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    碳茵調(diào)控對(duì)蝦、蟹混養(yǎng)系統(tǒng)微生物群落功能多樣性的影響

    2015-11-16 16:31:40李杰田相利董雙林張凱王文君宋嬌
    河北漁業(yè) 2015年8期
    關(guān)鍵詞:碳氮比

    李杰 田相利 董雙林 張凱 王文君 宋嬌嬌 張慶起

    摘要:利用Biolog生態(tài)板方法和冗余分析(RDA)等方法,分析了菌碳調(diào)控對(duì)蝦、蟹混養(yǎng)系統(tǒng)水體細(xì)菌群落功能多樣性的影響,探討了水體微生物群落多樣性與不同環(huán)境因子間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)通過(guò)添加益生菌制劑和糖蜜調(diào)節(jié)養(yǎng)殖水體中菌群結(jié)構(gòu),共設(shè)6個(gè)處理,分別是為短小芽孢桿菌(C2)、蠟樣芽孢桿菌(C3)、硝化細(xì)菌制劑(C4)、EM制劑(C5),以未添加菌制劑的處理為對(duì)照組(C1),另外以未添加碳源和菌制劑的處理為對(duì)照組(C0)。研究結(jié)果表明,不同菌碳下細(xì)菌群落對(duì)底物碳的利用數(shù)量和代謝強(qiáng)度存在較大差異。隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng),處理組C3的碳代謝活性和對(duì)碳源的利用強(qiáng)度總體上高于其它處理組,而處理組C4較低和對(duì)照組CO相差不大。PCA分析結(jié)果表明,不同處理的細(xì)菌群落處于動(dòng)態(tài)變化之中,反映出細(xì)菌群落的組成和代謝特征出現(xiàn)了顯著差異,其中處理組C3和C4間差異最為顯著。處理組C3的多樣性指數(shù)如Simpson指數(shù)Shannon指數(shù)和S--E均勻度均較高,而處理組C4則較低。RAD分析表明,碳菌調(diào)控條件下,影響細(xì)菌群落碳代謝功能的主要環(huán)境因子7月為:Chl a、PO4--P、NO2-N、NH4+-N;8月為:NO3--N、NO2-N、TP、TN和PO4-一P;9月為:TP、Chl a、PO4-一P和NO2--N。綜合水質(zhì)指標(biāo)和細(xì)菌群落對(duì)碳源的代謝功能的分析結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)初步表明在C/N為15的蝦、蟹混養(yǎng)水體中添加蠟樣芽孢桿菌,細(xì)菌群落的多樣性指數(shù)及對(duì)碳源的代謝功能為最佳。

    關(guān)鍵詞:碳氮比;細(xì)菌群落;BIOLOG;多樣性指數(shù);RDA分析

    蝦、蟹混養(yǎng)是一種重要的人工養(yǎng)殖模式,該模式具有充分利用養(yǎng)殖系統(tǒng)時(shí)間和空間資源、降低餌料系數(shù)和預(yù)防相關(guān)動(dòng)物疾病的發(fā)生等優(yōu)點(diǎn),能夠提供較高的養(yǎng)殖產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益。人工養(yǎng)殖系統(tǒng)中,生物鏈短,營(yíng)養(yǎng)級(jí)少,水體中通常會(huì)殘留大量的殘餌、糞便和生物殘?bào)w等,從而導(dǎo)致氨氮、亞硝氮、硫化氫、胺類等有害物質(zhì)積累增加,當(dāng)其超過(guò)養(yǎng)殖系統(tǒng)自凈能力時(shí),會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致生態(tài)環(huán)境的惡化以及養(yǎng)殖生物疾病的暴發(fā)。

