小兒急性淋巴細(xì)胞白血病與HLA基因多態(tài)性相關(guān)性的研究

賀鑫

摘要：目的： 探討小兒急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）與人類白細(xì)胞抗原（HLA）基因多態(tài)性的相關(guān)性。方法： 采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR/SSP）對我院2009年1月～2015年3月間收治的120例ALL患兒進(jìn)行HLA-A、B、DRB1基因檢測，同時與120例健康新生兒臍帶血的HLA基因進(jìn)行比較，探討兩組HLA基因分布頻率的差異。結(jié)果： ALL患兒的HLA-A*02、B*48、DRB1*15等位基因頻率明顯高于對照組，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，（P<0.01），而HLA-A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因頻率明顯低于對照組，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，（P<0.05）。結(jié)論： HLA-A*02、B*48、DRB1*15等位基因?qū)LL患兒具有遺傳易感作用，而HLA-A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因?qū)LL患兒具有遺傳拮抗作用。

關(guān)鍵詞：急性淋巴細(xì)胞白血病，HLA，相關(guān)性

ALL為兒童常見惡性腫瘤，在小兒白血病中約占到65%。ALL危害性大，患兒病死率高，故目前成為醫(yī)學(xué)界研究的重要課題。白血病的產(chǎn)生與其他惡性腫瘤相似，其產(chǎn)生在于基因缺陷，基因缺陷可改變細(xì)胞的分化、增殖及衰亡。白血病的產(chǎn)生除與外界環(huán)境因素等存在密切關(guān)系以外，患者自身免疫功能也是重要因素之一。不同患者對于白血病易感性與免疫功能不盡相同，存在高度多態(tài)性，與抗原呈遞及識別有關(guān)的HLA分子，可能是本病的重要遺傳因素[1-2]。如能找出ALL的HLA易感基因，對明確ALL致病基因與機(jī)制都具有重要意義。本研究采取PCR/SSP分別檢測了120例ALL患兒及120例健康新生兒臍帶血的HLA-A、B、DRB1基因分型，旨在探討HLA基因多態(tài)性與小兒ALL的相關(guān)性。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1.資料與方法

1.1 研究對象

選取2009年1月～2015年3月我院確診的120例ALL患兒，所有患兒均參照FBA診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確診。其中男79例，女41例，年齡1～14歲，平均（6.23±0.46）歲。健康對照組選取無血緣關(guān)系的120例健康新生兒臍帶血樣本。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取

采取微量全血快速DNA提取。紫外分光光度計(jì)對DNA濃度與純度進(jìn)行測量。將其置于-20℃冰箱中備用。

1.2.2 等位基因HLA-A、B、DRB1分型

采用PCR/SSP分型技術(shù)進(jìn)行HLA-A、B、DRB1位點(diǎn)基因分型。

1.2.3 結(jié)果判定

DNA擴(kuò)增產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠內(nèi)（含有5μl Gold-view）電泳，于凝膠成像儀上拍照，應(yīng)用配套分析軟件判定HLA基因型別。

1.3 統(tǒng)計(jì)處理

兩組基因頻率比較采用Spss19.0軟件進(jìn)行x2檢驗(yàn)。相對危險(xiǎn)度（RR）依據(jù)woolf公式計(jì)算。

2.結(jié)果

通過對ALL患兒及健康新生兒臍帶血的HLA-A、B、DRB1基因檢測，結(jié)果顯示，ALL患兒的A*02、B*48、DRB1*15等位基因頻率明顯高于對照組（x2=15.491、12.018、15.065，RR=5.804、7.057、8.694），而A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因頻率明顯低于對照組（x2=12.075、6.260、7.855，RR=0.293、0.312、0.286）。具體見表1。

表1 病例組與對照組差異顯著的HLA基因頻率

3.討論

HLA基因定位在第6號染色體短臂上6p21.3，全長4000kb，是由一系列基因座組成，也是迄今為止所知的最復(fù)雜的人類遺傳系統(tǒng)。HLA基因多態(tài)性參與了多種疾病的產(chǎn)生及發(fā)展過程，HLA分子表達(dá)水平和腫瘤免疫關(guān)系密切。自上世紀(jì)60年代以來，HLA基因多態(tài)性與疾病相關(guān)性的研究，涉及的疾病多達(dá)數(shù)百種，白血病就是其中之一。盡管白血病的發(fā)病機(jī)制尚不完全清晰，但多數(shù)認(rèn)為其產(chǎn)生是環(huán)境及遺傳因素共同作用的結(jié)果。

HLA產(chǎn)物在人體內(nèi)所有有核細(xì)胞表面幾乎均有表達(dá)，與免疫球蛋白及T細(xì)胞受體分子等共同參與到免疫識別與應(yīng)答中。HLA基因多態(tài)性對個體免疫功能起到?jīng)Q定性作用，其決定了免疫系統(tǒng)是否能有效識別與清除發(fā)生畸變的細(xì)胞，是否能免疫耐受外源及自身改變的細(xì)胞。故由此來看，HLA可能在白細(xì)胞的產(chǎn)生及發(fā)展過程中起著重要作用。

但目前有關(guān)HLA基因多態(tài)性與ALL相關(guān)性的報(bào)道尚無統(tǒng)一結(jié)論，羅奇志[3]等的研究結(jié)果顯示，在HLA-B等位基因中，B58基因在ALL中的表型頻率明顯高于對照組，P值為0.0242，RR為7.4055。王曉靜[4]等通過對HLA-DRB1*15與兒童ALL關(guān)系的研究得出，ALL患兒的DRB1*15的抗原頻率與等位基因頻率分別為40.12%、22.62%，均明顯高于健康對照組。本研究結(jié)果則顯示，在HLA-A、B、DRB1等位基因中，ALL患兒的A*02、B*48、DRB1*15等位基因頻率明顯上升，提示其對小兒ALL患兒具有遺傳易感作用，是ALL發(fā)生的危險(xiǎn)標(biāo)志。而A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因頻率明顯下降，提示其對小兒ALL患兒具有遺傳拮抗作用，是ALL的保護(hù)性標(biāo)志。研究結(jié)果與羅奇志有差異，而與王曉靜一致。分析研究結(jié)果差異的原因多是ALL作為一種多基因遺傳易感疾病，在存在多個易感位點(diǎn)情況下，不同位點(diǎn)于不同人群中存在不同優(yōu)勢，因而產(chǎn)生和相同疾病相關(guān)的多樣性。

綜上所述，A*02、B*48、DRB1*15等位基因?qū)π篈LL患兒具有遺傳易感作用，而A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因?qū)π篈LL患兒具有遺傳拮抗作用。但考慮到HLA基因和ALL的相關(guān)性因民族、人種、地域等的差異而有不同，而本研究選取的研究對象均為我院收治的患兒，且樣本小，存在局限性。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 劉楠，林曉娥，袁方，等.HLA-A/B/C/DRB1/DQB1基因多態(tài)性與急性淋巴細(xì)胞白血病關(guān)聯(lián)分析[J].軍事醫(yī)學(xué)，2013，37（08）：574-577.

[3] 羅奇志，李立新，謝毓濱，等.湖南漢族白血病與HLA-A、B、DRB1基因的相關(guān)性研究[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，28（06）：1016-1018.

[4] 王曉靜，艾曉非，孫海燕，等.HLA-DRB1*15與162例兒童急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病的關(guān)系[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2009，17（06）：1507-1510.