某地區(qū)909例婦女HPV感染狀況的分析

戴　珺

（湖南省婁底市婦幼保健院檢驗科，湖南 婁底 417000）

某地區(qū)909例婦女HPV感染狀況的分析

戴珺

（湖南省婁底市婦幼保健院檢驗科，湖南 婁底 417000）

目的 研究婁底地區(qū)婦女HPV亞型感染的分布情況及各年齡段的感染狀況，為宮頸癌預(yù)防提供依據(jù)。方法 利用PCR-反向點雜交技術(shù)檢測我院婦科門診909例樣本HPV分型。將受檢樣本分為6個年齡階段，計算其陽性檢出率，分析各檢出率與年齡之間的關(guān)系。結(jié)果 909例樣本中，HPV陽性288例，總陽性率31.68%，單一亞型感染226例，復(fù)合感染62例。按年齡分組，40～49歲組為高危階段，陽性率35.60%。結(jié)論 婁底地區(qū)HPV的陽性檢出率較高，應(yīng)加強(qiáng)HPV的篩查，為臨床宮頸癌的防治提供可靠的依據(jù)。

宮頸癌；HPV；基因分型

宮頸癌是全球婦女中最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率在發(fā)展中國家居第一位。作為世界上最大的發(fā)展中國家，中國新發(fā)的宮頸癌病例每年多于13萬，約占世界宮頸癌新發(fā)病例總數(shù)的1/3～1/4［1］。宮頸癌是目前人類所有癌癥中唯一病因明確的惡性腫瘤，通過規(guī)范、先進(jìn)的防癌篩查，及時發(fā)現(xiàn)、管理和治療宮頸病變，就可以阻斷其發(fā)展為子宮頸癌。目前，通過HPV檢測來篩查宮頸癌已作為中國癌癥基金會推薦使用的篩查方法。HPV能通過多種途徑傳播，主要通過性傳播，所以提倡健康性行為，養(yǎng)成良好的生活衛(wèi)生習(xí)慣，加強(qiáng)鍛煉，定期對HPV感染進(jìn)行篩查，對預(yù)防HPV感染和宮頸癌的發(fā)生具有重要意義。另外，HPV感染具有較強(qiáng)的區(qū)域性，不同國家、不同地區(qū)型別分布不同，所以在不同地區(qū)進(jìn)行HPV檢測對不同地區(qū)宮頸癌篩查具有重要意義?，F(xiàn)對婁底地區(qū)婦女HPV的感染狀況及常見型別分布報道如下。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對象：選擇本院2012年11月至2013年11月婦科門診女性患者的陰道分泌物或白帶標(biāo)本共909例（不計重復(fù)檢查，陽性結(jié)果只計入第一次檢測結(jié)果），年齡2～80歲，每例均檢測HPV病毒的19種亞型。

1.1.2標(biāo)本采集及保存方法：樣本采集前48 h禁性生活，不能作陰道沖洗，月經(jīng)期不得采集樣本。標(biāo)本由醫(yī)師在無菌條件下取得，將棉拭子伸入宮頸內(nèi)2cm，旋轉(zhuǎn)數(shù)周并停留片刻后取出（有生殖道疣狀突起的患者，刮取疣體上皮細(xì)胞），置于盛有無菌生理鹽水的加蓋微量離心管中，充分漂洗后將棉拭子貼管壁擠干放入廢物桶。采集的標(biāo)本應(yīng)及時處理，在室溫放置不超過2 h，4 ℃冰箱保存不超過24 h，-20 ℃保存不超過3個月，應(yīng)避免反復(fù)凍融標(biāo)本。

1.2試劑：人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒（PCR-反向點雜交法）：由廣州達(dá)安基因有限公司提供。PCR反應(yīng)體系：DNA提取液、HPV PCR反應(yīng)管、HPV陽性質(zhì)控品（HPV16型）、HPV陰性質(zhì)控品。反向點雜交體系：雜交液Ⅰ濃縮液、雜交液Ⅱ濃縮液、溶液Ⅰ、溶液Ⅱ濃縮液、雜交膜條。