    微生物在養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)以及凈化水環(huán)境中具有重要作用。異養(yǎng)細(xì)菌可以分解系統(tǒng)中的有機(jī)物,加速氮循環(huán),從而降低養(yǎng)殖水體中的碳氮比。然而異養(yǎng)細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖與水體中碳和氮含量密切相關(guān),根據(jù)生物絮團(tuán)原理,改變水體C/N比可以促進(jìn)其生長(zhǎng)繁殖,從而降低水體氨氮濃度進(jìn)而對(duì)穩(wěn)定養(yǎng)殖環(huán)境發(fā)揮調(diào)控作用。據(jù)報(bào)道,施加微生態(tài)制劑可對(duì)弧菌等致病菌產(chǎn)生拮抗作用,從而有利于芽孢桿菌和硝化細(xì)菌等益生菌對(duì)養(yǎng)殖水體凈化作用及對(duì)養(yǎng)殖系統(tǒng)群落結(jié)構(gòu)改善作用的發(fā)揮,進(jìn)而促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物的健康生長(zhǎng)。李卓佳等在蝦池中添加芽孢桿菌,降低養(yǎng)殖水體中氨氮、亞硝氮濃度,穩(wěn)定了養(yǎng)殖環(huán)境。張曉陽(yáng)等通過(guò)菌碳調(diào)控,降低養(yǎng)殖系統(tǒng)中氨氮、亞硝氮濃度和餌料系數(shù),提高了凡納濱對(duì)蝦的成活率及產(chǎn)量。

    Biolog-Eco板技術(shù)可以反映環(huán)境微生物群落特征,主要是根據(jù)細(xì)菌群落對(duì)不同碳源利用程度的差異來(lái)表征其功能多樣性,現(xiàn)已被廣泛用于微生物群落功能多樣性的研究。鑒于異樣細(xì)菌對(duì)水體環(huán)境的凈化作用及弧菌致病作用,本實(shí)驗(yàn)采用傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法分析了碳氮比調(diào)控對(duì)蝦蟹混養(yǎng)系統(tǒng)水體中異養(yǎng)細(xì)菌和弧菌數(shù)量的變動(dòng),利用Biolog-Eco微平板法探討了不同處理水體中細(xì)菌群落功能多樣性的變化,并結(jié)合RDA分析研究了水體細(xì)菌群落碳代謝功能與環(huán)境因子之間的關(guān)系,以期在微生物群落功能方面為蝦、蟹混養(yǎng)系統(tǒng)中應(yīng)用菌碳調(diào)控技術(shù)提供一定的參考。

    1.材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)池塘與圍隔

    本研究于2014年7-10月在江蘇省贛榆縣佳信水產(chǎn)開發(fā)有限公司海水養(yǎng)殖池塘中進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)利用海水池塘陸基圍隔進(jìn)行,面積5m×5m,水深1.2~1.5m,底質(zhì)為泥沙質(zhì)。實(shí)驗(yàn)圍隔結(jié)構(gòu)參見文獻(xiàn)。實(shí)驗(yàn)期間,養(yǎng)殖水體利用充氣泵進(jìn)行連續(xù)充氣。

    1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與管理

    1.2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)置6個(gè)處理組,每組設(shè)3個(gè)平行。實(shí)驗(yàn)通過(guò)添加菌制劑和糖蜜調(diào)節(jié)養(yǎng)殖系統(tǒng),分別命名為C2(短小芽孢桿菌,1×104cfu/mL)、C3(蠟樣芽孢桿菌,1×104cfu/mL)、C4(硝化細(xì)菌,2×104cfu/mL)、C5(EM菌,1×104cfu/mL),以未潑灑菌制劑的處理為對(duì)照組C1,另外設(shè)未添加糖蜜和菌制劑的處理為對(duì)照組CO。其中,所用短小芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌均由中國(guó)海洋大學(xué)養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離于蝦蟹養(yǎng)殖池塘;硝化細(xì)菌為德國(guó)某品牌氨硝凈;EM菌來(lái)源于日本某品牌EM菌。

