• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    早期快速反應(yīng)基因5在宮頸癌放療輻射敏感性中的研究進(jìn)展

    2015-10-28 20:02:14劉洋吳玉梅
    關(guān)鍵詞:放射治療宮頸癌

    劉洋 吳玉梅

    [摘要] 低輻射敏感性是造成宮頸癌復(fù)發(fā)率高的重要原因之一。如何提高放療敏感性進(jìn)而增強(qiáng)放療效果,一直以來(lái)困擾著臨床醫(yī)師。近年來(lái),隨著醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)水平的不斷進(jìn)步,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有關(guān)腫瘤細(xì)胞增殖、調(diào)控以及凋亡的多條分子通路,為探究宮頸癌輻射敏感性機(jī)制提供了良好的平臺(tái)。早期快速反應(yīng)基因5(IER5)作為腫瘤相關(guān)因子的一員,已有研究證實(shí),其在多種腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮著抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡以及增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞輻射敏感性的作用。因此,IER5基因有可能成為宮頸癌放射治療的新靶點(diǎn),具有潛在的臨床使用價(jià)值,值得深入研究。

    [關(guān)鍵詞] 早期快速反應(yīng)基因5;宮頸癌;放射治療;輻射敏感性

    [中圖分類號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210(2015)09(c)-0035-04

    [Abstract] Low radiation insensitivity is one of the high recurrence factors in cervical cancer radiotherapy. How to enhance radiation sensitivity and then improve the efficacy of radiotherapy has long remained an important obstacle in clinic. In recent years, the constant evolution of molecular biology technology has led to more discoveries about the pathways of cancer cell proliferation, regulation and apoptosis from gene level, which provide a good platform for exploring radiation sensitivity mechanism of cervical cancer. Existing studies have confirmed, immediate-early response gene 5 (IER5), as a member of tumor correlation family, can suppress proliferation, accelerate the apoptosis as well as increase the radiation sensitivity in a wide variety of tumor cells. Therefore, the potential clinical use value of cervical cancer radiotherapy-IER5-may become a new target for cervical cancer radiotherapy, which is worthy of in-depth study.

    [Key words] Immediate-early response gene 5; Cervical cancer; Radiotherapy; Radiation sensitivity

    最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明,宮頸癌在全球非發(fā)達(dá)地區(qū)因癌癥導(dǎo)致死亡的病因中位居第二,僅次于乳腺癌,嚴(yán)重威脅著女性的生命健康[1]。據(jù)估計(jì),全世界每年新確診的宮頸癌病例可達(dá)500 000例,而據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),其中約有75 000例來(lái)自中國(guó)。在一項(xiàng)有關(guān)中國(guó)宮頸癌全國(guó)性大樣本分析中顯示,對(duì)于晚期宮頸癌患者而言,放療仍舊是首選的治療方案[2]。近年來(lái),已有研究發(fā)現(xiàn)某些基因及其表達(dá)產(chǎn)物可影響腫瘤細(xì)胞輻射敏感性,其中包括細(xì)胞周期調(diào)控基因[3-4]、細(xì)胞凋亡基因[5-6]和DNA損傷修復(fù)基因[7]。早期快速反應(yīng)基因5(immediate-early response gene 5,IER5)作為輻射效應(yīng)相關(guān)基因,參與細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié),有可能成為增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞輻射敏感性、提高放療效果、降低復(fù)發(fā)率的另一重要基因靶點(diǎn),因而值得進(jìn)一步關(guān)注與研究?,F(xiàn)就IER5基因在宮頸癌放療輻射敏感性中的研究現(xiàn)狀綜述如下:

    1 早期快速反應(yīng)基因5

    IER5是慢動(dòng)力早期反應(yīng)基因家族成員之一,1999年最早由Williams等[8]發(fā)現(xiàn)并命名,其在眾多動(dòng)物中均有該基因的表達(dá),人的IER5基因位于1號(hào)染色體1q25.3處,全長(zhǎng)2369 bp,編號(hào)NM_016545,編碼308個(gè)氨基酸,其蛋白質(zhì)為核內(nèi)蛋白。

