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      中藥組方治療鴨疫里氏桿菌、大腸桿菌混合感染試驗

      2015-10-21 18:11:21徐光科吳海港陳宏智
      中國動物保健 2015年6期
      關(guān)鍵詞:大腸桿菌治療效果中藥

      徐光科 吳海港 陳宏智

      摘要:對“加味附子瀉心湯”治療鴨疫里氏桿菌、大腸桿菌混感病例進行臨床拆方治療試驗,選用死亡率、治愈率、免疫器官指數(shù)(脾臟指數(shù)、腔上囊指數(shù)、胸腺指數(shù))、血液生化指標(biāo)(谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總膽固醇、總蛋白)作為臨床評價體系對“加味附子瀉心湯”治療效果進行綜合評價,最終確定:黃連、黃芩、茵陳、丹參、川芎、附子為最佳有效組方。治愈率86.3%、保護率90.7%;組方能顯著提高提高感染鴨只的免疫力、提高免疫指數(shù)。降低感染鴨只血液膽固醇含量,抑制肝細胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng),減輕肝細胞的壞死。

      關(guān)鍵詞:鴨疫李氏桿菌;大腸桿菌;中藥;治療效果

      鴨疫里氏桿菌病是由鴨疫里氏桿菌引起的鴨、鵝、火雞等多種禽類的一種急性或慢性傳染病。該病呈急性或慢性敗血癥過程,以纖維性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎為特征。

      鴨大腸桿菌病“是由禽致病性大腸桿菌所引起的局部或全身性感染的疾病,兩種病在臨床上常呈混合感染”且二者在臨床癥狀病理變化及流行病學(xué)等方面都存在諸多相似之處不易區(qū)別。

      本研究根據(jù)中獸醫(yī)扶正驅(qū)邪、標(biāo)本兼治的理論,以清熱燥濕、平肝利膽、活血化瘀、溫中為治則,選取黃連、黃芩、茵陳、葉下珠、丹參、川芎、附子等中藥按照一定比例組成組方,對人工感染鴨疫里默氏桿菌、大腸桿菌的鴨只進行治療試驗,觀察中藥復(fù)方治療效果,從而為篩選出療效確實中藥組方提供堅實的理論和臨床依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 試驗材料

      1.1.1 原料試驗動物為7日櫻桃谷鴨購信陽華英集團。試驗用菌種RA,血清型為(1型),E.coli,血清(078)購自中國獸藥監(jiān)察所。黃連、黃苓等8味中藥購自信陽市藥材公司;試驗培養(yǎng)基為TSA胰酶大豆瓊脂(TSA)、胰酶大豆肉湯(TSB)、麥康凱培養(yǎng)基。

      血清總膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和血清總蛋白質(zhì)測定試劑盒。(南京建成科技有限公司產(chǎn)品)

      1.1.2 主要儀器專用培養(yǎng)皿;全自動生化分析儀(SYNCHRON CX5);紫外一可見分光光度計(UV-1601);RE10-50旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮)。

      1.2 中藥組斤和中藥藥液的制備

      1.2.1 中藥組方根據(jù)中藥組方原則,做成6個試驗組分別為:方I黃連、黃芩、葉下珠、丹參、川芎;方Ⅱ黃連、黃芩、茵陳、丹參、川芎;方Ⅲ黃連、黃芩;方Ⅳ黃連、黃芩、葉下珠、丹參、川芎、附子;方V黃連、黃芩、茵陳、丹參、川芎、附子;方Ⅵ黃連、黃芩、附子。

      1.2.2 中藥藥液的制備準(zhǔn)確稱取中藥粉末(過20目篩),用10倍溫水浸泡12h,100℃煎煮三遍,300目紗布過濾,,合并藥液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器濃縮中藥液濃度為1g/mL,加1%的山梨酸鉀,分裝,滅菌備用。

      1.3 試驗方法

      1.3.1 菌懸液的制備

      將鴨疫里默氏桿菌接種于10mL的滅菌大豆胰酶肉湯+2%的小牛血清培養(yǎng)基中,在37℃恒溫箱中孵育增菌30h后作為感染原菌液;將原菌液用滅菌生理鹽水稀釋至1×l05CFu/mL備用。

      大腸桿菌菌種接種于麥康凱平板,37℃、24h后,挑選出典型菌落,放于肉湯中,在37℃環(huán)境下培養(yǎng)46h取出;用生理鹽水校正至1麥?zhǔn)媳葷峁軜?biāo)準(zhǔn),使其含菌量為1×l05CFu/mL備用。