    實(shí)驗(yàn)圍隔中均放養(yǎng)三疣梭子蟹密度為6ind/m2,放養(yǎng)凡納濱對(duì)蝦密度為45ind/m2。實(shí)驗(yàn)用三疣梭子蟹苗及凡納濱對(duì)蝦皆購(gòu)自連云港贛榆佳信水產(chǎn)開發(fā)有限公司。三疣梭子蟹于7月15日放苗,放苗時(shí)平均甲寬(7.27±1.91)cm,平均甲長(zhǎng)(3.50±0.29)cm,平均體重(19.80±3.27)g;凡納濱對(duì)蝦經(jīng)暫養(yǎng)后于7月20日放苗,放苗時(shí)體長(zhǎng)(1.37±0.20)cm,平均體重(0.05±0.01)g。于10月5日收獲完畢。

    根據(jù)Avnimelech與盧炳國(guó)等總結(jié)的生物絮團(tuán)養(yǎng)殖系統(tǒng)的C/N公式,根據(jù)餌料投喂量調(diào)整糖蜜的添加量,通過(guò)添加糖蜜調(diào)控C/N水平為15。三疣梭子蟹餌料選用鮮活藍(lán)蛤(殼肉比為3.27,含水率為78.29%,含碳量32.78%,含氮量9.76%);凡納濱對(duì)蝦選用連云港正大農(nóng)牧有限公司生產(chǎn)的對(duì)蝦配合飼料(含水率7.00%,含碳量34.65%,含氮量6.72%)。添加碳源為購(gòu)于山東壽光某公司的糖蜜(總有機(jī)碳含量28.91%)。

    1.2.2實(shí)驗(yàn)管理鮮活藍(lán)蛤每日18:00-19:00投喂1次,投喂量參照周演根等。對(duì)蝦餌料每天7:00-8:00與18:00-19:00投喂2次。每7天檢查生長(zhǎng),根據(jù)蝦蟹生長(zhǎng)情況調(diào)整餌料投喂量。

    養(yǎng)殖期間圍隔不換水,僅補(bǔ)充因蒸發(fā)與滲漏造成的損失,水深保持在1.2~1.4 m之間。7月底開始使用增氧機(jī)充氧。每晚10:00至次日清晨6:00充氣,晴天下午2:00到4:00充氣,并根據(jù)天氣狀況調(diào)整。隨著餌料投喂量與糖蜜添加量的增加,生物絮團(tuán)逐步形成后調(diào)整成全天24 h連續(xù)充氧。糖蜜根據(jù)投餌量隨時(shí)調(diào)整,充分溶解后潑灑,每2天潑灑一次,天氣狀況不好不潑灑。

    本實(shí)驗(yàn)所用蠟樣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和硝化細(xì)菌活化后,每7~10d潑灑一次,選擇在有風(fēng)的晴天上午,潑灑糖蜜后施用。從2014年7月25日到9月30日,菌劑共潑灑7次。

    1.3樣品采集與預(yù)處理

    本實(shí)驗(yàn)于2014年7-9月開展。每月下旬,用采水器在實(shí)驗(yàn)圍隔的3個(gè)固定點(diǎn)采集中層水樣,混合每個(gè)處理的3個(gè)重復(fù)水樣,然后經(jīng)800目篩絹過(guò)濾,取適量混勻水樣置于無(wú)菌的聚乙烯瓶中,將采集水樣于4℃保溫箱迅速帶回實(shí)驗(yàn)室待分析。

    1.4日常水質(zhì)指標(biāo)測(cè)定

    每天上午6:00-7:00用溫度計(jì)測(cè)定水溫(T),用便攜式溶氧儀(SX716,上海三信儀表廠)測(cè)定溶氧(DO),每7天用便攜式pH計(jì)(pH-033,ATC)測(cè)pH,手持式折光儀(Reef Octopus)測(cè)鹽度(S)。

    按照《海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范》(GB/T12763.4-2007)中推薦的方法測(cè)定的水體中總氨氮(NH4+-N)、亞硝酸鹽(NO-一N)、硝酸鹽(NOa—N)、總氮(TN)、活性磷(PO4-P)、總磷(TP)。NH4+-N測(cè)定采用靛酚藍(lán)法,NO2-N測(cè)定采用重氮一偶氮法,NO2-N測(cè)定使用鋅鎘還原法,PO4-P測(cè)定采用鉬藍(lán)法,TN和TP采用過(guò)硫酸鉀(K2S2O8)氧化法。葉綠素a采用金相燦等的方法測(cè)定。