    1.1 IER5基因與細(xì)胞周期的關(guān)系

    國(guó)內(nèi)外多個(gè)研究組,通過(guò)外部刺激或施加化學(xué)物質(zhì)后檢測(cè)IER5基因表達(dá)水平的變化后發(fā)現(xiàn),細(xì)胞中IER5基因表達(dá)均有增高,提示IER5基因參與了細(xì)胞周期的調(diào)節(jié),影響細(xì)胞分裂與凋亡。Wu等[9]研究發(fā)現(xiàn)切除大鼠卵巢后,其子宮中的IER5基因表達(dá)降低,但對(duì)去勢(shì)后大鼠注射雌二醇后,其子宮內(nèi)的IER5基因表達(dá)水平出現(xiàn)再次升高。Okada等[10]在丙戊酸誘導(dǎo)神經(jīng)管畸形的小鼠胚胎中,發(fā)現(xiàn)IER5基因表達(dá)升高。Ahn等[11]利用cDNA芯片技術(shù)對(duì)采集到的11例宮頸癌患者的腫瘤組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)有33個(gè)基因發(fā)生了2倍以上的上調(diào),其中IER5基因上調(diào)倍數(shù)最高。Savitz等[12]在研究抑郁伴情緒障礙患者炎癥和神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)基因差異表達(dá)中發(fā)現(xiàn),其患者的血液中IER5基因表達(dá)水平上調(diào)。

    基于以上結(jié)論,研究者們進(jìn)一步圍繞IER5基因在細(xì)胞增殖與凋亡的調(diào)控機(jī)制中所發(fā)揮的作用進(jìn)行了假設(shè)與探究。Zeng等[13]在研究PSP誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的凋亡機(jī)制中發(fā)現(xiàn),其凋亡過(guò)程可能是由上調(diào)IER5等早期轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的。Nakamura等[14]在研究IER5對(duì)抑制急性髓系白血病細(xì)胞增殖機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn),IER5過(guò)表達(dá)可使CDC25B表達(dá)減少,致使白血病祖細(xì)胞停滯于G2/M期。與此同時(shí),該實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn),IER5降低CDC25B表達(dá)是通過(guò)其與CDC25B啟動(dòng)子結(jié)合后抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-YB、p300來(lái)實(shí)現(xiàn)的。Ishikawa等[15]利用HeLa細(xì)胞系研究HSF1轉(zhuǎn)錄過(guò)程的影響因子時(shí),其結(jié)果顯示HSF1的轉(zhuǎn)錄激活需要IER5、PP2A/B的參與,且其過(guò)程為正反饋。該實(shí)驗(yàn)還提出,生長(zhǎng)因子、熱休克因子、電離輻射、化療、細(xì)胞毒性和DNA損傷刺激誘導(dǎo)IER5的表達(dá),是通過(guò)該基因?qū)SF1進(jìn)行調(diào)控來(lái)實(shí)現(xiàn)的。但由于各研究實(shí)驗(yàn)間所研究對(duì)象和實(shí)驗(yàn)方法的不統(tǒng)一,IER5在不同類型細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制也不盡相同。對(duì)于IER5基因在宮頸癌細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制仍有待于進(jìn)一步的探究。

    1.2 IER5基因與輻射效應(yīng)的關(guān)系

    近年來(lái),國(guó)內(nèi)外研究者們已證實(shí),IER5基因在多種惡性腫瘤細(xì)胞中與輻射效應(yīng)關(guān)系密切。國(guó)內(nèi)的Ding等[16-17]以及國(guó)外的Kis等[18]利用基因芯片篩選輻射敏感基因,雙方均獨(dú)立篩選到了同一個(gè)輻射誘導(dǎo)表達(dá)上調(diào)基因:IER5。其中Kis等[18]利用基因芯片篩查技術(shù)對(duì)人纖維原細(xì)胞進(jìn)行了IER5基因輻射效應(yīng)關(guān)系的研究。他們發(fā)現(xiàn)當(dāng)給予人纖維原細(xì)胞γ射線照射時(shí),IER5基因表達(dá)出現(xiàn)上調(diào),并且其表達(dá)與輻射劑量和時(shí)間之間具有時(shí)效和量效關(guān)系。由于IER5基因可能通過(guò)磷酸化和/或降解來(lái)發(fā)揮快速調(diào)節(jié)作用,所以把它歸為DNA損傷反應(yīng)組,表明其在細(xì)胞對(duì)有絲分裂信號(hào)和輻射做出反應(yīng)的機(jī)制中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。

