黃連素對(duì)雞球蟲(chóng)的防治效果研究

劉偉偉　房志家　宋洋等

摘要 [目的] 探討黃連素對(duì)雞球蟲(chóng)的防治效果。[方法]將2周齡的雛雞分為攻蟲(chóng)對(duì)照組、空白對(duì)照組、加藥A組、加藥B組，分別給予0、0、300和1 500 μg/g體重劑量的黃連素，探討黃連素的安全性和及其對(duì)雞球蟲(chóng)的治療效果。[結(jié)果] 加藥A組、加藥B組和攻蟲(chóng)對(duì)照組雛雞的相對(duì)增重率分別為55.56%、10.71%、26.43%?？瞻讓?duì)照組、加藥A組、加藥B組和攻蟲(chóng)對(duì)照組的抗球蟲(chóng)指數(shù)依次為200、141.26、59.99、29.29。[結(jié)論]黃連素對(duì)雞球蟲(chóng)具有明顯的治療效果，劑量以300 μg/g體重為宜。

關(guān)鍵詞 雞；球蟲(chóng)病；黃連素；治療效果

中圖分類號(hào) S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）20-115-02

Abstract [Objective] The research aimed to discuss the control effects of berberine on chicken coccidiosis. [Method] 14 dayold chicken were divided into berberine A group， berberine B group， challenge control group and blank control group， in which 0， 300 and 1 500 μg/g body weight of berberine were administrated. The safety and control effects of berberine on chicken coccidiosis were discussed. [Result] The average relative ratio of weight gain of chicken in berberine A group， berberine B group， challenge control group were 26.43%、55.56%、10.71% respectively. ACIs in blank control group， berberine A group， berberine B group， challenge control group were 200.00、29.29、141.26 and 59.99 respectively.[Conclusion] Berberine had significantly therapeutic effects on chicken coccidia， and its optimum dose was 300 μg/g body weight.

Key words Chicken； Coccidiosis； Berberine； Therapeutic effect

雞球蟲(chóng)病（Avian coccidiosis）是由艾美耳屬（Eimeria）球蟲(chóng)寄生于雞腸道上皮細(xì)胞內(nèi)所引起的一種寄生性原蟲(chóng)病[1]。目前，我國(guó)已報(bào)道的艾美耳屬球蟲(chóng)有 7 種 ，即柔嫩艾美耳球蟲(chóng)（E. tenella）、毒害艾美耳球蟲(chóng)（E. necatrix）、堆型艾美耳球蟲(chóng)（E. acervulina）、巨型艾美耳球蟲(chóng) （E. maxima）、和緩艾美耳球蟲(chóng)（E. mitis）、早熟艾美耳球蟲(chóng)（E. praecox）和布氏艾美耳球蟲(chóng)（E. brunetti）[2]。其中，在我國(guó)流行的是柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、 巨型艾美耳球蟲(chóng)和堆型艾美耳球蟲(chóng) 4種，致病力最強(qiáng)的是柔嫩艾美耳球蟲(chóng)和毒害艾美耳球蟲(chóng)，其次是巨型艾美耳球蟲(chóng)和堆型艾美耳球蟲(chóng)[3]。由于雞球蟲(chóng)卵囊分布廣泛，增殖能力強(qiáng)且極易在禽舍環(huán)境中傳播，因此在目前的密集飼養(yǎng)條件下預(yù)防雞球蟲(chóng)病的感染非常困難，其發(fā)病率為50%～70%，死亡率為20%～30%，嚴(yán)重者高達(dá)80%[4-5]。因此，雞球蟲(chóng)病已被美國(guó)農(nóng)業(yè)部列為對(duì)禽類危害最嚴(yán)重的五大疾病之一，我國(guó)也將其列為二類動(dòng)物疾病病種。雞球蟲(chóng)病主要依靠化學(xué)藥物進(jìn)行防治，但由于球蟲(chóng)的抗藥性問(wèn)題日益嚴(yán)重，尋求新的活性化合物仍然是球蟲(chóng)防治的重要策略。黃連素，又稱為小檗堿，是一種生物堿，主要存在于小檗屬與黃連屬植物中，在臨床上具有抗菌、消炎等效果[6]，尤其因其價(jià)格便宜、服用簡(jiǎn)單、副作用小而被用作治療腹瀉的藥物被大家所熟知。黃連素對(duì)腸道炎癥具有治療功效[7]。筆者探討黃連素對(duì)雞球蟲(chóng)感染的防治效果，以期彌補(bǔ)某些抗雞球蟲(chóng)藥物或疫苗[8]價(jià)格昂貴且易被產(chǎn)生抗性的缺陷。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