    1.5Biolog-ECO板反應(yīng)

    Biolog-ECO板含6類碳源共31種底物碳(3個(gè)重復(fù))的96孔板。板上含有三個(gè)對(duì)照孔,根據(jù)微生物對(duì)碳源底物的利用情況來(lái)分析微生物群落碳代謝特征(功能多樣性)。本實(shí)驗(yàn)將150μL的樣品原液或者經(jīng)無(wú)菌0.85 9/6NaCl溶液進(jìn)行10倍稀釋的水樣加人ECO板的孔內(nèi),避光條件下恒溫(28℃)培養(yǎng),酶標(biāo)儀分別測(cè)點(diǎn)樣后7d(0、24、48、72、96、120、144、168h)內(nèi)590 nm和750nm下的光密度值。

    1.6數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

    平均顏色變化率(average well color devel-opment,AWCD)主要用于檢測(cè)微生物對(duì)單一碳底物的利用能力計(jì)算方法l_1。]如下:

    AWCD=∑[(C1—R)—(Ci—R)750]/n

    式中:Ci為i孔碳底物光密度值;R為對(duì)照孔碳底物光密度值;n為培養(yǎng)基碳源種類數(shù)(取值隨碳源種類數(shù)的變化而變化)。每個(gè)單孔的實(shí)際光密度值為該碳底物在590nm與750nm的光密度差值,其中數(shù)值取值>0.06。

    本研究用培養(yǎng)72h的測(cè)定的Biolog數(shù)據(jù)來(lái)計(jì)算細(xì)菌群落對(duì)六大碳源的利用強(qiáng)度、主成分分析及功能多樣性指數(shù)。其中多樣性指數(shù)主要包括:Shannon指數(shù)(評(píng)估細(xì)菌的豐度和均度),McIntosh指數(shù)(評(píng)估細(xì)菌群落多維空間多樣性),Simpson指數(shù)(評(píng)估最常見種優(yōu)勢(shì)度),S—E均勻度指數(shù)(評(píng)估細(xì)菌均度)。

    本研究利用PCA分析和單因子方差分析(One-way ANOVA)來(lái)探討不同處理在相同時(shí)間內(nèi)細(xì)菌群落碳代謝特征的差異性。利用Ex-cel2013、SigmaPlotl2.5、SPSSl7.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析,以P

    2.結(jié)果

    2.1碳氦比調(diào)控對(duì)蝦、蟹混養(yǎng)系統(tǒng)水體中環(huán)境因子指標(biāo)

    表1結(jié)果顯示,除T、pH和S外,不同處理組水體環(huán)境因子指標(biāo)均存在顯著差異,但不同指標(biāo)趨勢(shì)有所不同??傮w上,各菌碳添加組N、P指標(biāo)含量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。其中,NOz—N以C2和C5最低,而除了C2,其它處理組NH4+一N濃度均顯著低于對(duì)照組;各添加菌碳處理組相比,C1和C2中Chl a和TP顯著高于其余處理組(P<0.05)。

    2.2碳氮比調(diào)控對(duì)蝦、蟹混養(yǎng)系統(tǒng)水體中細(xì)菌群落功能多樣性

    2.2.1

    平均顏色變化率(AWCD)

    圖1為不同養(yǎng)殖模式水體中細(xì)菌群落AWCD值隨養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的動(dòng)態(tài)變化。在同一時(shí)期,不同處理水體中細(xì)菌群落利用Biolog板上的碳源總量隨著培養(yǎng)時(shí)間的進(jìn)行總體上呈現(xiàn)上升的變化趨勢(shì),在不同時(shí)期,同一處理細(xì)菌群落對(duì)碳源總量的利用速度和能力均出現(xiàn)差異。7月,對(duì)照組CO的AWCD值最高,顯著高于處理組C1和C2(P<0.05),與其余處理組差異不顯著(P>0.05)。8月,處理組C3的AWCD值最高,明顯高于其它處理組,C2組次之,而對(duì)照組CO則降到最低值。9月,處理組C1、C3和C5的AWCD相差不大,水平較高,均顯著高于其他處理組(P<0.05)。