      1.3.2 抗感染療效試驗

      選7日齡淮南麻鴨隨機分成8個組,每組50只一組,將分好組的試驗鴨除空白對照組外每組鴨腹腔注入預(yù)試驗中的正式攻毒鴨疫里默氏桿菌菌液1×l05CFu/mL,0.5mL,大腸桿菌1×l05CFu/mL,0.5mL于感染后記錄7d內(nèi)鴨的死亡數(shù);死亡鴨及時解剖。每組分別灌服中藥組方I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V、Ⅵ(感染后2d給藥、1.5mL/羽、每天兩次連用3~5d),Ⅶ組為模型對照組(只感染細菌不給藥),Ⅷ組為空白對照(不感染細菌也不給藥,正常飼養(yǎng))

      各鴨組在相同條件下隔離飼養(yǎng),連續(xù)觀察7d統(tǒng)計鴨的死亡率、治愈率、有效率。

      1.3.3 生理生化試驗

      攻毒治療試驗結(jié)束后3d,從各組存活鴨只中隨機抽取5只鴨、清晨6點采血,4000r/min轉(zhuǎn)離心,收集血清測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶,總膽固醇和血清總蛋白。鴨只采血采血后稱重、屠宰,取脾臟、胸腺和腔上囊,去除結(jié)締組織后稱重,計算免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)=器官重(g)/活體重(kg)

      1.4 數(shù)據(jù)處理

      試驗調(diào)查數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0軟件進行單因素方差統(tǒng)計分析,試驗結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示。

      2 結(jié)果分析

      2.1 鴨感染細菌后發(fā)病情況和病理變化

      雛鴨接種菌液后第3-5天,有鴨只死亡,病鴨(出現(xiàn)拉稀、昏睡、食欲減退等臨床不適癥狀)持續(xù)增多,到第5-7天,新死亡鴨只持續(xù)減少,1周內(nèi)死亡48.2%。病例剖檢,前期死亡鴨只病理癥狀不明顯,后期死亡鴨只肝臟灰黃,個別出現(xiàn)青綠色。其他臟器無明顯癥狀。

      2.3 抗感染治療結(jié)果

      抗感染試驗的結(jié)果見表1。從表1可以看出,治療組的死亡率極顯著低于Ⅶ組治愈率、保護率、顯著高于Ⅶ組;V組的死亡率最低、治愈率和保護率最高;添加附子各組死亡率低于不添加附子組。

      2.4 免疫器官指數(shù)

      各試驗組鴨的免疫器官指數(shù)測定結(jié)果見表2。由表2可知鴨接種菌株后其脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)相比健康對照組略有降低、差異不顯著(P>0.05)。第v組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)最高和其他各組相比差異顯著(P<0.05);第Ⅱ組胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)高于Ⅷ組差異顯著(P<0.05);第v組胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)高于第Ⅱ組差異顯著(P<0.05)。

      2.5 血清生化指標(biāo)

      各試驗組鴨的血清生化指標(biāo)測定結(jié)果見表3。由表3可知鴨接種菌株后,總膽固醇顯著上升(P<0.05),谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白含量變化不大,差異不顯著(P>0.05);鴨灌服中藥后總膽固醇量有所下降和第Ⅶ相比差異顯著(P<0.05);第V組降幅明顯和其他各組相比差異顯著(P<0.05)。灌服第V組中藥能顯著降低發(fā)病鴨的總膽固醇含量。

      3 結(jié)論與討論

      本試驗以7日齡淮南麻鴨為靶標(biāo)動物、以RA,血清型為(1型),E.coli,血清(078)為毒株攻毒、7日內(nèi)動物陸續(xù)發(fā)病死亡率48.2%;病死鴨剖檢以纖維性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎為特征;發(fā)病鴨胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、腔上囊指數(shù)略有下滑,差異不顯著;發(fā)病鴨只血清總膽固醇含量下降明顯(P<0.05)。

      本試驗對“附子瀉心湯”進行了拆方和加減治療試驗,不同用藥組病鴨死亡率從9.3%~17.2%,治愈率73.6%~86.7%,保護率87.3%~90.7%。第v組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腔上囊指數(shù)最高和其他各組相比差異顯著(P<0.05);鴨灌服中藥后總膽固醇量有所下降和第Ⅶ相比差異顯著(P<0.05);第V組降幅明顯和其他各組相比差異顯著(P<0.05)。方Ⅱ;治療效果方V>方Ⅳ>方I>方Ⅵ>方Ⅲ>方Ⅱ。

      本試驗證實黃連、黃芩、茵陳、葉下珠、丹參、川芎附子組方對鴨疫里氏桿菌、大腸桿菌混合感染有很好的治療效果,促進鴨免疫器官的發(fā)育、改善病鴨的血清生化指標(biāo)。

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