GC法測定測定消曚眼膏中龍腦和異龍腦的含量

朱雪妍　呂軼峰　馮旭

【摘要】目的：建立GC法測定測定消曚眼膏中龍腦和異龍腦的含量。方法：采用DB-WAX色譜柱（柱長30m，內(nèi)徑0.53mm，膜厚度1μm），載氣為氮?dú)?，分流比?0：1，柱溫為140℃，進(jìn)樣口溫度為180℃，檢測器溫度為200℃。結(jié)果：龍腦在0.0317～0.5076μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=1.0000），平均加樣回收率為99.22%（n=9），RSD為1.69%；異龍腦在0.0196～0.3136μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9991），平均加樣回收率為98.32%（n=9），RSD為2.22%。結(jié)論：本法靈敏、準(zhǔn)確，可作為消曚眼膏的質(zhì)量控制指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】GC；消曚眼膏；龍腦；異龍腦

【中圖分類號(hào)】R283.6【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1007-8517（2015）20-0014-02

GCDeterminationofBorneolandIsoborneolinXiaomengEyeOintment

ZhuXueyan1LuYifeng1FengXu2

1.GuangxiInstituteforFoodandDrugControl，Nanning530021，China；2.GuangxiUniversityofChineseMedicine，Nanning530200，China

Abstract：Objective：ToestablishGCmethodfordeterminationofborneolandisoborneolinXiaomengeyeointment.Methods：TheDB-WAXchromatographiccolumn（30m×0.53mm×1μm）wasadoptedwithnitrogenasthecarriergasandthesplitratioof10：1.Thecolumntemperaturewas140℃，theinjectionporttemperaturewas180℃andthedetectortemperaturewas200℃.Results：Thelinearrangeofborneolwasintherangeof0.0317～0.5076μg（r=1.0000），andtheaveragerecovery（n=9）was99.22%andRSDwas1.69%；Thelinearrangeofisoborneolwasintherangeof0.0196～0.3136μg（r=1.0000），andtheaveragerecovery（n=9）was98.32%andRSDwas2.22%.Conclusion：Thismethodisconvenient，rapid，accurateandreproducible，andcanbeusedforqualitycontrolofXiaomengeyeointment.

Keywords：GC；Xiaomengeyeointment；BorneolandIsoborneol

消曚眼膏是由珍珠粉、冰片及硼砂制成的復(fù)方制劑，臨床用于角膜炎癥，角膜潰瘍所致的角膜瘢痕（角膜白班、云翳、斑翳）及角膜混濁，對石灰燒傷、麻疹、水痘、天花、高燒、腹瀉等疾病或創(chuàng)傷形成的陳舊性角膜瘢痕等均有良好的療效。為確保消曚眼膏的臨床療效及有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，研究參考有關(guān)文獻(xiàn)[1-4]，采用氣相色譜法[5-7]對冰片中的龍腦和異龍腦進(jìn)行測定。該方法專屬性強(qiáng)，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于消曚眼膏的質(zhì)量控制。

1儀器與材料

1.1儀器安捷倫公司6890氣相色譜儀（FID檢測器）；MILLI-Q純水發(fā)生器；梅特勒電子天平。

1.2材料龍腦對照品（批號(hào)：110881-200706，含量為99.2%）、異龍腦對照品（批號(hào)：1512-200201）由中國藥品生物制品檢定所提供；消曚眼膏（批號(hào)：20111001，廣西南珠制藥有限公司）；陰性對照樣品由廣西南珠制藥有限公司提供。水為超純水，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：DB-WAX（柱長30m，內(nèi)徑0.53mm，膜厚度1μm）[8-9]；進(jìn)樣口溫度：180℃；檢測器溫度：200℃；柱溫：140℃；進(jìn)樣量為1μl；分流比：10：1。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1ml含5mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取龍腦對照品、異龍腦對照品各10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加環(huán)己烷使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。

2.2.2供試品溶液的制備取消曚眼膏約0.5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入環(huán)己烷20ml，稱定重量，超聲處理（功率320W，頻率40KHz）10min，放冷，用環(huán)己烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，冷凍離心5min（5000r/min），精密量取上清液10ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)分別吸取對照品溶液、供試品溶液各1μl注入氣相色譜儀，在上述色譜條件下，陰性樣品、對照品、樣品色譜圖見圖1。龍腦和異龍腦的保留時(shí)間分別為16.3、18.3min；樣品中其他成分對龍腦和異龍腦的測定無干擾。各峰與鄰近峰達(dá)到基線分離，分離度良好（R>1.）。