    2 IER5基因與宮頸癌輻射敏感性的關(guān)系

    雖然宮頸癌被認(rèn)為是輻射敏感腫瘤,但是不同個(gè)體間的輻射敏感性卻仍舊存在很大差異。因此,尋求影響宮頸癌輻射敏感性的作用機(jī)制成為了研究熱點(diǎn)[19]。經(jīng)過(guò)國(guó)內(nèi)外學(xué)者的共同努力,對(duì)于輻射誘導(dǎo)IER5的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制已初步明朗。國(guó)內(nèi)對(duì)于IER5基因增強(qiáng)輻射敏感性的研究主要集中于宮頸癌與肝癌,但其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性仍有待于更多中心提供的RCT實(shí)驗(yàn)做進(jìn)一步的驗(yàn)證?,F(xiàn)主要圍繞IER5基因?qū)m頸癌輻射敏感性的影響介紹如下:

    丁庫(kù)克等[20]用Real-time PCR技術(shù)分析60Co γ射線照射正常人淋巴母細(xì)胞(AHH1)、宮頸癌細(xì)胞(HeLa)后IER5基因表達(dá)的影響。該實(shí)驗(yàn)分別從量效和時(shí)效的角度進(jìn)行研究,從量效的角度看,兩種細(xì)胞中IER5基因的相對(duì)表達(dá)量都隨著劑量的增大表現(xiàn)出先增加后下降再上升的變化;從時(shí)效的角度看,AHH1細(xì)胞,對(duì)2 Gy的照射反應(yīng)比10 Gy要快,而HeLa細(xì)胞,在兩種照射劑量下的反應(yīng)沒(méi)有太大差異,且兩種細(xì)胞都在接受照射2 h后出現(xiàn)基因表達(dá)的上升。該結(jié)果與之前Kis等[18]所得出的結(jié)果一致(即人纖維原細(xì)胞在經(jīng)2 Gy輻射照射2 h后出現(xiàn)IER5基因表達(dá)的上升)。因此,筆者預(yù)測(cè)IER5基因有可能成為宮頸癌輻射損傷另一重要的分子生物學(xué)標(biāo)志物,其對(duì)宮頸癌放療的潛在應(yīng)用價(jià)值不容忽視。

    基于以上研究成果,有學(xué)者進(jìn)一步利用小干擾RNA(siRNA)轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞和Real-time PCR測(cè)定IER5基因的抑制效果的方法,成功構(gòu)建了特異性抑制IER5基因的IER5-siRNA-HeLa細(xì)胞系[21]。此后,Ding等[17]借助于IER5-siRNA-HeLa細(xì)胞系,進(jìn)一步對(duì)IER5基因受輻射后影響細(xì)胞周期的機(jī)制進(jìn)行了研究。對(duì)IER5敲低的IER5-siRNA-HeLa細(xì)胞系進(jìn)行輻射結(jié)束后4 h,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞開始于G2/M期發(fā)生阻滯,致使停留在S期的細(xì)胞比例增高。而S期細(xì)胞的輻射敏感性最低,因此,這一細(xì)胞周期的再分布使HeLa細(xì)胞對(duì)輻射的敏感性降低。反之,筆者推測(cè)提高IER5基因可增加宮頸癌細(xì)胞的輻射敏感性。

    這項(xiàng)鼓舞人心的結(jié)果使得將IER5基因應(yīng)用于增強(qiáng)宮頸癌放療輻射敏感性成為可能,促使研究者們對(duì)宮頸癌細(xì)胞中輻射誘導(dǎo)IER5的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制做出進(jìn)一步的探究,尋找轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的基因啟動(dòng)位點(diǎn)及作用通路。崔巍等[22]運(yùn)用缺失體構(gòu)建、定點(diǎn)突變、電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)及染色質(zhì)免疫共沉淀(CHIP)等技術(shù),以宮頸癌HeLa細(xì)胞為載體,對(duì)輻射誘導(dǎo)IER5的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了研究,確定了IER5基因啟動(dòng)子區(qū)域、轉(zhuǎn)錄因子和結(jié)合位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)IER5基因啟動(dòng)子最可能的范圍為-408~-238 bp,其具有GCF和NFI兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子。其中GCF的2個(gè)結(jié)合位點(diǎn)分別位于IER5基因啟動(dòng)子的-388~-382 bp和-274~-270 bp處;NFI的結(jié)合位點(diǎn)位于IER5基因啟動(dòng)子的-362~-357 bp。GCF對(duì)順式作用元件起負(fù)性調(diào)節(jié)作用,NFI對(duì)順式作用元件起正性調(diào)節(jié)作用。