1.3儀器：PCR儀（DA7600，中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司制造）；離心機(jī)（H-2050R，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司制造）；水浴搖床（蘇州威爾實驗用品有限公司制造）；振蕩型恒溫金屬?。◤V州南方醫(yī)學(xué)生化儀器有限公司制造）；移液槍；替補(bǔ)頭；離心管；試管架；鑷子等。

1.4實驗方法

1.4.1樣本處理：將漂洗后的生理鹽水全部轉(zhuǎn)移到微量離心管中，10000rpm離心5min。棄上清，沉淀加50μL DNA提取液充分混勻，10000rpm離心5min，取上清液待檢。

1.4.2PCR擴(kuò)增：取干燥潔凈的離心管若干，分別加入提取的上清液5μL（每次試驗必須設(shè)置陰陽性對照，處理方法同標(biāo)本）。6000rpm瞬時（3 s）離心后，將各反應(yīng)管放入PCR儀（DA7600），進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物取出待用。

1.4.3雜交及顯色：配制雜交液Ⅰ和雜交液Ⅱ（其濃縮液與蒸餾水體積之比均為1∶4）、溶液Ⅱ（濃縮液與蒸餾水之比為1∶10）預(yù)熱待用。結(jié)合液為現(xiàn)用現(xiàn)配（溶液Ⅰ與室溫雜交液Ⅰ按1∶400的比例稀釋）。①將PCR產(chǎn)物和固定有19種HPV分型探針的膜條放入5mL離心管中，對應(yīng)將膜條放入離心管中，加入4mL預(yù)熱雜交液Ⅰ，備用。②將PCR產(chǎn)物加入對應(yīng)的離心管中，雜交50min。③棄去雜交液Ⅰ，將膜條取出，放入20mL預(yù)熱雜交液Ⅱ，水浴10min，棄去雜交液Ⅱ。加入20mL結(jié)合液，避光反應(yīng)10min。④棄去結(jié)合液，加20mL溶液Ⅰ，搖3min，棄去。加20mL溶液Ⅱ，搖3min，棄去。⑤棄去溶液Ⅱ，加入現(xiàn)配的顯色液20mL，避光反應(yīng)5～10min。

1.4.4結(jié)果判讀：顯色完畢后取出膜條用吸水紙吸去表面水分，當(dāng)擴(kuò)增位點Globin點出現(xiàn)藍(lán)色時，提示PCR、雜交、顯色等各個環(huán)節(jié)操作正常，此時結(jié)果真實有效。根據(jù)各位點藍(lán)色斑點的有無及位置判斷HPV是否感染及HPV基因亞型。

1.5統(tǒng)計方法：將標(biāo)本分為6組，并將實驗所得數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計，應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用χ2檢驗，P＜0.05即有顯著性差異，有統(tǒng)計學(xué)意義。

表3　婁底地區(qū)54例HPV復(fù)合感染亞型分布

2　結(jié) 果

2.1HPV亞型檢測結(jié)果：909例樣本中，HPV陽性標(biāo)本共288例，檢出率為31.68%。其中單一亞型感染226例，復(fù)合感染62例，兩組經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，差異有顯著性（χ2=110.968，P＜0.01），說明婁底地區(qū)HPV感染率較高，感染類型主要是單一亞型感染。結(jié)果見表1。

表1　婁底地區(qū)288例HPV陽性患者感染類型分布

2.2HPV亞型分布

2.2.1HPV單一亞型分布：226例HPV單一亞型感染者各亞型分布中，中、高危型HPV （16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、59、66、68，亞型CP8304）總共203例，占89.82%。高危亞型分布中以與宮頸癌密切相關(guān)的HPV16型感染率最高，其次為HPV52型、HPV58型，此次未檢出HPV59型。說明婁底地區(qū)HPV感染以高危亞型為主，宮頸癌的發(fā)病率較高，需加強(qiáng)宮頸癌的早期預(yù)防，早期篩查和早期治療。見表2。

