食管鱗癌組織中HIF－1α和VEGF－C的表達(dá)及意義

劉如 胡曉娜 王雯 劉勁松 吳小源 王建華 賀春語

(1.鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 放療中心 河南 鄭州 450008;2.河南省中醫(yī)學(xué)院三附院 醫(yī)學(xué)影像科 河南 鄭州 450008)

缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factor－ 1α，HIF－1α)是特異性缺氧狀態(tài)下發(fā)揮活性轉(zhuǎn)錄因子，與腫瘤浸潤、血管淋巴管再生及放化療敏感性密切相關(guān)［1］。血管內(nèi)皮生長因子－ C (vascular endothelial growth factor，VEGF－C)是最重要的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞特異性調(diào)節(jié)因子，能夠誘導(dǎo)淋巴管生成和腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散［2］。本文檢測HIF－1α 和VEGF－C 在食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)組織中表達(dá)情況，分析其與病理特征的關(guān)系，探討對ESCC 發(fā)生發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2007年7月至2009年12月行食管癌根治術(shù)的ESCC 病例116例，術(shù)前均未做抗腫瘤治療，檢測標(biāo)本為食管癌手術(shù)石蠟包埋組織。其中男79例，女37例;年齡30～74 歲，中位年齡61 歲;采用2009年AJCC 食管癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，T1、T2、T3、T4期分別為6、45、49、16例;N0、N1、N2期分別為58、41、17例;ⅠA 期5例，ⅠB 期24例，ⅡA 期21例，ⅡB 期15例，ⅢA 期34例，ⅢB 期9例，ⅢC 期8例;腫瘤位于胸上、中、下段分別為15、61、40例;高、中、低分化分別為41、49、26例。

1.2 實驗方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，制成3 μm 厚的切片，采用免疫組化SP 法進(jìn)行HIF－1α、VEGF－C 染色，染色步驟按SP 試劑盒操作說明進(jìn)行。兔抗人HIF－1α 多克隆抗體、鼠抗人VEGF－C 單克隆抗體，即用型SP 試劑盒，DAB二氨基聯(lián)苯胺顯色劑試劑盒，均購自福州邁新公司。

1.3 評定標(biāo)準(zhǔn) HIF－1α、VEGF－C 均以細(xì)胞質(zhì)/胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒為陽性細(xì)胞。免疫組織化學(xué)染色以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)特異性染色深淺進(jìn)行評分:0 分為無色，1 分為淡黃色，2 分為棕黃色，3 分為棕褐色;再依據(jù)染色細(xì)胞所占百分比評分:陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為0 分，10%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3 分，76%～100%為4 分。兩項乘積即為該例免疫組化得分:(－)0 分;(+)≥1 分。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析，不同臨床特征間同一指標(biāo)比較采用χ2檢驗，指標(biāo)相關(guān)性采用Spearman 等級相關(guān)分析，以α =0.05 為檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 HIF－1α、VEGF－C 在ESCC 及癌旁組織中表達(dá) ESCC 組織中HIF－1α、VEGF－C 陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。見表1。

表1 HIF－1α、VEGF－C 在ESCC 及其癌旁組織中的表達(dá)(n，%)

2.2 HIF－1α、VEGF－C 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 HIF－1α 表達(dá)僅與ESCC 的浸潤深度相關(guān)，T 分期越晚表達(dá)率越高(P ＜0.05)。VEGF－C 表達(dá)與分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，低、中分化或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者明顯高于高分化或淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者(P ＜0.05)，另外發(fā)現(xiàn)HIF－1α 和VEGF－C 表達(dá)與性別、年齡、分期均無相關(guān)(P 均＞0.05)。見表2。

2.3 HIF－1α 與VEGF－C 表達(dá)在ESCC 組織中表達(dá)的相關(guān)性 ESCC 組織中HIF－1α 與VEGF－C 蛋白陽性表達(dá)率均為41.4%(48/116)，采用Spearman等級相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)HIF－1α 與VEGF－C 蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.214，P= 0.021)，見表3。

表2 HIF－1α、VEGF－C 蛋白表達(dá)與ESCC 臨床病理特征的關(guān)系(n，%)

表3 HIF－1α 和VEGF－C 的表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

惡性腫瘤細(xì)胞快速生長可導(dǎo)致腫瘤內(nèi)部處于相對缺氧的微環(huán)境，在眾多參與細(xì)胞缺氧狀態(tài)調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子中，HIF－1 研究最為廣泛。HIF－1 是由α、β 兩個亞基構(gòu)成，缺氧時氧調(diào)節(jié)亞基HIF－1α 表達(dá)增加，與HIF－1β 聚合，調(diào)節(jié)下游60 余種腫瘤相關(guān)基因，產(chǎn)生腫瘤的血管形成、侵襲轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡等效應(yīng)［1，3］。趙富周等［4］發(fā)現(xiàn)HIF－1α 表達(dá)與食管癌分級、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、手術(shù)切緣陽性率正相關(guān)。趙華鋒等［5］報道ESCC 患者中HIF－1α 表達(dá)與患者分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和預(yù)后無明顯相關(guān)。本研究結(jié)果表明ESCC 中HIF－1α 陽性表達(dá)率63.8%，高于癌旁組織，HIF－1α 蛋白的表達(dá)僅與ESCC 的浸潤深度相關(guān)，T4 患者表達(dá)率高達(dá)87.5%，而與性別、年齡、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，與報道一致［5］。

VEGF－C 是一種分泌型糖蛋白，與不同受體結(jié)合后產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)，VEGF－C 與Flt－4 結(jié)合后，可誘導(dǎo)淋巴管形成［6］。楊惠等［7］發(fā)現(xiàn)VEGF－ C是高度特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素，能直接調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)。趙富周等［4］報道VEGF－C 在食管癌組織中表達(dá)顯著高于癌旁正常組織，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示VEGF－C 蛋白在ESCC 中表達(dá)率為56.9%，與分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P ＜0.05)，提示VEGF－C 蛋白在促進(jìn)腫瘤新生血管和淋巴管生成中起著重要作用。

HIF－1α 作為轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)節(jié)多個下游基因，以適應(yīng)相對低氧的環(huán)境。Katsuta 等［8］在5 個食管癌細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)HIF－1α 能夠通過介導(dǎo)VEGF－C 的表達(dá)促進(jìn)淋巴管生成。體外研究發(fā)現(xiàn)HIF－1α 表達(dá)缺陷的腫瘤細(xì)胞中，VEGF－C 表達(dá)量降低，導(dǎo)致腫瘤組織中血管、淋巴管發(fā)展缺陷［9］。本研究初步探索了ESCC 中HIF－1α 與VEGF－C 關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HIF－1α 與VEGF－C 表達(dá)正相關(guān)。

目前分子靶向治療是惡性腫瘤治療最有前景的新方向，HIF－1α、VEGF－C 在ESCC 高表達(dá)，并在ESCC的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，有助于深入研究ESCC 侵襲轉(zhuǎn)移、放化療耐受等分子機(jī)制，也為HIF－ 1α、VEGF－C 作為ESCC 治療的新靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。

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