    輻射誘導(dǎo)IER5的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制已經(jīng)初步得到證實(shí),接下來(lái),筆者將進(jìn)一步研究如何通過(guò)給予宮頸癌放療患者外源性特異性結(jié)合物,激活I(lǐng)ER5基因轉(zhuǎn)錄通路,從而使癌細(xì)胞盡可能多地阻滯于輻射敏感期,即G2/M期,增強(qiáng)輻射敏感性,真正實(shí)現(xiàn)從實(shí)驗(yàn)室到臨床應(yīng)用的飛躍。

    3 IER5聯(lián)合宮頸癌放療的研究前景與展望

    近年來(lái),隨著醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)領(lǐng)域趨于成熟,放射生物學(xué)現(xiàn)已從細(xì)胞水平進(jìn)入到大分子水平,從純實(shí)驗(yàn)室過(guò)渡到臨床初步應(yīng)用階段。對(duì)于治療惡性腫瘤的研究也逐漸開始轉(zhuǎn)向基因水平?;蛑委煟òㄐ迯?fù)替代體內(nèi)細(xì)胞基因缺陷或通過(guò)導(dǎo)入某種基因使其過(guò)量表達(dá)而實(shí)現(xiàn)治療疾病的目的)應(yīng)運(yùn)而生,并將可能成為繼外科手術(shù)、放療、化療之后另一治療惡性腫瘤新武器。目前,基因放療(genetic radiotherapy)[23]的治療模式(即先以基因治療的方法靶向處理腫瘤細(xì)胞,增強(qiáng)其輻射敏感性后再聯(lián)合放療)已經(jīng)成為了研究熱點(diǎn),并且越來(lái)越多的基因增敏劑逐漸進(jìn)入了臨床試驗(yàn)階段[24]。

    很多學(xué)者在不斷地探索,應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù),試圖找到提高宮頸癌放療敏感性、特異性的基因。特異性的基因標(biāo)志對(duì)于宮頸癌放療的作用機(jī)制、早期診斷放療敏感性、決定放療及綜合治療方案、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)情況和預(yù)測(cè)放療預(yù)后、為靶向治療提供新的靶點(diǎn)以及基因放療都有重要的意義。然而,放療對(duì)宮頸癌的作用涉及大量的相關(guān)基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)調(diào)控的改變,任何單一基因和腫瘤標(biāo)志的檢測(cè)都有其局限性[25-26]。對(duì)于IER5基因在增強(qiáng)宮頸癌放療敏感性中的研究仍需逐步完善與深入。目前,研究者們已經(jīng)明確證實(shí)了輻射誘導(dǎo)IER5基因在宮頸癌細(xì)胞凋亡中的作用,在體外成功構(gòu)建了IER5沉默的HeLa細(xì)胞系,并初步證實(shí)了輻射誘導(dǎo)IER5的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。接下來(lái),IER5基因在增強(qiáng)宮頸癌放療敏感性中的應(yīng)用需要進(jìn)一步進(jìn)行臨床試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] Torre LA,Bray F,Siegel RL,et al. Global cancer statistics,2012 [J]. CA Cancer J Clin,2015,65(2):87-108.

    [2] Li S,Hu T,Lv W,et al. Changes in prevalence and clinical characteristics of cervical cancer in the People's Republic of China:a study of 10,012 cases from a nationwide working group [J]. Oncol,2013,18(10):1101-1107.

    [3] Li ZL,Liang S,Wang ZC,et al. Expression of Smac induced by the Egr1 promoter enhances the radiosensitivity of breast cancer cells [J]. Cancer Gene Ther,2014,21(4):142-149.

    [4] Niazi MT,Mok G,Heravi M,et al. Effects of DNA-dependent protein kinase inhibition by NU7026 on DNA repair and cell survival in irradiated gastric cancer cell line N87 [J]. Current oncology,2014,21(2):91-96.

    [5] Yang H,Tang Y,Guo W,et al. Up-regulation of microRNA-138 induce radiosensitization in lung cancer cells [J]. Tumour Biol,2014,35(7):6557-6565.

    [6] Luo YM,Xia NX,Yang L,et al. CTC1 increases the radioresistance of human melanoma cells by inhibiting telomere shortening and apoptosis [J]. Int J Mol Med,2014,33(6):1484-1490.

    [7] Zhao J,Liu K,Lu J,et al. Alternariol induces DNA polymerase β expression through the PKA-CREB signaling pathway [J]. Int J Oncol,2012,40(6):1923-1928.