從上海太平洋家禽育種有限公司購(gòu)買(mǎi)剛出殼的雛雞，放入專用雞盒運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，用無(wú)球蟲(chóng)飼料和飲水飼養(yǎng)至9日齡開(kāi)始試驗(yàn)。試驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行保溫箱圈養(yǎng)，飼料購(gòu)自諾維康旗艦店，不含任何藥物，采用自由飲水方式。

1.2 蟲(chóng)種與試驗(yàn)藥物

試驗(yàn)所用蟲(chóng)種是由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所饋贈(zèng)孢子化柔嫩艾美耳球蟲(chóng)，于含新鮮重鉻酸鉀溶液中保存。黃連素，購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.3 試驗(yàn)雞分組與處理

每組挑選發(fā)育均勻、健康的10日齡雛雞12只，并隨機(jī)分成4小組：加藥A組、加藥B組、攻蟲(chóng)對(duì)照組和空白對(duì)照組。空白對(duì)照組既不喂藥也不攻蟲(chóng)，攻蟲(chóng)對(duì)照組只攻蟲(chóng)不喂藥，每只攻蟲(chóng)球蟲(chóng)數(shù)5×104個(gè)。加藥A組和加藥B組自10日齡開(kāi)始每天經(jīng)口滴服黃連素300或1 500 μg/g體重，直至第17天試驗(yàn)結(jié)束。

1.4 測(cè)定指標(biāo)

1.4.1 增重情況。

試驗(yàn)雞于試驗(yàn)開(kāi)始前、潛伏期后（約5 d）和試驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行稱重，并計(jì)算各組的增重，據(jù)此計(jì)算出平均增重相對(duì)增重率。相對(duì)增重率（%）=用藥組或攻蟲(chóng)組平均增重/空白對(duì)照組平均增重×100；死亡率（%）=死亡雞數(shù)/試驗(yàn)用雞總數(shù)×100；發(fā)病率（%）=發(fā)病雞數(shù)/試驗(yàn)用雞總數(shù)×100。

1.4.2 臨床表現(xiàn)。

試驗(yàn)開(kāi)始后，每天觀察雞群的精神狀況、采食和飲水量、死亡情況、糞便色澤和性狀，并作好記錄。

1.4.3 血便卵囊計(jì)數(shù)。

于感染第5天采集每組的新鮮血便，采用血球計(jì)數(shù)板法記錄每組每克血便卵囊數(shù)。

1.4.4 盲腸卵囊計(jì)數(shù) 。

于感染后第8天撲殺雞群，將各組盲腸內(nèi)容物充分混勻、稱重，用血球計(jì)數(shù)板法統(tǒng)計(jì)每克盲腸內(nèi)容物卵囊數(shù)（OPG），根據(jù)表1換算成卵囊值[9]。

1.4.5 病變計(jì)分及病變值。

第 8 天試驗(yàn)結(jié)束，宰殺全部雞只，參照 Johnson 和 Reid設(shè)計(jì)的盲腸病變記分法[10]，記錄每只雞的病變記分，將各組內(nèi)每只雞的病變記分相加。 病變標(biāo)準(zhǔn)：感染后第8天得到病變值總分，病變值總分除以組內(nèi)雞只數(shù)得平均病變記分。病變值（0～40）=各試驗(yàn)組雞的平均病變記分（0～4）×10。

1.4.6 抗球蟲(chóng)指數(shù)（ACI）。

根據(jù)美國(guó)Merck公司推薦的ACI作為判定藥物效力的指標(biāo)： ACI=（存活率+相對(duì)增重率）×100-（病變值+卵囊值）。若ACI>180，判定為高效抗球蟲(chóng)藥；160

1.4.7 數(shù)據(jù)處理。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，并應(yīng)用最小顯著差數(shù)法（LSD）分析其差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 增重情況

從圖1可以看出，加藥A組在整個(gè)試驗(yàn)中相對(duì)增重均高于攻蟲(chóng)對(duì)照組，表明添加300 μg/g體重黃連素對(duì)雞球蟲(chóng)感染具有一定的抑制效果；但加藥B組在球蟲(chóng)感染潛伏期內(nèi)（第5天）和試驗(yàn)結(jié)束后增重均低于加藥A組和攻蟲(chóng)對(duì)照組，表明當(dāng)加藥濃度過(guò)高時(shí)，由于黃連素具有減重作用，影響了其對(duì)雞球蟲(chóng)的防治效果。

