愈寧心軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

凱迪日耶·玉蘇普，白夢(mèng)娜，譚睿，王艷

（1.西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川成都610031；2.西南交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，四川成都610031）

愈寧心軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

凱迪日耶·玉蘇普1，白夢(mèng)娜1，譚睿2，王艷1

（1.西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川成都610031；2.西南交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，四川成都610031）

目的建立愈寧心軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對(duì)葛根進(jìn)行定性鑒別。采用高效液相色譜法測(cè)定葛根素的含量，色譜柱為Agilent HC-C18柱（150mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm，流速為1.0mL/min，柱溫為室溫，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果在選定的薄層色譜條件下，層析斑點(diǎn)清晰，分離效果好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。含量測(cè)定時(shí)，葛根素質(zhì)量濃度在84.4～422.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.999 3），平均回收率為95.13%，RSD為3.09%（n=6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，可作為愈寧心軟膠囊的質(zhì)量控制方法。

愈寧心軟膠囊；葛根素；薄層色譜法；高效液相色譜法

愈寧心軟膠囊是廣州奇星藥業(yè)有限公司研制的現(xiàn)代復(fù)方制劑，由野葛、天麻、大棗等中藥材組方，具有解痙止痛、增強(qiáng)腦及冠狀動(dòng)脈血流量等功效，臨床上用于高血壓頭痛、頭暈，頸項(xiàng)疼痛、冠心病、心絞痛、神經(jīng)性頭痛及早期突發(fā)性耳聾等癥。愈寧心軟膠囊主要活性成分為葛根素、大豆苷元等。本試驗(yàn)中采用薄層色譜（TLC）法對(duì)方中葛根進(jìn)行了定性鑒別，并應(yīng)用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定葛根素的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供了可行的方法［1-2］。

1　儀器與試藥

HP1100型HPLC儀（美國(guó)惠普）；SL302K型電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）。葛根購(gòu)自成都市新荷花藥業(yè)公司，經(jīng)西南交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院譚睿教授鑒定為正品；葛根素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110752-201015）；愈寧心軟膠囊（廣州奇星藥業(yè)有限公司）；陰性樣品（按處方工藝制得缺葛根樣品）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1葛根定性鑒別［3-4］

稱(chēng)取軟膠囊內(nèi)容物約1 g，加水10 mL，置分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取3次，每次10 mL，合并萃取液，水浴揮干，殘?jiān)蛹状?0mL溶解，作為供試品溶液。取陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg溶質(zhì)的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法［2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB］試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.2葛根素含量測(cè)定［5-6］

2.2.1色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；流速：1.0mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)應(yīng)不低于2 500。

圖1　薄層色譜圖

2.2.2溶液制備

精密稱(chēng)取葛根素對(duì)照品21.1mg，加甲醇制成每1mL含4.22mg葛根素的溶液，作為對(duì)照品溶液；稱(chēng)取軟膠囊內(nèi)容物約0.5g，精密稱(chēng)定，加甲醇稀釋并定容10 mL容量瓶中，吸取0.5 mL，加甲醇稀釋至10mL容量瓶中，作為供試品溶液。取陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制備，得陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3方法學(xué)考察［7-9］

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取2.2.2項(xiàng)下3種溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰，見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，葛根素的峰保留時(shí)間約為12min；葛根素與其相鄰峰的分離度大于2；葛根素色譜峰分離良好，且本品中其他成分對(duì)葛根素的含量測(cè)定無(wú)干擾。

圖2　高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密稱(chēng)取葛根素對(duì)照品21.1 mg，加甲醇制成每mL含4.22mg葛根素的溶液，作為對(duì)照品溶液，稀釋成質(zhì)量濃度分別為84.4，126.6，168.8，211.0，253.2，422.0μg/mL，進(jìn)樣10μL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）、對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=16.156-108.04X，r=0.999 3（n=6）。結(jié)果表明，葛根素質(zhì)量濃度在84.4～422.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為253.2μg/mL的葛根素對(duì)照品溶液10μL連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果葛根素峰面積的RSD為0.56%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為020520）樣品5份，分別按樣品測(cè)定法測(cè)定，測(cè)定5次。結(jié)果平均含量為2.86 mg/g，RSD為1.11%（n=5），表明本方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，于0，0.5，1，1.5，2，4 h時(shí)分別進(jìn)樣，每次10μL，記錄峰面積。結(jié)果RSD為1.099%（n=6），表明供試品溶液在4 h內(nèi)較穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的同一批樣品，精密稱(chēng)定，分別加入葛根素對(duì)照品溶液適量，按2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，依法進(jìn)樣。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　葛根素加樣回收試驗(yàn)（n=6）