    [8] Williams M,Lyu MS,Yang YL,et al. Ier5,a novel member of the slow-kinetics immediate-early genes [J]. Genomics,1999,55(3):327-334.

    [9] Wu X,Pang ST,Sahlin L,et al. Gene expression profiling of the effects of castration and estrogen treatment in the rat uterus [J]. Biol Reprod,2003,69(4):1308-1317.

    [10] Okada A,Kushima K,Aoki Y,et al. Identification of early-responsive genes correlated to valproic acid-induced neural tube defects in mice [J]. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol,2005,73(4):229-238.

    [11] Ahn WS,Bae SM,Lee JM,et al. Searching for pathogenic gene functions to cervical cancer [J]. Gynecol Oncol,2004,93(1):41-48.

    [12] Savitz J,F(xiàn)rank MB,Victor T,et al. Inflammation and neurological disease-related genes are differentially expressed in depressed patients with mood disorders and correlate with morphometric and functional imaging abnormalities [J]. Brain Behav Immun,2013,(31):161-171.

    [13] Zeng F,Hon CC,Sit WH,et al. Molecular characterization of Coriolus versicolor PSP-induced apoptosis in human promyelotic leukemic HL-60 cells using cDNA microarray [J]. Int J Oncol,2005,27(2):513-523.

    [14] Nakamura S,Nagata Y,Tan L,et al. Transcriptional repression of Cdc25B by IER5 inhibits the proliferation of leukemic progenitor cells through NF-YB and p300 in acute myeloid leukemia [J]. PLoS One,2011,6(11):e280-e211.

    [15] Ishikawa Y,Kawabata S,Sakurai H. HSF1 transcriptional activity is modulated by IER5 and PP2A/B55 [J]. Febs Lett,2015,589(10):1150-1155.

    [16] Ding KK,Yang CJ,Shen JJ,et al. Gamma-ray up-regulated holocarboxylasesynthetase gene [J]. Cell Mol Neurobiol,2009,29(3):383-389.

    [17] Ding KK,Shang ZF,Hao C,et al. Induced expression of the IER5 gene by gamma-ray irradiation and its involvement in cell cycle checkpoint control and survival [J]. Radiat Environ Biophys,2009,48(2):205-213.

    [18] Kis E,Szatmári T,Keszei M,et al. Microarrayanalysis of radiation response genes in primary human fibroblasts [J]. Int J Radiat Oncol Biol Phys,2006,66(5):1506-1514.

    [19] Fujiyoshi N,Ushijima K,Kawano K,et al. Radiation effects on DNA content of cervical cancer cells:a rapid evaluation of radiation sensitivity by laser scanning cytometry [J]. Mol Clin Oncol,2015,3(1):51-54.

    [20] 丁庫(kù)克,沈晶晶,許莉莉,等.γ射線照射對(duì)IER5基因mRNA表達(dá)的影響[J].中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志,2008, 28(1):5-8.

    [21] 李莉,趙煥英,楊川杰,等.利用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建IER5-SiRNA-Hela細(xì)胞系[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2011,15(1):3-6.

    [22] 崔巍,尹玲玲,董凌月,等.早期反應(yīng)基因Ier5啟動(dòng)子區(qū)輻射敏感的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)研究[J].中華發(fā)射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志,2012,32(1):15-19.

    [23] Guo Z,Shu Y,Zhou H,et al. Radiogenomics helps to achieve personalized therapyby evaluating patient responses to radiation treatment [J]. Carcinogenesis,2015,36(3):307-317.

    [24] Yang ZX,Wang D,Wang G,et al. Clinical study ofrecombinantadenovirus-p53 combined with fractionated stereotactic radiotherapy for hepatocellular carcinoma [J]. J Cancer Res Clin Oncol,2010,136(4):625-630.

    [25] Petera J,Sirak I,Beranek M,et al. Molecular predictive factors of outcome of radiotherapy in cervical cancer [J]. Neoplasma,2011,58(6):469-475.

    [26] Baiocchi G,Begnami MD,F(xiàn)ukazawa EM,et al. Prognostic value of nuclear factor kappa B expression in patients with advanced cervical cancer undergoing radiation therapy followed by hysterectomy [J]. J Clin Pathol,2012,65(7):614-618.