    2.2.2

    對(duì)六大碳源的利用變化

    圖2為不同養(yǎng)殖模式水體細(xì)菌對(duì)ECO板上不同類型碳源(聚合物、糖、羧酸、酚、胺和氨基酸)的利用情況。根據(jù)AWCD值可以看出,水體細(xì)菌對(duì)碳源利用具有選擇性,主要為聚合物、糖類和氨基酸,且在養(yǎng)殖中后期差異顯著。7月,以利用聚合物、糖類和氨基酸為主,不同處理對(duì)同一類型碳源的利用強(qiáng)度差異不顯著(P>0.05)。8月,不同處理對(duì)六大碳源的利用強(qiáng)度均顯著差異(P<0.05),均主要利用聚合物,糖類和氨基酸,其中處理組C3對(duì)這三類碳源的利用強(qiáng)度最高,顯著高于對(duì)照組CO和C1。9月,不同處理對(duì)六大碳源的利用強(qiáng)度差異顯著(P<0.05),均以聚合物和糖類的利用為主,其中處理組C1、C3和C5對(duì)這兩類碳源的利用強(qiáng)度較高,顯著高于處理組C4和CO(P<0.05)。

    2.2.3對(duì)不同碳源利用的主成分分析(PCA分析)

    圖3為不同養(yǎng)殖模式水體細(xì)菌對(duì)六大碳源利用的主成分分析結(jié)果。7月,六種碳源中提取的兩個(gè)主成分因子,分別解釋變量方差的29.41%和24.81%,其中PC2的得分系數(shù)差異顯著(P<0.05),表現(xiàn)在對(duì)照組CO與處理組C3之間。8月,PCI和PC2分別解釋36.61%和28.22%的變量方差,PCI和PC2的得分系數(shù)均差異顯著(P<0.05),其中PCI得分系數(shù)差異表現(xiàn)在:處理組C2和C3與對(duì)照組CO和C1之間,PC2表現(xiàn)在:處理組C3與其余處理組之間。9月,PCI和PC2分別解釋變量方差為53.37%和22.18%,PCI和PC2的得分系數(shù)均差異顯著(P<0.05),PCI得分系數(shù)差異表現(xiàn)在:各處理間均差異顯著(P<0.05),PC2表現(xiàn)在:處理組CO、C4和C5與其余處理組間。

    與主成分PCI、PC2具有較高相關(guān)系數(shù)的碳源(r>0.06)見表2-7月,胺、糖類和氨基酸對(duì)PCI起分異作用,表明不同處理水體細(xì)菌群落對(duì)底物碳的利用在PCI上的顯著差異是由這三類碳源導(dǎo)致的。對(duì)PC2起分異作用的碳源類型為:聚合物和羧酸。8月,對(duì)PCI起分異作用的主要碳源類型為:聚合物、糖類和氨基酸,而對(duì)PC2起分異作用的主要碳源類型為:羧酸和胺。9月,聚合物、糖類、羧酸和胺這四類碳源對(duì)PCI起分異作用,而酚和氨基酸對(duì)這兩類碳源PC2起分異作用。

    2.2.4利用碳源的多樣性指數(shù)變化

    表3為不同養(yǎng)殖時(shí)間各養(yǎng)殖模式水體細(xì)菌在培養(yǎng)72 h后利用碳源的多樣性指數(shù)。結(jié)果顯示,不同處理水體細(xì)菌群落的多樣性指數(shù)在不同養(yǎng)殖時(shí)間呈現(xiàn)不同程度的差異。7月,不同處理水體細(xì)菌群落各類多樣性指數(shù)均無(wú)顯著差異(P>0.05)。8月,McIntosh指數(shù)在各處理間差異顯著(P<0.05),且以處理組C3為最高,顯著高于其它處理組(P<0.05),而對(duì)于Simpson指數(shù)、Shannon指數(shù)和S-E均勻度指數(shù),各處理間均無(wú)顯著差異(P>0.05)。9月,各多樣性指數(shù)在不同處理間均差異顯著(P<0.05),其中處理組C3的各多樣性指數(shù)均為最高,顯著高于處理組CO和C4(P<0.05),而Simpson指數(shù)、Shannon指數(shù)和S-E均勻度指數(shù)與處理組C1差異不顯著。

