灰氈毛忍冬及其變異株與忍冬葉顯微特征比較研究

劉湘丹，徐玉琴，馮懿卉，周日寶，王朝暉，童巧珍*，石國(guó)強(qiáng)

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙410208；2.益陽(yáng)廣播電視大學(xué)，湖南 益陽(yáng)413000）

灰氈毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz 和忍冬Lonicera japonica Thunb. 均來(lái)源于忍冬科忍冬屬，灰氈毛忍冬干燥花蕾或帶初開(kāi)的花為2015 版《中華人民共和國(guó)藥典》收錄的山銀花來(lái)源之一[1]； 忍冬的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花為2015 版《中華人民共和國(guó)藥典》 收錄的大宗藥材金銀花唯一來(lái)源。 兩者均有清熱解毒，疏散風(fēng)熱之效，臨床上廣泛用于治療癰腫療瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風(fēng)熱感冒，溫病發(fā)熱等病癥[2]。其莖又叫金銀藤，有清熱解毒、疏風(fēng)通絡(luò)之效[3-5]。 文獻(xiàn)研究顯示，其葉亦可入藥，具有抑菌、抗氧化作用[6-8]。 灰氈毛忍冬變異株為上個(gè)世紀(jì)末在湖南溆浦發(fā)現(xiàn)的灰氈毛忍冬自然突變株，具有花整齊、花蕾期長(zhǎng)、花冠不展開(kāi)、有效成分含量高、采收周期長(zhǎng)、采收成本低等優(yōu)良特性，已被廣泛引種栽培，成為灰氈毛忍冬的主流品種，又名“湘蕾金銀花”[9-10]。

山銀花與金銀花藥材性狀較相似， 易混淆，較多研究者對(duì)灰氈毛忍冬和忍冬進(jìn)行了化學(xué)成分和藥理作用研究，部分研究者對(duì)灰氈毛忍冬和忍冬原植物性狀，花、莖的顯微特征等方面開(kāi)展了對(duì)比研究[11-15]，未見(jiàn)關(guān)于葉的顯微特征比較研究的報(bào)道。 本研究在文獻(xiàn)研究基礎(chǔ)上進(jìn)行灰氈毛忍冬、灰氈毛忍冬變異株及忍冬葉外部形態(tài)和內(nèi)部構(gòu)造的比較研究，為忍冬和灰氈毛忍冬性狀鑒別、灰氈毛忍冬良種選育及種質(zhì)資源研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，同時(shí)為忍冬屬植物葉的外部形態(tài)和內(nèi)部顯微構(gòu)造研究提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)樣品來(lái)源

實(shí)驗(yàn)樣品采自湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物園， 經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)周日寶教授鑒定為灰氈毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz、灰氈毛忍冬變異株（湘蕾金 銀 花）Lonicera macranthoides ‘XiangLei’ 和 忍冬Lonicera japonica Thunb.的一年生枝條上的成熟葉。

2 性狀鑒別

灰氈毛忍冬及其變異株、忍冬的葉片均呈卵形或卵狀披針形；葉先端尖或漸尖，基部圓或近心形，葉緣全緣，略向下卷；其中灰氈毛忍冬變異株葉邊緣明顯見(jiàn)柔毛；新葉見(jiàn)紅暈，三者均上表面毛茸稀疏、下表面毛茸密被；羽狀網(wǎng)脈，主脈均近軸面稍凹下，遠(yuǎn)軸面稍凸起，葉脈和葉柄上均密被毛茸，其中灰氈毛忍冬及其變異株尤甚；體輕，質(zhì)脆，氣微，味微苦； 三者的葉大小及上下表面顏色差異較大，詳見(jiàn)圖1，表1。