    (收稿日期:2015-06-02 本文編輯:張瑜杰)

    猜你喜歡
    放射治療宮頸癌
    廣東放射治療輻射安全現(xiàn)狀
    核安全(2022年3期)2022-06-29 09:17:56
    中老年女性的宮頸癌預(yù)防
    預(yù)防宮頸癌,篩查怎么做
    基于自設(shè)計(jì)圖像處理技術(shù)實(shí)現(xiàn)放射治療文件的讀取和顯示
    脊柱轉(zhuǎn)移瘤立體定向放射治療研究進(jìn)展
    咽及喉部鱗癌放射治療技術(shù)研究進(jìn)展
    E-cadherin、Ezrin在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    食管疾病(2015年3期)2015-12-05 01:45:07
    胸腺瘤放射治療研究進(jìn)展
    顱咽管瘤放射治療進(jìn)展
    Survivin、NF-кB和STAT3 mRNA在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義
    少妇的丰满在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 视频区欧美日本亚洲| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 午夜福利一区二区在线看| 成人影院久久| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产黄色免费在线视频| 免费高清在线观看日韩| 99re6热这里在线精品视频| avwww免费| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产精品一二三区在线看| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 秋霞在线观看毛片| 欧美激情久久久久久爽电影 | 老司机靠b影院| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 丰满饥渴人妻一区二区三| 欧美精品亚洲一区二区| 日韩免费高清中文字幕av| 老司机深夜福利视频在线观看 | 91麻豆精品激情在线观看国产 | 日韩视频在线欧美| 国产日韩欧美亚洲二区| 人妻久久中文字幕网| 女人精品久久久久毛片| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲七黄色美女视频| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲av电影在线进入| 99国产精品免费福利视频| 亚洲精品一二三| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲三区欧美一区| 一二三四在线观看免费中文在| 丝袜脚勾引网站| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 男男h啪啪无遮挡| 国产av国产精品国产| 精品第一国产精品| 国产一区二区 视频在线| 国产高清videossex| 午夜成年电影在线免费观看| 91麻豆av在线| av网站在线播放免费| 国产男人的电影天堂91| 爱豆传媒免费全集在线观看| av片东京热男人的天堂| 成人国产av品久久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产精品成人在线| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲av国产av综合av卡| 日韩人妻精品一区2区三区| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 伊人亚洲综合成人网| 69av精品久久久久久 | 国产免费现黄频在线看| 国产精品.久久久| 性高湖久久久久久久久免费观看| 十八禁网站免费在线| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 十八禁网站网址无遮挡| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三 | 高清黄色对白视频在线免费看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久中文字幕一级| 色94色欧美一区二区| 亚洲精品美女久久av网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产伦人伦偷精品视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲精品自拍成人| 国产成人影院久久av| 亚洲美女黄色视频免费看| 69精品国产乱码久久久| 最黄视频免费看| 欧美日韩一级在线毛片| 国产激情久久老熟女| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产欧美日韩一区二区精品| 免费在线观看黄色视频的| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲免费av在线视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 久久影院123| 91老司机精品| 大片免费播放器 马上看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产视频一区二区在线看| 少妇粗大呻吟视频| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲 国产 在线| 丁香六月天网| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产主播在线观看一区二区| 久久中文看片网| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产黄色免费在线视频| 麻豆国产av国片精品| 国产国语露脸激情在线看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 桃花免费在线播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久久久精品精品| av电影中文网址| av不卡在线播放| 欧美成人午夜精品| 悠悠久久av| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 免费在线观看完整版高清| 国产三级黄色录像| 黄频高清免费视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 中国美女看黄片| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 免费不卡黄色视频| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产成人av激情在线播放| 91精品国产国语对白视频| 日韩免费高清中文字幕av| www日本在线高清视频| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲精品国产av蜜桃| 日韩电影二区| 免费在线观看完整版高清| 午夜福利在线免费观看网站| 欧美精品一区二区大全| 亚洲美女黄色视频免费看| 日本vs欧美在线观看视频| www.