2.4線性范圍精密稱取龍腦對照品127.93mg、異龍腦對照品78.41mg，置100ml量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液貯備液；分別精密吸取對照品貯備溶液8、6、4、2、1、0.5ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml（濃度5.028mg/ml），加環(huán)己烷至刻度，搖勻。進(jìn)樣測定。以對照品進(jìn)樣濃度·內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣濃度-1為橫坐標(biāo)（X），對照品峰面積·內(nèi)標(biāo)峰面積-1為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果龍腦的回歸方程為：Y=2.8392X+0.0107（n=6，r=1.0000），在0.0317～0.5076μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；異龍腦的回歸方程為：Y=2.7717X-0.0007（n=6，r=0.9991），在0.0196～0.3136μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)對同一供試品溶液，按正文擬訂的色譜條件，連續(xù)測定6次。結(jié)果6次測定龍腦和異龍腦總含量的RSD為0.51%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液1μl，分別于0，3，6，9，12，15，18h注入氣相色譜儀，測定龍腦和異龍腦總含量，其RSD為0.85%，結(jié)果表明供試品溶液在18h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)對同一批樣品，分別取樣6份，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行溶液制備，在上述“2.1”項(xiàng)氣相色譜條件下進(jìn)行分析測定，結(jié)果龍腦和異龍腦總含量平均值為23.04mg/g，RSD=0.75%（n=6），結(jié)果表明，本法的重復(fù)性較好。

2.8回收率試驗(yàn)精密稱取龍腦對照品127.93mg、異龍腦對照品78.41mg，置100ml量瓶中，加環(huán)己烷使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。取九個(gè)50ml具塞錐形瓶，分別編號(hào)1～9，第1～3精密加入對照品貯備液4.5ml；第4～6精密加入對照品貯備液3ml；第7～9精密加入對照品貯備液1.5ml，用氮?dú)獯蹈?，取已知含量的樣品（龍腦含量13.7077mg/g、異龍腦含量9.3323mg/g）約0.25g，共9份，精密稱定，分別置以上50ml具塞錐形瓶中，照擬定標(biāo)準(zhǔn)供試品溶液項(xiàng)下的方法制備、測定，計(jì)算回收率，結(jié)果龍腦和異龍腦回收率分別為99.22%（RSD=1.69%，n=9）、98.32%（RSD=2.22%，n=9）。

2.9樣品測定按正文擬訂的含量測定方法，測定了6批樣品中龍腦和異龍腦含量，樣品測定結(jié)果見表1。

表16批樣品中龍腦和異龍腦含量測定結(jié)果

（n=2）

3討論

3.1樣品中的龍腦和異龍腦總含量差異很大，含量最高的為26.2mg/g；含量最低的為7.8mg/g。參照處方量，每1g中含有30mg冰片，由于冰片的揮發(fā)性，在生產(chǎn)工藝、貯藏條件及運(yùn)輸過程中均有不同程度的損失而造成龍腦和異龍腦含量差異大。

3.2考察極性柱（DB-WAX）的不同固定液膜厚度、不同內(nèi)徑與弱極性柱（DB-17）對樣品測定的影響。結(jié)果弱極性柱（DB-17）在相同柱溫條件下色譜峰分離不開，而極性柱（DB-WAX）的色譜峰峰形較好，分離良好。由于本品同時(shí)對冰片進(jìn)行樟腦的雜質(zhì)檢查，而使用DB-WAX（30m×0.25mm，0.25μm）樟腦峰與雜質(zhì)峰分離度欠佳，故選擇極性柱DB-WAX（30m×0.53mm，1.0μm）作為測定用色譜柱。另外，本品為油性基質(zhì)，過多注入氣相色譜儀會(huì)造成儀器的污染，故選用進(jìn)樣量1μl分流比10：1。

3.3考察水楊酸甲酯和萘兩種內(nèi)標(biāo)成分，結(jié)果二種成分的保留時(shí)間分別為24min和23min，二種成分對樣品中龍腦和異龍腦峰均無干擾，考慮到萘具有致畸、致癌、致突變作用，故選用水楊酸甲酯作為內(nèi)標(biāo)。

3.4由于本品為油性基質(zhì)，無水乙醇不能將基質(zhì)分散使測定成分溶解出來，故在無水乙醇溶液中未能檢測出龍腦和異龍腦[10]。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，超聲處理后，若采用濾過的方式，基質(zhì)會(huì)附在濾紙而使濾過速度極慢，且龍腦和異龍腦都具有揮發(fā)性，采用冷凍離心的方式則快速方便。另外，測定結(jié)果顯示環(huán)己烷的提取效果明顯優(yōu)于乙酸乙酯，故選擇環(huán)己烷作為提取溶劑。

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（收稿日期：2015.07.18）