圖1 3個(gè)樣品葉外部形態(tài)圖

表1 3個(gè)樣品葉外部形態(tài)比較

3 顯微鑒別

3.1 制片方法

葉柄或葉片橫切片制作：用胡蘿卜條夾住葉柄或葉片，用雙刃刀片徒手切片，將切片置盛蒸餾水的培養(yǎng)皿中，選取完整薄片，蒸餾水裝片后，稀甘油封片。

表皮裝片制作： 分別取3個(gè)樣品的新鮮葉片，用鑷子撕取葉片下表皮，撕離面朝上，蒸餾水裝片后，稀甘油封片。

3.2 觀察與測(cè)量方法

將制成的臨時(shí)裝片置于雙目顯微鏡下，觀察樣品的顯微特征，并用自帶數(shù)碼成像系統(tǒng)對(duì)其微觀形態(tài)拍照，使用顯微測(cè)微尺測(cè)量葉片組織，如腺毛長(zhǎng)度、非腺毛長(zhǎng)度等。 并用顯微測(cè)微尺按面積法進(jìn)行氣孔計(jì)數(shù)（在顯微鏡下計(jì)算單位面積氣孔和表皮細(xì)胞的數(shù)目，移動(dòng)載玻片在表皮的不同部位作同樣的氣孔和表皮細(xì)胞計(jì)數(shù)， 連續(xù)計(jì)數(shù)4 次， 求其平均值），按如下公式計(jì)算氣孔指數(shù)。

氣孔指數(shù)=單位面積上的氣孔數(shù)×100/（單位面積上的氣孔數(shù)+同面積表皮細(xì)胞數(shù)）

3.3 結(jié)果與分析

3.3.1 葉片橫切面顯微構(gòu)造 灰氈毛忍冬、 灰氈毛忍冬變異株和忍冬葉片橫切面結(jié)構(gòu)都由表皮、葉肉和葉脈三部分組成。 其中表皮細(xì)胞為一層類圓形細(xì)胞，排列緊密，部分表皮細(xì)胞向外突起形成腺毛或非腺毛，下表皮毛茸數(shù)量多于上表皮，其中非腺毛為單細(xì)胞，線狀毛；主脈上下兩方及表皮以內(nèi)均為薄壁細(xì)胞，細(xì)胞類圓形，有細(xì)胞間隙，貯藏有大量大小不等的草酸鈣簇晶；靠近上表皮下方，部分細(xì)胞角隅處增厚，形成厚角組織。 無(wú)限外韌型維管束，導(dǎo)管徑向排列，韌皮薄壁細(xì)胞中貯藏有大量草酸鈣簇晶；柵欄細(xì)胞徑向緊密排列于上表皮之下，下表皮上方無(wú)柵欄組織，其上細(xì)胞類圓形，排列疏松，構(gòu)成海綿組織，均為兩面葉。 見(jiàn)圖2。灰氈毛忍冬葉橫切面上腺毛 （腺頭呈圓球形）形狀、大小與其變異株相似，但與忍冬（腺頭呈倒圓錐形，頂端平坦）差異較大，見(jiàn)圖3。其毛茸大小及后含物比較見(jiàn)表2。

圖2 3個(gè)樣品葉橫切面構(gòu)造圖(×40)

圖3 3個(gè)樣品葉橫切面毛茸圖(×40)

3.3.2 葉柄橫切面顯微特征比較 3個(gè)樣品葉柄橫切面顯微構(gòu)造見(jiàn)圖4， 從圖可看出灰氈毛忍冬及其變異株葉柄毛茸相對(duì)短、彎曲、密集，而忍冬葉柄毛茸長(zhǎng)、彎曲、密集，相關(guān)特征比較結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 3個(gè)樣品葉片腺毛、非腺毛及后含物顯微特征比較（μm）

表3 3個(gè)樣品葉柄的顯微特征比較（μm）

圖4 3個(gè)樣品葉柄顯微構(gòu)造圖(上圖×20；下圖×40)

3.3.3 氣孔及氣孔指數(shù)比較分析 灰氈毛忍冬及其變異株、忍冬葉下表皮氣孔多為不定式，偶見(jiàn)不等式，有3～5個(gè)副衛(wèi)細(xì)胞。 3個(gè)樣品葉片下表皮顯微結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖5，氣孔及氣孔指數(shù)比較見(jiàn)表4。