    2.3碳氦比調(diào)控下蝦、蟹混養(yǎng)系統(tǒng)水體中細(xì)菌群落的碳代謝功能與環(huán)境因子之間的RDA分析

    圖4為不同模式水體細(xì)菌群落的碳代謝功能的時(shí)間變化與10種不同環(huán)境因子之間的關(guān)系。結(jié)果顯示,隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng),不同種類的環(huán)境因子影響了水體細(xì)菌群落的碳代謝功能,且代表不同處理的點(diǎn)分布在排序圖的不同空間,說(shuō)明不同處理組細(xì)菌群落存在不同程度的差異。7月,第一排序軸的特征值為53.1%,第二排序軸的特征值為21%,共能解釋74.1%的變異信息。第一排序軸與環(huán)境因子變量NO3-N(-0.3078)負(fù)相關(guān),與P04-P(O.741 1)、NH4+-N(0.684 3)、TN(0.6266)、TP(0.546 6)、Chl a(0.385 4)和NO2-—N(0.085 2)和正相關(guān),第二排序軸與環(huán)境因子變量Chl a(-0.7624)、NO2—N(-O.697 8)、NH4+一N(-0.633 4)、POt—P(-0.512 9)和TN(-0.464 9)負(fù)相關(guān),與TP(0.653 3)和NO3一N(0.229 6)和正相關(guān)。說(shuō)明影響7月份水體細(xì)菌群落碳源代謝功能環(huán)境因子主要是:Chl a、PO4-P、NO2-N、NH4+-N和TP,其中Chl a主要對(duì)AWCD(正相關(guān))、phen(正相關(guān))和carh(負(fù)相關(guān))等產(chǎn)生影響,PO4-P和NH4+一N主要對(duì)AWCD(正相關(guān))和poly(正相關(guān))等產(chǎn)生影響,N02一N主要對(duì)Shannon(正相關(guān))和phen(正相關(guān))等產(chǎn)生影響,TP主要對(duì)S-E(正相關(guān))、McIntosh(正相關(guān))、Simpson(正相關(guān))、carx(正相關(guān))和phen(負(fù)相關(guān))等產(chǎn)生影響。

    8月,前兩個(gè)排序軸的特征值為55%和25.1%,共能解釋80.1%的變異信息,第一排序軸與環(huán)境因子變量NH4+-N(-0.1984)負(fù)相關(guān),與NO3-N(O.935 5)、NO2

    一N(0.925 0)、TP(0.7290)、TN(0.5475)、P04一P(0.5353)和Chla(0.0236)正相關(guān)。第二排序軸與環(huán)境因子變量Chl a(-0.011 6)負(fù)相關(guān),與NH4+-N(0.3986)、PO4-P(0.2761)、TN(0.0876)、NO3-N(0.0760)、TP(0.0527)和NO2-N(0.0278)正相關(guān)。說(shuō)明影響8月份水體水體細(xì)菌群落碳源代謝功能的環(huán)境因子主要是:NO3-N、NO2-N、TP、TN和PO4-P。其中這些環(huán)境因子主要是對(duì):Shannon(正相關(guān))、S-E(正相關(guān))、phen(正相關(guān))和carx(負(fù)相關(guān))等產(chǎn)生影響。