熟女人妻精品国产| 国产免费视频播放在线视频| 日韩免费高清中文字幕av| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲专区中文字幕在线| 国产淫语在线视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲九九香蕉| 久久久久久久久久久久大奶| 黄片大片在线免费观看| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲avbb在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 黄色 视频免费看| 国产淫语在线视频| 欧美日本中文国产一区发布| 久久天堂一区二区三区四区| 精品人妻在线不人妻| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲五月婷婷丁香| 人人妻人人澡人人看| 狂野欧美激情性xxxx| 久久热在线av| 精品国产国语对白av| 久久国产精品影院| 少妇粗大呻吟视频| 国产日韩欧美在线精品| 1024香蕉在线观看| 91av网站免费观看| 日韩大码丰满熟妇| 中文字幕色久视频| 欧美久久黑人一区二区| 欧美性长视频在线观看| 999久久久国产精品视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲黑人精品在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产精品 国内视频| bbb黄色大片| 夫妻午夜视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美在线黄色| 日本黄色日本黄色录像| 久久精品国产亚洲av高清一级| 制服诱惑二区| 国产精品欧美亚洲77777| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久国产精品影院| 99国产极品粉嫩在线观看| 午夜福利,免费看| 成在线人永久免费视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美中文综合在线视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| www日本在线高清视频| 欧美 日韩 精品 国产| 久热这里只有精品99| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 1024视频免费在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一区二区三区四区激情视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲av美国av| 电影成人av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| av国产精品久久久久影院| 下体分泌物呈黄色| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| av视频免费观看在线观看| 国产亚洲精品久久久久5区| bbb黄色大片| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美性长视频在线观看| 好男人电影高清在线观看| 高清视频免费观看一区二区| 69av精品久久久久久 | 欧美日韩视频精品一区| 黑人猛操日本美女一级片| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久国产精品大桥未久av| 在线观看免费日韩欧美大片| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲国产成人一精品久久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 夜夜夜夜夜久久久久| xxxhd国产人妻xxx| 欧美成人午夜精品| 久久久精品免费免费高清| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 一区二区三区激情视频| h视频一区二区三区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久香蕉激情| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲五月色婷婷综合| 国产亚洲精品第一综合不卡| 免费高清在线观看日韩| 国产极品粉嫩免费观看在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美精品亚洲一区二区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲国产av新网站| xxxhd国产人妻xxx| 超碰97精品在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 99九九在线精品视频| 91字幕亚洲| 午夜福利在线免费观看网站| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 免费在线观看日本一区| 亚洲五月色婷婷综合| 考比视频在线观看| 满18在线观看网站| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一本综合久久免费| 成人三级做爰电影| 91九色精品人成在线观看| 好男人电影高清在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 午夜福利在线观看吧| 欧美国产精品一级二级三级| 美女国产高潮福利片在线看| 91成人精品电影| 国产男女超爽视频在线观看| 国产成人av教育| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲男人天堂网一区| 黄片大片在线免费观看| 精品一区在线观看国产| 国产亚洲av高清不卡| 久久亚洲国产成人精品v| 午夜福利在线观看吧| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲av美国av| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品一区二区免费欧美 | 国产免费现黄频在线看| 两人在一起打扑克的视频| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲精品一区蜜桃| 免费观看av网站的网址| 亚洲免费av在线视频| 超碰成人久久| 精品一品国产午夜福利视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 又紧又爽又黄一区二区| 精品视频人人做人人爽| 视频在线观看一区二区三区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 麻豆乱淫一区二区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 午夜免费鲁丝| 久久久久久久大尺度免费视频| 五月开心婷婷网| 亚洲伊人久久精品综合| 日韩免费高清中文字幕av| 免费少妇av软件| 日韩人妻精品一区2区三区| av天堂久久9| 欧美成人午夜精品| 久久中文看片网| 亚洲天堂av无毛| 一级毛片精品| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 免费日韩欧美在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 91国产中文字幕| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲精品国产av蜜桃| 99精国产麻豆久久婷婷| 可以免费在线观看a视频的电影网站| www日本在线高清视频| 人妻 亚洲 视频| 香蕉国产在线看| 亚洲av成人一区二区三| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美精品一区二区大全| 成人影院久久| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 黑丝袜美女国产一区| 操美女的视频在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看 | 女人精品久久久久毛片| 亚洲专区字幕在线| 一区福利在线观看| 亚洲精品自拍成人| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲性夜色夜夜综合| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 97精品久久久久久久久久精品| 午夜福利,免费看| 精品国产乱码久久久久久小说| netflix在线观看网站| 精品国产一区二区三区四区第35| 中国美女看黄片| 久久久久久久精品精品| 嫩草影视91久久| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美中文综合在线视频| 国产视频一区二区在线看| 一二三四社区在线视频社区8| 三级毛片av免费| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久狼人影院| 大香蕉久久成人网| 久久久久久久精品精品| 丁香六月天网| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 精品亚洲成国产av| 电影成人av| 亚洲av成人一区二区三| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 黄片大片在线免费观看| 中文字幕高清在线视频| 精品一区二区三卡| 超色免费av| 91精品伊人久久大香线蕉| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 