動物學(xué)

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調(diào)控Tim-3通路在免疫性肝損傷大鼠中對Th17細(xì)胞的影響

張文，張蓓，李秀梅，等

目的：建立免疫性肝損傷模型，探討Tim-3通路在阻斷或激活時對Th17細(xì)胞的影響.方法：大鼠尾靜脈注射刀豆蛋白A（ConA）8周，建立免疫性肝損傷模型.無菌取脾臟制備脾淋巴細(xì)胞，取外周血分離血清后于-20℃保存，取肝臟組織放入4%的多聚甲醛中固定備用.在96孔板上將脾淋巴細(xì)胞平均分成5組，即阻斷實驗組、阻斷對照組、激活實驗組、激活對照組和ConA對照組.用Tim-3的單克隆抗體即Anti-Tim-3來阻斷Tim-3通路；用Tim-3的重組配體galectin-9來激活Tim-3通路，37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，收集細(xì)胞上清液于-20℃保存.生化分析法測血清中ALT、AST和ALB的表達(dá)；HE染色觀察肝臟組織的病理變化；免疫組化法測肝臟組織中IL-17A和ROR-γt蛋白的表達(dá)；ELISA法測細(xì)胞上清液中IL-17A及IL-6的表達(dá)；實時定量PCR測各組脾淋巴細(xì)胞ROR-γt mRNA的表達(dá).結(jié)果：與對照組相比，模型組HE染色可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤、肝臟組織損傷及較多的假小葉，免疫組化可見IL-17A和ROR-γt蛋白的表達(dá)明顯升高；與阻斷對照組相比，阻斷實驗組中IL-17A和IL-6的水平升高（P＜0.05）；與激活對照組相比，激活實驗組中IL-17A和IL-6的水平降低（P＜0.05）；實時定量PCR顯示與阻斷對照組相比，阻斷實驗組中ROR-γt mRNA的表達(dá)明顯增加（P＜0.05）.結(jié)論：免疫性肝損傷的發(fā)病與Th17細(xì)胞密切相關(guān)，免疫調(diào)控Tim-3通路可通過影響Th17細(xì)胞效應(yīng)，進(jìn)而參與免疫性肝損傷的發(fā)病機(jī)制.

免疫性肝損傷；Tim-3通路；Th17細(xì)胞；大鼠

來源出版物：中國實驗動物學(xué)報，2015，23（1）： 7-12聯(lián)系郵箱：張蓓，zhangbei124@aliyun.com