白芍總苷治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的療效及對(duì)CD11a表達(dá)的影響

王 丹王上上

白芍總苷治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的療效及對(duì)CD11a表達(dá)的影響

王 丹1王上上2

目的： 評(píng)價(jià)白芍總苷（TGP）治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的療效及對(duì)CD11a基因表達(dá)的影響。方法： 42例SLE患者口服潑尼松0.5～1mg/（kg·d），其中21例加用TGP，1.8 g/d，療程3個(gè)月。治療前后進(jìn)行系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)指數(shù)（SLEDAI）評(píng)分，RT-PCR檢測(cè)CD11a表達(dá)水平。結(jié)果：

系統(tǒng)性紅斑狼瘡； 白芍總苷； SLE疾病活動(dòng)指數(shù)； CD11a

系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種累及全身多個(gè)系統(tǒng)的自身免疫性疾病，多見(jiàn)于年輕女性，發(fā)病機(jī)制尚不明確，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，病程遷延反復(fù)。目前對(duì)SLE的常規(guī)治療主要還是糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑為主，但其諸多毒副作用限制了其臨床使用。白芍總苷是一種新型的雙向免疫調(diào)節(jié)劑，目前已經(jīng)應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病等的治療，但其對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療研究較少，尚缺乏較嚴(yán)格的臨床對(duì)照研究。本研究選擇臨床確診的SLE患者，在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加用白芍總苷（TGP），探討TGP對(duì)SLE患者SLEDAI的影響、毒副作用及對(duì)細(xì)胞因子的表達(dá)的影響，為T(mén)GP進(jìn)一步應(yīng)用于臨床治療提供研究基礎(chǔ)。

1　對(duì)象與方法

1.1病例選擇及用藥方法 42例SLE患者均為我院門(mén)診及住院患者中首次就診或未經(jīng)治療復(fù)發(fā)的患者，排除感染及有關(guān)合并癥，所有病例均符合2009年系統(tǒng)性紅斑狼瘡國(guó)際合作臨床中心（SLICC）修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中女36例，男6例，將其隨機(jī)分為兩組，每組21例，對(duì)照組采用臨床常規(guī)治療方法，試驗(yàn)組采用臨床常規(guī)治療方法加用TGP治療。常規(guī)用藥：據(jù)病情活動(dòng)性及年齡、體重，給予潑尼松0.5～l mg/（kg·d）口服或相當(dāng)于上述劑量的甲潑尼龍口服。病情活動(dòng)控制后按每周遞減10%的速度減量。若患者在治療過(guò)程中出現(xiàn)不良反應(yīng)時(shí)將給予相應(yīng)的對(duì)癥處理。試驗(yàn)用藥：白芍總苷（TGP，商品名帕夫林，深圳朗生醫(yī)藥公司生產(chǎn)）服藥劑量為0.6 g/次，日3次，療程3個(gè)月。

分別于治療前、治療后1個(gè)月、3個(gè)月根據(jù)SLE疾病活動(dòng)指數(shù)對(duì)患者進(jìn)行評(píng)分，并晨起空腹抽外周靜脈血，F(xiàn)icoll淋巴細(xì)胞分離液分離PBMC，-80℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2Realtime-PCR檢測(cè)CD11a基因的表達(dá) 采用Trizol Reagent（Invitrogen公司）提取細(xì)胞RNA，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度及純度，用凝膠電泳法檢測(cè)RNA的完整性。使用Takara公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。以β-actin為管家基因，引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，引物序列為：β-actin：上游引物：5'-ACCCAGATCATGTTTGAGACC-3'，下游引物：5'-AGGGCATACCCCTCGTAGA-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度155 bp；CD11a：上游引物：5'-AAACGGAAGGACCCTGATGCTC-3'，下游引物：5'-TGTAGCGGATGATGTCTTTGGC-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度211 bp。使用Takara公司的SYBR試劑進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)，采用7500 Real Time PCR System（ABI公司）進(jìn)行產(chǎn)物擴(kuò)增及結(jié)果分析。反應(yīng)體系如下：SYBR Premix Ex Taq 10μL，上游引物0.4μL，下游引物0.4μL，DNA模板2μL，滅菌雙蒸水7.2μL。PCR循環(huán)條件設(shè)置：95℃變性30 s后，95℃ 15 s，58℃20 s，72℃ 15 s擴(kuò)增45個(gè)循環(huán)。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上讀取擴(kuò)增曲線、熔解曲線和Ct值。重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取均值，用2-△△Ct法計(jì)算目的基因和內(nèi)參基因的表達(dá)相對(duì)值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS 14.0軟件進(jìn)行處理，采用T檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較試驗(yàn)組與對(duì)照組SLEDAI的變化水平、PBMC中CD11a基因表達(dá)的差異以及不良反應(yīng)發(fā)生率，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1一般情況比較 患者性別構(gòu)成兩組相同，試驗(yàn)組（糖皮質(zhì)激素+TGP）與對(duì)照組（糖皮質(zhì)激素）平均年齡分別為27.34±7.65歲和29.28±8.95歲，兩組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.2兩組患者治療前后SLEDAI評(píng)分的變化 結(jié)果見(jiàn)表1。治療前兩組SLEDAI評(píng)分無(wú)明顯差別，治療后1個(gè)月其SLEDAI降低水平仍無(wú)明顯差異，治療后3個(gè)月試驗(yàn)組SLEDAI明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）。