表2　婁底地區(qū)226例HPV單一亞型感染分布

2.2.2HPV復(fù)合感染者各亞型分布：62例HPV復(fù)合感染者各亞型分布中最常見的是二重亞型感染，總共54例，占復(fù)合感染的87.10%，且以高危亞型HPV16型、HPV52型以及HPV58型的組合最為多見。此次未檢出四重亞型感染，各型組合的復(fù)合感染中未檢測出HPV43型。HPV復(fù)合感染提示宿主的免疫狀態(tài)和個體易感性，說明婁底地區(qū)發(fā)生宮頸病變的風(fēng)險較高。見表3。

2.3HPV亞型感染年齡段分布：將288例HPV陽性標(biāo)本分為6個年齡組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，差異有顯著性（χ2=11.764，P＜0.05）。其中以＜20歲和≥60歲這兩組感染率相對最高，可能是由于這兩組標(biāo)本基數(shù)相對較小所致陽性率偏高，不具代表性。其他4組中以40～49歲和20～29歲這兩個年齡段陽性率較高，說明婁底地區(qū)HPV分布與年齡有關(guān)。HPV亞型感染年齡分布情況見表4。

表4　婁底地區(qū)HPV感染年齡分布

3　討 論

Clifford等［2］研究發(fā)現(xiàn)，在世界范圍內(nèi)除亞洲以外的區(qū)域比較常見的HPV基因分型分別是HPV16、HPV18、HPV45、HPV31和HPV33，而在亞洲國家以HPV52型和HPV58型多見。汪欣等［3］對大量處于宮頸病變各個時期以及細(xì)胞學(xué)檢查正常的中國女性HPV感染進(jìn)行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)感染最多的基因亞型是HPV16型，其次比較廣泛流行的是HPV58和HPV52型。深圳地區(qū)［4］1420例女性的高危HPV篩查結(jié)果顯示：HPV總感染率為31.28%，高危型HPV感染率為18.0%，主要流行的亞型是HPV16、HPV58以及HPV52。而西藏自治區(qū)［5］3036例女性HPV感染現(xiàn)狀調(diào)查結(jié)果分析：HPV總感染率為9.19%，HPV16感染最常見，其次為HPV33、HPV58、HPV51以及HPV31。本文結(jié)果顯示單一亞型分布中以HPV16、HPV52、HPV58出現(xiàn)的頻率最高。婁底地區(qū)909例婦女HPV分型檢測結(jié)果顯示，HPV感染率31.68%：單一亞型感染中高危亞型的感染率為89.82%，低危亞型的感染率為10.18%。HPV感染已被明確為宮頸癌的主要病因，但感染HPV的大多數(shù)女性可以被身體自動清除，只有少數(shù)女性HPV持續(xù)性感染才會引發(fā)宮頸病變。HPV感染通常無明顯臨床癥狀，不易引起人們的重視，但是宮頸癌是感染性疾病，可以預(yù)防且治愈率高，因此相關(guān)部門應(yīng)當(dāng)予以重視，加強(qiáng)婦女HPV篩查，以達(dá)到預(yù)防宮頸癌的目的。此次未檢出HPV59型，與國內(nèi)研究結(jié)果略有不同［6］。原因尚需進(jìn)一步進(jìn)行總結(jié)，但同時也說明不同地區(qū)的HPV亞型分布都會有所不同，這充分證明了HPV亞型感染的多樣性以及地區(qū)的差異性。