十八禁人妻一区二区| 精品高清国产在线一区| 成年动漫av网址| 后天国语完整版免费观看| av电影中文网址| 亚洲成人国产一区在线观看| 69精品国产乱码久久久| 国产精品久久久久成人av| 1024香蕉在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 午夜激情av网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲三区欧美一区| 99国产综合亚洲精品| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲精品自拍成人| 色播在线永久视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 男人爽女人下面视频在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲免费av在线视频| 亚洲欧美激情在线| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲国产精品一区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| a级毛片在线看网站| 国产免费视频播放在线视频| 男女无遮挡免费网站观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 老司机影院成人| 国产一区二区三区综合在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 国产高清视频在线播放一区 | 国产成+人综合+亚洲专区| 国产精品久久久人人做人人爽| 一区福利在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 老司机福利观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品久久蜜臀av无| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久中文字幕一级| 青青草视频在线视频观看| tube8黄色片| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 亚洲七黄色美女视频| 两个人看的免费小视频| 欧美97在线视频| 欧美日韩一级在线毛片| 精品福利观看| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 中国美女看黄片| 高清欧美精品videossex| 黄片小视频在线播放| 女人精品久久久久毛片| 999久久久精品免费观看国产| 天堂中文最新版在线下载| 精品少妇久久久久久888优播| 国产一区有黄有色的免费视频| 一区在线观看完整版| a级毛片黄视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 91成人精品电影| 男人操女人黄网站| 久久久久网色| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 9色porny在线观看| 欧美在线黄色| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久人人爽人人片av| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| av天堂在线播放| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产在线一区二区三区精| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 日韩视频在线欧美| 三级毛片av免费| 欧美日韩黄片免| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一区二区日韩欧美中文字幕| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 性色av一级| 午夜福利在线观看吧| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 丁香六月天网| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 婷婷色av中文字幕| 亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久ye,这里只有精品| 搡老岳熟女国产| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 欧美日韩黄片免| 最新的欧美精品一区二区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久久国产精品麻豆| 我的亚洲天堂| 另类亚洲欧美激情| av又黄又爽大尺度在线免费看| 自线自在国产av| 国产一区二区三区av在线| 久久人人爽人人片av| 电影成人av| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 免费观看av网站的网址| 9191精品国产免费久久| 女人久久www免费人成看片| 青青草视频在线视频观看| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 欧美一级毛片孕妇| 午夜福利视频在线观看免费| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久久久久久大尺度免费视频| 黄片大片在线免费观看| 九色亚洲精品在线播放| 国产成人精品久久二区二区91| 午夜91福利影院| 啦啦啦 在线观看视频| 久久热在线av| 欧美变态另类bdsm刘玥| 老司机福利观看| 丝袜喷水一区| 十分钟在线观看高清视频www| 丝袜在线中文字幕| 久久九九热精品免费| 久久人人爽人人片av| 色精品久久人妻99蜜桃| 老司机亚洲免费影院| 91av网站免费观看| 91九色精品人成在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 日本av手机在线免费观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久久国产一区二区| 搡老岳熟女国产| 国产97色在线日韩免费| videos熟女内射| 一区二区av电影网| 18禁观看日本| 香蕉国产在线看| 亚洲精品国产区一区二| 成年人黄色毛片网站| 妹子高潮喷水视频| 麻豆av在线久日| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲av日韩在线播放| 女性被躁到高潮视频| 欧美xxⅹ黑人| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 大型av网站在线播放| 女性被躁到高潮视频| 大型av网站在线播放| 手机成人av网站| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲国产精品一区三区| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产精品免费大片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲精品乱久久久久久| tube8黄色片| 亚洲精品乱久久久久久| 在线观看一区二区三区激情| 少妇的丰满在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| www.精华液| 国产精品国产av在线观看| 成人影院久久| 亚洲国产精品999| 国产成人av激情在线播放| 在线精品无人区一区二区三| 一级毛片女人18水好多| 99国产精品免费福利视频| 久久99热这里只频精品6学生| 高清视频免费观看一区二区| 精品第一国产精品| 日本精品一区二区三区蜜桃| 精品少妇久久久久久888优播| 日韩三级视频一区二区三区| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲av成人一区二区三| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一本综合久久免费| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 精品久久久精品久久久| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产成+人综合+亚洲专区| 在线看a的网站| 日韩 亚洲 欧美在线| 免费高清在线观看视频在线观看|