圖5 3個(gè)樣品葉下表皮氣孔圖(×40)

表4 3個(gè)樣品下表皮保衛(wèi)細(xì)胞及氣孔指數(shù)比較

4 討論

自2005 版《中華人民共和國(guó)藥典》，金銀花和山銀花被分別錄入，但兩者易混淆，山銀花主要來(lái)源之一灰氈毛忍冬具有花產(chǎn)量高、 易采收的特點(diǎn)，其價(jià)格相對(duì)金銀花低，常出現(xiàn)替代用藥的情況[13]。文獻(xiàn)研究表明，部分學(xué)者[11-15]對(duì)忍冬與灰氈毛忍冬、灰氈毛忍冬與其變異株外部性狀和花、 莖的顯微結(jié)構(gòu)異同點(diǎn)進(jìn)行了比較研究。 灰氈毛忍冬及其變異株、忍冬的葉亦可入藥，且葉亦為物種鑒定的依據(jù)之一[6-8]，故本研究對(duì)三者葉的外部形態(tài)和內(nèi)部顯微特征進(jìn)行了觀察比較研究，其異同點(diǎn)總結(jié)如下。

4.1 相同點(diǎn)

三者葉上下表皮均為單層類圓形細(xì)胞，緊密排列；均有腺毛及非腺毛；草酸鈣簇晶大量分布于基本薄壁細(xì)胞及韌皮薄壁細(xì)胞中， 其大小無(wú)明顯區(qū)別。海綿組織細(xì)胞均為多層細(xì)胞，排列較為疏松。柵欄組織緊密排列于上表皮之下，下表皮上方無(wú)柵欄組織，均為典型異面葉。 下表皮氣孔均多為不定式，偶見(jiàn)不等式，副衛(wèi)細(xì)胞3～5個(gè)。

4.2 不同點(diǎn)

4.2.1 忍冬與灰氈毛忍冬及其變異株不同點(diǎn) 忍冬腺毛較灰氈毛忍冬及其變異株的更長(zhǎng)，且忍冬腺毛的腺頭較小，呈倒圓錐形，頂端平坦，灰氈毛忍冬及其變異株腺頭大為圓球形，差別顯著。 灰氈毛忍冬及其變異株較忍冬非腺毛明顯短。 忍冬葉片橫切面木質(zhì)部較灰氈毛忍冬及其變異株略窄，而柵欄組織、海綿組織則略寬。 忍冬下表皮氣孔數(shù)及氣孔指數(shù)均小于灰氈毛忍冬及其變異株，且前者副衛(wèi)細(xì)胞較大，后兩者副衛(wèi)細(xì)胞均較小。

4.2.2 灰氈毛忍冬與其變異株不同點(diǎn) 灰氈毛忍冬與其變異株葉的顯微構(gòu)造基本相似，但下表皮氣孔數(shù)及氣孔指數(shù)前者較后者小，變異株副衛(wèi)細(xì)胞小于常規(guī)株；灰氈毛忍冬變異株非腺毛長(zhǎng)度相對(duì)短于常規(guī)株。

以上研究結(jié)果表明，灰氈毛忍冬及其變異株葉的外部形態(tài)和內(nèi)部顯微特征均與忍冬存在明顯差異；項(xiàng)目組前期研究[16-17]表明，灰氈毛忍冬常規(guī)株和變異株花冠表型存在明顯差異，但有效成分含量差異不大，其花蕾均做山銀花入藥。 本研究發(fā)現(xiàn)，灰氈毛忍冬自然突變株，其葉的外部形態(tài)與常規(guī)株差別不大， 但其內(nèi)部顯微特征較常規(guī)株發(fā)生了變化，說(shuō)明灰氈毛忍冬自然突變株葉片特征較常規(guī)株存在差異。 該研究結(jié)果可為三者原植物或葉類藥材的鑒別及忍冬屬葉的顯微特征比較研究提供參考，同時(shí)還為灰氈毛忍冬種質(zhì)選育提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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