    9月,前兩個(gè)排序軸的特征值為63.6%和25.1%,共能解釋88.7%的變異信息,第一排序軸與環(huán)境因子變量NO3-N(-0.0719)負(fù)相關(guān),與PO4-P(0.3897)、NH4+-N(0.2790)、TP(0.2430)、NO2--N(0.1516)、TN(0.058 4)和Chl a(0.024 9)正相關(guān)。第二排序軸與環(huán)境因子變量TP(一0.688 3)、Chl a(-0.5295)、NO2--N(-0.3724)、TN(-0.3344)、NO3--N(-0.2877)、PO4--P(-0.1732)和NH4+-N(-0.0824)負(fù)相關(guān)。說(shuō)明影響9月份水體水體細(xì)菌群落碳代謝功能的環(huán)境因子主要是:TP、Chl a、PO4-P和NO2-N。其中TP和Chl a主要對(duì)phen(正相關(guān))、Simpson(正相關(guān))、Shannon(正相關(guān))、S-E(正相關(guān))amin(負(fù)相關(guān))和carx(負(fù)相關(guān))等產(chǎn)生影響,PO4-P和NO2-N主要對(duì)carx(負(fù)相關(guān))、poly(負(fù)相關(guān))、amin(負(fù)相關(guān))和AWCD(負(fù)相關(guān))等產(chǎn)生影響。

    3.討論

    3.1碳氦比調(diào)控下蝦、蟹混養(yǎng)系統(tǒng)水體中細(xì)菌群落的Biolog分析

    Biolog方法對(duì)細(xì)菌群落多樣性的檢測(cè)是基于養(yǎng)殖環(huán)境內(nèi)細(xì)菌對(duì)不同碳源利用程度的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)的,通過(guò)檢測(cè)ECO板吸光度的變化來(lái)評(píng)價(jià)不同環(huán)境區(qū)系細(xì)菌群落的生理特性和結(jié)構(gòu)特征,還可以在空間及時(shí)間尺度上研究細(xì)菌群落的變化,具有易操作、靈敏度高、分辨能力強(qiáng)、數(shù)據(jù)豐富其可以直觀的反應(yīng)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的總體活性的優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)利用該方法研究發(fā)現(xiàn)蝦蟹混養(yǎng)系統(tǒng)不同處理水體中細(xì)菌群落對(duì)碳源總量和不同類型碳源的利用隨養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)的延長(zhǎng)差異越來(lái)越顯著,這說(shuō)明細(xì)菌群落對(duì)不同類型碳源利用喜好和對(duì)總碳源的代謝能力存在差異,反映了碳源和菌制劑的添加促使養(yǎng)殖水體中細(xì)菌群落的結(jié)構(gòu)組成產(chǎn)生差異。這可能是:在養(yǎng)殖水體中添加碳源,調(diào)節(jié)碳氮比可以促進(jìn)異養(yǎng)細(xì)菌的生長(zhǎng)引,添加芽孢桿菌可以提高水體對(duì)碳源代謝活性和利用能力,添加硝化細(xì)菌或EM菌可以凈化水質(zhì),但硝化細(xì)菌在添加一段時(shí)間后,會(huì)抑制了環(huán)境水體中異養(yǎng)細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖,影響對(duì)碳源的代謝活性,這與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相似,說(shuō)明養(yǎng)殖系統(tǒng)中添加碳源和菌制劑,影響了養(yǎng)殖環(huán)境中細(xì)菌群落的多樣性。

    Biolog的主成分分析可以用來(lái)直觀地表述細(xì)菌群落代謝特征,是表征細(xì)菌群落功能多樣性的重要手段,其分布的空間位置用來(lái)反映細(xì)菌群落對(duì)碳源底物的利用能力。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),蝦蟹混養(yǎng)系統(tǒng)不同處理水體中細(xì)菌群落對(duì)碳源的利用能力差異顯著(P<0.05)。7月,在分析圖中分布均勻,說(shuō)明不同處理間差異不顯著,隨著時(shí)間的推移,差異越來(lái)越顯著。9月,不同處理間在分析圖間的位置差異明顯,其中處理組C3和C4在分析圖中的位置與其他處理組顯著不同,處理C3對(duì)六大碳源利用強(qiáng)度在總體上顯著高于其他處理組(P<0.05),而處理組C4則對(duì)六大碳源的吸收水平較低稍高于對(duì)照組CO。這說(shuō)明碳源和菌制劑的添加促使水體細(xì)菌群落不斷發(fā)生動(dòng)態(tài)變化直到達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài),最終導(dǎo)致C3組細(xì)菌群落組對(duì)碳源的代謝能力和強(qiáng)度最大,顯著高于其它處理組。

