楊梅色素苷的提取及抗氧化性研究

范　芳，陳媛嬪

(廣東石油化工學院化學與生命科學學院,廣東 茂名525000)

楊梅富含多種營養(yǎng)物質，具有抗氧化等多種特性。但楊梅在貯藏過程中常出現(xiàn)色澤變化，影響楊梅質量。楊梅色澤變化與花色素苷降解密切相關。楊梅色素苷作為一種天然色素，具有無毒無害等優(yōu)點，具有抗過敏、抗病毒、抗炎、擴張血管等多種生理活性[1]，在楊梅果汁抗氧化方面起著重要作用，且在自然界中分布廣泛，原料容易獲得，近年來受到廣泛關注。

作者在提取楊梅色素苷的基礎上，重點研究楊梅色素苷的抗氧化能力，擬為天然色素的開發(fā)、楊梅色澤的控制、楊梅保健食品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1　實驗

1.1　材料、試劑與儀器

楊梅，貴州省凱里市雷山縣，市售。

工業(yè)乙醇，華中農業(yè)大學設備科；濃硫酸，信陽市化學試劑廠；鄰苯三酚、鹽酸、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、鄰二氮菲、鐵氰化鉀、三氯乙酸、氯化鐵、硫酸亞鐵、Tris、抗壞血酸、過氧化氫，國藥集團化學試劑有限公司；以上試劑均為分析純。

數(shù)顯鼓風干燥箱，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；分光光度計，上海精密科學儀器有限公司；電子天平，上海綠宇精密儀器制造有限公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇富華儀器有限公司；冰箱，海爾集團；冷凍離心機，上海誠銘有限公司；真空抽濾機，上海申勝生物技術有限公司。

1.2　方法

1.2.1楊梅色素苷的提取

分別采用浸提法、熱煮法、粉碎法提取楊梅色素苷。

1)浸提法

取25 g冷凍楊梅果實解凍后，去核勻漿，用125 mL的1％鹽酸多次浸提，直至果實無紅色，然后用濾紙過濾提取液，于4 000 r·min-1離心10 min，取上清液。

2) 熱煮法

取冷凍楊梅果實解凍去核后，將楊梅渣25 g加入125 mL經稀鹽酸調制的pH值為3的40％乙醇水溶液中，在50 ℃下攪拌40 min，于4 000 r·min-1離心10 min，取上清液。

3)粉碎法

取25 g冷凍楊梅果實解凍去核后，加入125 mL蒸餾水，置于實驗圓筒內，用實驗壓榨機粉碎樣品，用濾紙過濾提取液，于4 000 r·min-1離心10 min，取上清液。

1.2.2最大吸收波長的確定

取1 mL浸提法提取液稀釋至10 mL，在波長460～560 nm范圍內測定吸光度，確定最大吸收波長。

1.2.3不同方法提取楊梅色素苷含量的比較

取浸提法、熱煮法、粉碎法提取的楊梅色素苷提取液各1 mL，加水稀釋至10 mL，在最大吸收波長處測定吸光度。吸光度值越大，表明色素苷含量越多。

1.2.4楊梅色素苷抗氧化性的測定

1.2.5楊梅色素苷與抗壞血酸還原力的比較

分別取0.25 mL濃度分別為10.0 mg·mL-1、12.0 mg·mL-1、18.0 mg·mL-1、24.0 mg·mL-1、30.0 mg·mL-1的抗壞血酸和楊梅色素苷提取液，加入2.5 mL 0.2 mol·L-1磷酸緩沖溶液(pH值6.6)和2.5 mL 1％鐵氰化鉀，在50 ℃下保溫20 min，然后加入2.5 mL 10％的三氯乙酸、5 mL H2O和1 mL 0.1％氯化鐵，于700 nm波長處測定吸光度。吸光度值越高，表明還原力越強[4]。每組實驗測定3次，取平均值。

2　結果與討論

2.1　楊梅色素苷最大吸收波長的確定(圖1)

圖1　楊梅色素苷在可見光區(qū)的吸收光譜

由圖1可知，在波長為460～560 nm區(qū)間內，楊梅色素苷的吸光度隨著波長的增大先增大后減小，在510 nm處達到最大值。因此，確定楊梅色素苷的最大吸收波長為510 nm。