表1　SLE患者治療前后SLEDAI評(píng)分比較

2.3兩組患者治療前后外周血單個(gè)核細(xì)胞CD11a的表達(dá)變化及與SLEDAI的相關(guān)關(guān)系 使用Realtime-PCR方法檢測(cè)CD11a基因的mRNA表達(dá)水平，結(jié)果見(jiàn)表2，治療前兩組CD11a的表達(dá)水平無(wú)明顯差異，治療后，1個(gè)月兩組均較治療前明顯降低，但其降低水平無(wú)明顯差異，治療后3個(gè)月試驗(yàn)組CD11a的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）。

表2　各組外周血單個(gè)核細(xì)胞的CD11a的表達(dá)水平

對(duì)42例SLE患者治療前SLEDAI評(píng)分及CD11a的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)CD11a的表達(dá)水平與患者SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)（r=0.506，P＜0.05），見(jiàn)圖1。

圖1　SLE患者CD11a的表達(dá)水平與SLEDAI之間的相關(guān)關(guān)系

2.4兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況 試驗(yàn)組有5例出現(xiàn)腹瀉，大便3～5次/d，其中1例伴有腹痛，便后可緩解，藥物減量或停藥后癥狀消失。兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況，見(jiàn)表3，其不良反應(yīng)發(fā)生率無(wú)顯著性差異（χ2=0.864，P=0.35＞0.05）。但試驗(yàn)組腹瀉發(fā)生率明顯高于對(duì)照組。

表3　各組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況

3　討論

SLE是一種反復(fù)發(fā)作、可導(dǎo)致多種器官損害的自身免疫性結(jié)締組織病，其免疫學(xué)特征是大量自身抗體的產(chǎn)生和伴隨T細(xì)胞減少的自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞的增多，結(jié)果導(dǎo)致體內(nèi)大量致病性自身抗體和免疫復(fù)合物的產(chǎn)生，引起多器官的損傷。因SLE存在多種免疫調(diào)節(jié)功能的異常，因此免疫調(diào)節(jié)是臨床治療SLE的重要手段。

白芍為毛茛科植物芍藥的干燥根，有養(yǎng)血柔肝、斂陰收汗、益氣止痹通絡(luò)的作用，是風(fēng)濕免疫性疾病、肝炎、肝硬化等疾病治療的重要組方之一，受到醫(yī)藥學(xué)界的廣泛重視。白芍總苷是由植物芍藥根中提取的一組糖苷類物質(zhì)，包括芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥花苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷，統(tǒng)稱為白芍總苷，其中芍藥苷占總苷量的90%以上，是白芍的主要有效成分，藥理及臨床研究發(fā)現(xiàn)白芍總苷具有抑制和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、抗炎、止痛等作用，它能夠調(diào)節(jié)Th/Ts細(xì)胞比值1、腫瘤壞死因子的分泌，2還有研究認(rèn)為T(mén)GP參與某些細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)。3目前在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征等疾病中TGP已經(jīng)得到較多的應(yīng)用，但其在SLE的治療方面的研究較少，本研究通過(guò)在SLE的常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用TGP，研究其對(duì)SLE疾病活動(dòng)指數(shù)及細(xì)胞因子表達(dá)方面的影響，同時(shí)觀察其臨床副反應(yīng)，為其在SLE的治療方面提供研究證據(jù)。

SLEDAI包括9個(gè)器官系統(tǒng)的24項(xiàng)臨床指標(biāo)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，不同指標(biāo)計(jì)分不同，可能的最高分為105分，分?jǐn)?shù)越高，活動(dòng)性越高。SLEDAI臨床操作較為簡(jiǎn)單，敏感性和特異性均超過(guò)90%，是我國(guó)目前使用最廣泛的SLE臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)。我們通過(guò)對(duì)治療前及治療后SLEDAI的評(píng)分發(fā)現(xiàn)無(wú)論試驗(yàn)組還是對(duì)照組，其SLEDAI均較治療前顯著降低，治療1個(gè)月時(shí)試驗(yàn)組與對(duì)照組相比其降低水平無(wú)明顯差異，而3個(gè)月療程結(jié)束時(shí)其評(píng)分明顯較對(duì)照組為低，尤其在關(guān)節(jié)癥狀及外周血象的改善方面，試驗(yàn)組明顯優(yōu)于對(duì)照組。在不良反應(yīng)的發(fā)生方面，試驗(yàn)組與對(duì)照組未見(jiàn)明顯差異，且不良反應(yīng)多較輕微，均可耐受。但白芍總苷對(duì)胃腸道有一定的刺激，故試驗(yàn)組腹瀉的發(fā)生率明顯增加，藥物減量或停藥后癥狀緩解。對(duì)照組出現(xiàn)1例轉(zhuǎn)氨酶升高患者，經(jīng)對(duì)癥治療后好轉(zhuǎn)?？梢?jiàn)白芍總苷在SLE輔助治療方面有著較好的有效性及安全性，具有良好的應(yīng)用前景。

