinicopathological parameters and its influence on the prognosis of human triple negative breast carcinoma(TNBC).Methods We collected tumor tissues from 35 female patients with TNBC treated at the Cancer Hospital of Shantou University Medical College from January 2002 to October 2008.Immunohistochemistry was performed to detect the protein expression of E-cad in breast tumors，and the chi-square test was used to study the relationship between the E-cad expression and clinicopathological parameters.The Kaplan-Meier method and Cox regression model were conducted to study the influence of E-cad on the prognosis of TNBC.Results E-cad protein was expressed primarily in the cytomembrane.The low expression rate of E-cad in 35 TNBC tumors was 51.4%(18/35).The chi-square test revealed that the E-cad expression was related to TNM stage (P＝0.009)and lymph node metastasis(P＝0.044).The survival curves between the low protein isoaspartyl methyltransferase expression group and the high protein isoaspartyl methyltransferase expression group were significantly different(Log-rank P＝0.014).Cox regression model demonstrated that E-cad(hazard ratio 0.241，95%confidence interval 0.072—0.814，P＝0.022)was the independent prognostic factors for TNBC.Conclusion E-cad plays an important role in the progression of breast cancer and could be a novel prognostic factor for TNBC.

E-cadherin(E-cad)；Immunohistochemistry；Triple negative breast carcinoma

R737.9

B

2095-3097(2015)02-0074-04

10.3969/j.issn.2095-3097.2015.02.003

2015-01-26 本文編輯:徐海琴)

廣東省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(S2013010015969)；廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(B2012261)；汕頭市醫(yī)療重點(diǎn)科技計(jì)劃項(xiàng)目(汕府科[2012]113)；汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院青年基金(201410)

515041廣東汕頭，汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院廣東省乳腺癌診治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(洪超群，莊軼軒，吳 曉，張 凡)，中藥房(陳繼明)

張 凡，E-mail:lemon_fan＠163.com