2.2　不同方法提取楊梅色素苷含量的比較(圖2)

圖2　不同方法提取楊梅色素苷含量的比較

由于提取過程中的壓力、溫度、溶劑等因素的不同，使得不同提取方法得到的楊梅色素苷含量不同。由圖2可知，浸提法提取的楊梅色素苷吸光度最大，在510 nm處測得的吸光度為0.198；其次是熱煮法，吸光度為0.121；最小是粉碎法，吸光度為0.054。3種方法提取的楊梅色素苷含量大小為:浸提法>熱煮法>粉碎法。

2.3　不同方法提取的楊梅色素苷對清除率的比較(圖3)

圖3　不同方法提取的楊梅色素苷對清除率的比較

2.4　不同方法提取的楊梅色素苷對·OH清除率的比較

·OH是已知的最強氧化劑，反應性極強，但作用半徑小，僅能和附近的分子反應。鄰二氮菲是一種雜環(huán)化合物，可與Fe2+螯合后在水溶液中呈紅色，當其中的Fe2+被氧化成Fe3+后，其吸光度降低幅度與Fe2+的氧化量成正比，因而可以用來測定·OH的含量。不同方法提取的楊梅色素苷對·OH清除率的比較見圖4。

圖4　不同方法提取的楊梅色素苷對·OH清除率的比較

由圖4 可知，3種方法提取的楊梅色素苷對·OH均有一定的清除作用，清除率大小為：浸提法>熱煮法>粉碎法。

2.5　不同方法提取的楊梅色素苷還原力的比較(圖5)

圖5　不同方法提取的楊梅色素苷還原力的比較

由圖5可知，3種方法提取的楊梅色素苷的還原力大小為：浸提法>熱煮法>粉碎法。

2.6　不同濃度楊梅色素苷對的清除作用(圖6)

圖6　楊梅色素苷濃度對清除率的影響

2.7　楊梅色素苷與抗壞血酸還原力的比較(圖7)

由圖7可以看出，楊梅色素苷的吸光度顯著高于抗壞血酸，說明其具有極強的還原力。并且楊梅色素苷的還原力具有濃度效應，濃度越大還原力越強。

一般來說，還原力和抗氧化能力存在著一定的協(xié)同作用[5]。Tanaka等[6]認為植物組織抗氧化能力是隨著還原力的增強而提高的。本實驗結果進一步證實了這一觀點。

圖7　楊梅色素苷與抗壞血酸還原力的比較

3　結論

(1)楊梅色素苷的最大吸收波長為510 nm。浸提法、熱煮法、粉碎法等3種方法提取楊梅色素苷的含量大小依次為：浸提法>熱煮法>粉碎法。

(3)楊梅色素苷與抗壞血酸的還原力都隨濃度的增大而提高，且在相同濃度下，楊梅色素苷的還原力高于抗壞血酸。

楊梅色素苷的抗氧化能力較強，為天然抗氧化劑的很好材料，可成為天然色素與抗氧化劑結合的環(huán)保食材。

參考文獻：

[1]胡子龍.用彝族楊梅醬消腫止痛[J].中國民族，2002，(2)：72.

[2]龔建武,王曉春.山楂水提液清除氧自由基作用的研究[J].實用預防醫(yī)學，2005，12(3):568-569.

[3]金鳴，蔡亞欣，李金榮，等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測H2O2/Fe2+產生的羥自由基[J].生物化學與生物物理進展，1996，23(6):553-555.

[4]YEN G C,DUH P D.Antioxidative properties of methanolic extracts from peanut hulls[J].Journal of the American Oil Chemists′ Society，1993，70(4)：383-386.

[5]DUH P D,YEN G C.Antioxidative activity of three herbal water extracts[J].Food Chemistry,1997，60(4)：639-645.

[6]TANAKA M,KUEI C W,NAGASHIMA Y,et al.Application of antioxidative Maillard reaction products from histidine and glucose to sardine products[J].Nippon Suisan Gakkaishi,1988,54(8)：1409-1414.