2.2.4樣品含量測(cè)定

取5批樣品，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，并計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為020520，020521，020522，020803，020806樣品中葛根素含量分別為2.68，2.77，2.56，3.01，2.98mg/g。

3　討論

方中葛根的薄層鑒別，曾用硅膠H-CMCNa作薄層板，醋酸乙酯-丙酮-水（6.5∶4.5∶1.2）作展開(kāi)劑，鑒別效果不理想，各斑點(diǎn)與葛根素主斑點(diǎn)未能分開(kāi)。經(jīng)摸索后采用展開(kāi)條件為氯仿-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）進(jìn)行展開(kāi)，在樣品斑點(diǎn)中，葛根素和大豆苷元斑點(diǎn)均能與其他斑點(diǎn)達(dá)到很好分離，且斑點(diǎn)圓整，無(wú)拖尾現(xiàn)象。

葛根為愈寧心軟膠囊制劑的主藥，葛根素為葛根中的主要有效成分，因此測(cè)定葛根素含量可作為樣品質(zhì)量控制的一個(gè)重要指標(biāo)。色譜條件的建立時(shí)，通過(guò)比較不同的色譜柱的分離度，結(jié)果無(wú)差別，本試驗(yàn)選用Agilent HC-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱。通過(guò)比較不同的柱溫（25，30，35℃），結(jié)果柱溫對(duì)樣品的分離幾乎無(wú)影響，本試驗(yàn)采用30℃。在流動(dòng)相的選擇過(guò)程中，嘗試了不同比例的甲醇濃度，篩選最佳的條件，降低流動(dòng)相的pH，加入磷酸，結(jié)果可較好地分離葛根素。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技社，2010：1.

［2］苗明三，李振國(guó).現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：694.

［3］張世勤，李樹(shù)琦，胡長(zhǎng)風(fēng)，等.根痛平片中葛根素的含量測(cè)定［J］.中草藥，1996，27（7）：405-406.

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［5］葉春朝，武達(dá)，王瑋.腦得生片中葛根素的含量測(cè)定［J］.黑龍江醫(yī)學(xué)，2005，18（3）：159-160.

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［7］陳黎，酈宏巖，楊佩文.心安寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.江蘇藥學(xué)與臨床研究，2003，11（3）：26-28.

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Quality Standard Study for Yuningxin Soft Capsule

Kaidiriye Yusupu1，Bai Mengna1，Tan Rui2，Wang Yan1
（1.College of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu，Sichuan，China 610031；2.College of Medicine，Southwest Jiao
tong University，Chengdu，Sichuan，China 610031）

Objective To establish the quality standards of Yuningxin Soft Capsules.M ethods The Radix Puerariae was qualitatively identified by TLC.The content of puerarin was determined by HPLC.The chromatographic column was Agilent HC-C18column（150 mm×4.6 mm，5μm），the mobiie phase was methanol-water-phosphoric acid（47∶53∶0.2），1.0 mg/mL as the fiow rate at detection wave length of 250 nm at normal temperature；sample size was 10μL.Results At the TLC，the chromatographic spots were clear，the separation effect was good，and there was no interference on negative control.The linear range of puerarin was 84.4-422.0 μg/mL（r=0.999 3），and the average recovery rate was 95.36%，RSD=3.09%（n=6）.Conclusion This method is simple，accurate and reliable，which can be used for the quality control of Yuningxin Soft Capsules.

Yuningxin Soft Capsules；puerarin；TLC；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）24-0162-02

凱迪日耶·玉蘇普（1990-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)樯锕こ?，（電子信箱?178094368@qq.com。

2015-10-14）

*國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)制”項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：VQ21SS1113Y14004。