CD11a與CD18共同組成淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1（LFA-1）分子，LFA-1對(duì)白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附起關(guān)鍵的作用，參與T細(xì)胞的激活，其過(guò)度表達(dá)可以引起自身免疫反應(yīng)。CD11a過(guò)度表達(dá)所誘發(fā)形成的自身反應(yīng)性T細(xì)胞可在小鼠體內(nèi)誘發(fā)狼瘡樣疾病，而采用抗鼠CD11a單克隆抗體治療狼瘡鼠可減少其自身抗體的產(chǎn)生，阻抑自身免疫反應(yīng)的發(fā)展，緩解狼瘡腎炎的癥狀；4張耀華等5研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者CD11a的表達(dá)水平與SLEDAI呈正相關(guān)，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。由此可見(jiàn)，在SLE的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，CD11a的過(guò)度表達(dá)起著不容忽視的作用。本研究通過(guò)對(duì)SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞CD11a表達(dá)水平的研究，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組與對(duì)照組在經(jīng)過(guò)治療后CD11a表達(dá)水平均明顯降低，且療程結(jié)束時(shí)試驗(yàn)組CD11a表達(dá)水平亦顯著低于對(duì)照組，可見(jiàn)白芍總苷在對(duì)細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)方面也有著較好的作用。

白芍總苷可在多個(gè)環(huán)節(jié)影響細(xì)胞免疫、體液免疫以及炎癥過(guò)程，具有明顯的抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用，其可抑制PGE2的表達(dá)，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，6抑制B細(xì)胞的增殖，下調(diào)TNF-α、IL-28的表達(dá)水平以及抑制NF-κB的活化等，7并可以通過(guò)調(diào)節(jié)基因甲基化水平調(diào)控基因表達(dá)，8臨床已用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE、銀屑病等免疫相關(guān)性疾病，9亦有使用白芍總苷治療慢性蕁麻疹10及壞死性黃色肉芽腫11成功的報(bào)道，其不良反應(yīng)輕微，耐受性良好，本研究顯示白芍總苷在SLE的治療方面具有較好的臨床作用。SLE的治療通常需長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑才能得以控制，但這些藥物由于對(duì)血液系統(tǒng)及肝腎等器官的不良反應(yīng)造成患者無(wú)法長(zhǎng)期使用，白芍總苷有望在一定程度上改善這一狀況，其不良反應(yīng)發(fā)生率低且輕微，臨床應(yīng)用安全，在增進(jìn)療效的同時(shí)減少用藥風(fēng)險(xiǎn)，為SLE等免疫相關(guān)性疾病的治療提供了新的選擇。

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（收稿：2015-05-03 修回：2015-06-30）

Therapeutic efficacy of totalglucosides of paeony in the treatmen t of system ic lupus erythematosusand the effects on the levels of CD11a

WANG Dan，WANG Shang-shang.Department ofDermatology，Maternaland Child Care Service Centre，Juye，Heze，274900

Objective：To assess the efficacy of total glucosides of paeony（TGP）in the treatment of systemic lupus erythematosus（SLE）and the effects on the levels of CD11a.Methods：Forty two patientswith SLE were treated withmetacortandracin 0.5～1mg/kg·d，and of them 21 patientswere treated with additional TGP，1.8 g/d for 3months.The system ic lupus erythematosus disease activity index（SLEDAI）was assessed and the level of CD11a was detected by RT-PCR before and after treatment.Results：SLEDAI and the level of CD11a in all patientswere significantly decreased after treatment，especially in the TGP group（P＜0.05）. There was no significant difference in adverse reaction in the patients treated with additional TGP. Conclusion：TGP has an additional therapeutic effect in combination with steroid in the treatment of SLE and does not increase the incidence of adverse reactions.

systemic lupus erythematosus；total glucosides of paeony；SLEDAI；CD11a

1山東省菏澤市巨野縣婦幼保健院皮膚科，274900

2復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院皮膚科，上海，200040

與治療前相比，患者SLEDAI評(píng)分和CD11a基因的表達(dá)水平均顯著下降，加用TGP的患者下降更明顯（P＜0.05）。加用TGP患者與未加用患者不良反應(yīng)發(fā)生率無(wú)明顯差異。結(jié)論： 潑尼松加用TGP能提高治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡療效，且不增加不良反應(yīng)發(fā)生率。