2.2 臨床表現(xiàn) 試驗(yàn)期間，空白對(duì)照組的精神、食欲、糞便皆正常；攻蟲(chóng)組的球蟲(chóng)感染到病發(fā)有4 d左右的潛伏期，攻蟲(chóng)后第5天開(kāi)始均出現(xiàn)不同程度的精神萎靡、閉目呆立、食欲不振、羽毛聳立、便血等現(xiàn)象。加藥A組出現(xiàn)輕微的脫毛現(xiàn)象，并帶有少量的便血，便血率為30%，血便中球蟲(chóng)釋放數(shù)量為1.97×104個(gè)/g，無(wú)死亡；加藥B組出現(xiàn)輕微脫毛和便血現(xiàn)象，血便中球蟲(chóng)釋放數(shù)量為0.30×104個(gè)/g，并出現(xiàn)30%的致死率；攻蟲(chóng)對(duì)照組則有嚴(yán)重的脫毛及便血現(xiàn)象，便血率為75%，血便中球蟲(chóng)釋放數(shù)量為4.99×104個(gè)/g，死亡率為50%（表2）。由此可見(jiàn)，雛雞便血情況與感染程度具有直接相關(guān)性。

2.3 抗蟲(chóng)藥效綜合判斷結(jié)果

由表3可知，加藥A組和加藥B組的抗球蟲(chóng)指數(shù)均高于攻蟲(chóng)對(duì)照組，表明黃連素對(duì)雞球蟲(chóng)感染具有一定的防治作用。但當(dāng)加藥濃度過(guò)高時(shí)，黃連素的降脂作用影響了其對(duì)球蟲(chóng)的防治效果，加藥B組的相對(duì)增重率低于加藥A組，因此黃連素的最佳治療濃度有待進(jìn)一步探索。加藥A組的抗球蟲(chóng)指數(shù)為141.26，根據(jù)抗球蟲(chóng)指數(shù)（ACI）標(biāo)準(zhǔn)，在目前濃度下黃連素判定為低效抗球蟲(chóng)藥，但加藥A組在治療后臨床性狀明顯改善，并且死亡率為0，因此合適濃度的黃連素對(duì)球蟲(chóng)具有顯著的防治效果。該研究中試驗(yàn)周期略短導(dǎo)致雛雞的相對(duì)增重率偏低，從而使ACI值偏低，因此試驗(yàn)周期有待加長(zhǎng)。

3 討論

（1）從黃連素控制雞球蟲(chóng)病發(fā)生的效果來(lái)看，攻蟲(chóng)對(duì)照組雛雞的發(fā)病率為75%，治療A和治療B組的發(fā)病率為33%；攻蟲(chóng)對(duì)照組死亡率為50%，加藥A組沒(méi)有死亡，加藥B組死亡率為30%。這表明黃連素具有明顯的球蟲(chóng)病控制效果，但過(guò)高濃度的黃連素有減重作用，因此選取適當(dāng)濃度黃連素干預(yù)對(duì)雞球蟲(chóng)具有有效的防治效果。

（2）從各組雛雞的增重來(lái)看，與空白對(duì)照組比加藥A組、加藥B組和攻蟲(chóng)對(duì)照組的相對(duì)增重率分別為55.56%、10.71%和26.43%，其中加藥A組的增重率雖不及空白對(duì)照組，但要明顯高于攻蟲(chóng)對(duì)照組，加藥B組的增重率低于加藥A組和攻蟲(chóng)對(duì)照組的增重率。這表明適當(dāng)濃度黃連素對(duì)感染球蟲(chóng)的雛雞具有一定的保護(hù)作用，而過(guò)高濃度黃連素雖然可以更好控制感染卵囊數(shù)，降低病變值，但可能由于其藥物本身具有減重作用[11]，抑制了雛雞脂代謝和體重增加，因此300 μg/g體重劑量的防治效果優(yōu)于1 500 μg/g體重。

（3）雖然雞球蟲(chóng)病的防治的疫苗已取得了初步成效[12]，但由于該技術(shù)尚處于起步階段 ，存在疫苗的穩(wěn)定性、易被產(chǎn)生抗性、價(jià)格較貴等不適用于大型雞場(chǎng)，因此尋找合適的新型藥物防治雞球蟲(chóng)迫在眉睫。目前常用的治療球蟲(chóng)的藥物地克珠利較易引起球蟲(chóng)的耐藥性，甚至交叉耐藥性（妥曲珠利），連續(xù)服用不得超過(guò)6個(gè)月，輪換用藥時(shí)亦不宜應(yīng)用同類藥物。此外，該藥物作用時(shí)間短暫，必須通過(guò)連續(xù)用藥以防再度爆發(fā)。黃連素屬于異喹啉生物堿， 作為價(jià)格便宜、服用簡(jiǎn)單的抗菌藥在臨床上已應(yīng)用多年，主要用于治療腸道炎癥伴發(fā)熱、降脂等方面。該試驗(yàn)結(jié)果表明黃連素對(duì)雞球蟲(chóng)具有明確的治療效果，因其價(jià)格低廉、方便獲得、副作用少等優(yōu)點(diǎn)，因此它可作為一種可供選擇的雞球蟲(chóng)防制藥物。

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