本文根據(jù)年齡段的不同分為6組，從結(jié)果看，年齡段在＜20歲和≥60歲這兩個區(qū)間的感染率比較高，分別占總感染率的50.00%和37.50%。兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.592，P＞0.05），此結(jié)果與相關(guān)研究不同［7］。可能是因為這兩個年齡段的標(biāo)本量較少，患者大多是有臨床癥狀才來就診的，所以導(dǎo)致感染率偏高。剩下的4組當(dāng)中，以40～49歲和20～29歲這兩組較高，分別占35.60%和33.93%。結(jié)果說明HPV亞型分布和年齡段有關(guān)，近年來宮頸癌患者有明顯的年輕化趨勢，發(fā)病率以每年2%～3%的速度增長，這與生殖道HPV感染升高密切相關(guān)。本文中最小的患者僅2歲，但HPV結(jié)果為CP8304為陽性，詢問病史，發(fā)現(xiàn)其母親為HPV11+CP8304陽性，可能不潔生活習(xí)慣導(dǎo)致患者被傳染，使其出現(xiàn)生殖道疣狀突起而前來我院婦科門診就診。20～29歲的年輕婦女由于性生活活躍，HPV的感染機(jī)會大，但是30歲之前由于自身免疫能力較強(qiáng)，大部分只造成一過性的感染。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，在＜30歲有性生活的年輕女性中，生殖道HPV感染率很高，但是約75%的感染者無癥狀，大部分HPV感染會自行消退，不會持續(xù)性感染引起宮頸癌。30歲之后，HPV的感染率下降，但是隨著年齡增長，宮頸癌的發(fā)病率逐漸增高。所以本文中40～49歲為宮頸癌的高發(fā)階段，HPV病毒的持續(xù)感染造成了宮頸癌前病變乃至宮頸癌的發(fā)生，提示宮頸癌普查計劃應(yīng)當(dāng)對這一階段的人群進(jìn)行重點的關(guān)注。但是實行HPV基因分型檢查可以作為宮頸癌篩查的主要手段，應(yīng)予以推廣，不需有年齡限制。

綜上所述，婁底地區(qū)女性HPV感染率較高，感染類型主要以單一亞型感染為主。婁底地區(qū)HPV感染率與年齡有關(guān)，40～49歲感染率較高，因此要加強(qiáng)婁底地區(qū)該年齡段及其他年齡段女性的HPV檢查，了解婁底地區(qū)HPV感染的情況和亞型分布，為宮頸癌的篩查和預(yù)防提供依據(jù)。

［1］ Zhang WY，Xue YZ，Chen M，et al.Prevalence of high-risk human papilloma virus inflection in different cervical lesion among organized health examination women in Shanghai China［J］.Chin Med J，2008，121（16）：1578-1582.

［2］ Clifford GM，Smith JS，Plummer M，et al.Human papilloma virus type-distribution in the cervix of Chinese women ：a meta-analysis［J］.Int J STD AIDS，2003，19（2）：106-111.

［3］ 汪欣，趙素萍，魏建威.福州地區(qū)935例婦女HPV感染情況的分析［J］.分子診斷與治療雜志，2011，3（1）：33-35.

［4］ 韓定英，吳潔，姜碧卿，等.深圳市羅湖區(qū)1420例女性生殖道人乳頭瘤病毒篩查結(jié)果分析［J］.中國初級衛(wèi)生保健，2008，22（2）：42-43.

［5］ 秦瓊，沈堅，李輝，等.西藏自治區(qū)女性子宮頸人乳頭瘤狀病毒感染現(xiàn)狀調(diào)查及相關(guān)因素分析［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2009，44（12）：892-902.

［6］ Cuzick J.Overview of the European and North American studies on HPV test in primary cervical cancer screening［J］.Int J Cancer，2006，119（5）：1095-1101.

［7］ 王紅旗，郭遠(yuǎn)瑜.6868例婦科門診病人HPV感染狀況及基因分析［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2010，20（5）：1204-1206.

Analysis of HPV Infection Status of 909 Women in Loudi Area

DAI Jun
（Department of Laboratory， Loudi MCH Hospital， Loudi 417000， China）

Objective To explore the relationship between women’s HPV inflection rate and age， and the distribution of HPV subtypes in Loudi area. Provide the basis for cervical cancer prevention. Method 909 samples were detected for HPV genotype by using PCR-reverse dot blot technique. The patients to be divided into 6 different age groups were analyzed. Results 909 samples were detected for HPV， 288 cases were HPV positive， with the positive rate of 31.68%， 226 cases were single inflection， 62 cases were multiplicities of inflection. HPV inflection positive rate and age were related， the 40-49 years old was the highest （35.60%） of positive rate. Conclusion The positive rate is higher than other area. The results of this study will be benefit to the prevention and observation of treatment of cervical cancer.

Cervical cancer； HPV； Genotyping

R737.33

B

1671-8194（2015）09-0026-03