    細(xì)菌群落多樣性指數(shù)不僅在總體上可以反應(yīng)群落功能的動(dòng)態(tài)變化,還是反映群落豐富度、均勻度和優(yōu)勢(shì)度的重要手段,但采用不同的多樣性指數(shù),會(huì)出現(xiàn)不同的研究結(jié)果l_3。。。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),不同處理水體細(xì)菌群落的McIntosh指數(shù)和Simpson指數(shù)隨著養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行呈現(xiàn)上升趨勢(shì),但八、九月相差不大,而Shannon指數(shù)和S-E均勻度指數(shù)均呈現(xiàn)先下降后上升的變化趨勢(shì)。7月,處理組C3的Simpson指數(shù)和Shannon指均較低,而McIntosh指數(shù)和S-E均勻度指數(shù)則處于中間水平,處理組C4的McIntosh指數(shù)最低。8月,McIntosh指數(shù)在處理C3組中顯著高于其它處理組,處理組C4組位于中間水平,其它多樣性指數(shù)相差不大。9月,處理組C3中各類多樣性指數(shù)均為最高,而處理組C4的McIntosh指數(shù)最低,Simpson指數(shù)和Shannon與對(duì)照組CO相差不大均顯著低。這表明處理組C3細(xì)菌群落的空間多樣性、物種豐富度和均勻度均較高,而C4組正好相反,這可能是處理組C4中存在明顯的優(yōu)勢(shì)菌群,影響了其細(xì)菌群落的多樣性和均勻度,從而影響了對(duì)底物碳總量和不同類型的利用。

    3.2碳氦比調(diào)控下蝦蟹混養(yǎng)系統(tǒng)水體中細(xì)菌群落碳代謝功能與環(huán)境因子的關(guān)系

    本實(shí)驗(yàn)采用Biolog微平板培養(yǎng)法與冗余分析(RDA)進(jìn)行相關(guān)分析,研究表明菌碳比調(diào)控下蝦蟹混養(yǎng)系統(tǒng)水體中細(xì)菌群落碳代謝功能與養(yǎng)殖環(huán)境中理化因子間具有很好的相關(guān)性。結(jié)果顯示,影響細(xì)菌群落碳代謝功能的主要環(huán)境因子7月份為:Chl a、PO4-P、NO2—N、NH4+-N,8月份為:NO3--N、NO2--N、TP、TN和PO4--P,9月份為:TP、Chl a、PO4-P和NO2--N??梢钥闯?,N元素為養(yǎng)殖期間的主要影響因子,Chl a為養(yǎng)殖初期的主要影響因子,P元素為養(yǎng)殖中、后期的主要影響因子。這可能是在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)的初期,水體中碳源含量相對(duì)較低,細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖需要的碳源主要依賴于浮游植物釋放的有機(jī)物;隨著碳源的添加,養(yǎng)殖環(huán)境中含有充足的有機(jī)碳源,這時(shí)期環(huán)境內(nèi)的NH4+-N(提供了55%~99%總氮吸收)等無(wú)機(jī)氮鹽,可以直接影響了細(xì)菌的生長(zhǎng)和代謝,也可以通過(guò)影響浮游細(xì)菌的捕食者來(lái)間接影響細(xì)菌種類的多樣性;養(yǎng)殖水體中P元素(TP和PO4--P)具有溶解性和流動(dòng)性較低的特點(diǎn),而碳源的添加,使得TP和PO4--P相對(duì)含量進(jìn)一步降低,因此P元素成為養(yǎng)殖中、后期的主要限制因子。

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