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    骨疏顆粒對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝及子宮指數(shù)的影響

    2015-10-14 08:38:12毛海琴杜義斌徐瑩童曉云
    新中醫(yī) 2015年2期
    關(guān)鍵詞:肌酐比值骨質(zhì)

    毛海琴,杜義斌,徐瑩,童曉云

    1.云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,云南 昆明 650021 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院,廣東 廣州 510405

    ◆實驗研究論著◆

    骨疏顆粒對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝及子宮指數(shù)的影響

    毛海琴1,2,杜義斌1,徐瑩1,童曉云1

    1.云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,云南 昆明 650021 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院,廣東 廣州 510405

    目的:觀察骨疏顆粒對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝的影響,探討骨疏顆粒防治骨質(zhì)疏松的可能作用機制。方法:將3月齡SPF級SD雌性大鼠40只,隨機分為假手術(shù)組、模型組、補佳樂(BJL)(戊酸雌二醇)組及骨疏顆粒(GSKL)組。假手術(shù)組只行假手術(shù),其余3組去大鼠雙側(cè)卵巢復(fù)制絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的模型。術(shù)后第4天開始分別給予對應(yīng)藥物灌胃,12周后檢測血清鈣、血清磷、尿鈣與尿肌酐比值,稱取子宮重量,計算子宮指數(shù)。結(jié)果:與假手術(shù)組比較,模型組尿鈣與尿肌酐比值顯著增加(P<0.05);與模型組比較,BJL組及GSKL組尿鈣與尿肌酐比值顯著降低(P<0.05)。各組血鈣、血磷無明顯變化(P>0.05)。與假手術(shù)組比較,模型組子宮指數(shù)顯著降低(P<0.05);與模型組比較,BJL組子宮指數(shù)明顯增加(P<0.05),GSKL組子宮指數(shù)略增加,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論:骨疏顆粒能降低骨吸收,拮抗骨質(zhì)疏松。

    骨代謝;骨質(zhì)疏松癥;骨疏顆粒;大鼠

    骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)是以骨量減少,骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化為特征,以致骨的脆性增加而易發(fā)生骨折的一種全身性骨病。該病可發(fā)生于任何年齡和不同性別,但以絕經(jīng)后婦女及老年男性多見。骨疏顆粒是本院治療OP的協(xié)定處方,臨床應(yīng)用多年,療效顯著。相關(guān)的臨床研究發(fā)現(xiàn),骨疏顆??梢愿纳平^經(jīng)后OP的主要癥狀,降低骨吸收代謝指標(biāo),提高絕經(jīng)后OP患者腰椎骨密度[1~2]。為進一步明確骨疏顆粒治療OP的作用機制,本研究以去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠為研究對象,觀察骨疏顆粒對骨代謝及子宮指數(shù)的影響,結(jié)果報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 藥品與試劑 骨疏顆粒,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)制劑中心提供;戊酸雌二醇片(補佳樂),拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司,國藥準(zhǔn)字20130009,批號069A2;注射用青霉素,華北制藥股份有限公司,國藥準(zhǔn)字H13020655,批號J3048403。

    1.2 儀器與設(shè)備 電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司,型號AL204-IC);普通電子天平(沈陽龍騰電子公司,遼制00000131-1);全自動生化分析儀(OLYMPUS AU5400)。

    1.3 動物分組及處理SPF級SD大鼠,雌性,40只,3月齡,購于廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心。動物合格證書號:SCXK(粵)2013-0020。將SD雌性大鼠隨機分為假手術(shù)組10只及造模組30只。造模成功后再將造模組分為模型組、補佳樂(BJL)組、骨疏顆粒(GSKL)組3組。每組10只。各組大鼠經(jīng)10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.3m L/100 g體重),仰臥位固定。75%酒精消毒,沿下腹正中線切口2~3 cm。除假手術(shù)組,先將“Y”型子宮角暴露,然后結(jié)扎子宮角,切除雙側(cè)卵巢。假手術(shù)組只切除卵巢周圍少許脂肪組織。逐層關(guān)閉,縫合切口。術(shù)后連續(xù)肌注青霉素3天,4萬U/只。造模組連續(xù)陰道涂片2個性周期,示陰道上皮無性周期變化,提示卵巢切除成功。術(shù)后所有大鼠每籠5只,在室溫22.5~24.0℃及濕度53.0~54.5%的SPF級飼育室飼養(yǎng)。術(shù)后第4天開始給藥,灌胃的劑量按人與大鼠體表面積比折算成大鼠等效劑量。假手術(shù)組及模型組灌服蒸餾水1 mL/100 g。BJL組按0.05 mg/(m L·100 g)給藥,GSKL組按0.3 g/(m L·100 g)給藥。每天上午灌胃1次,連續(xù)灌胃12周。大鼠在最后一次灌胃后,禁食12 h,自由飲水。經(jīng)10%水合氯醛按0.3m L/100 g體重腹腔麻醉,臥位固定,75%酒精消毒腹部皮膚,腹主動脈取血。

    1.4 尿鈣與尿肌酐比值 用大鼠代謝籠收集大鼠24 h尿液,用全自動生化分析儀測定尿鈣及尿肌酐的濃度,計算尿鈣與尿肌酐比值。

    1.5 子宮指數(shù) 剝離子宮,稱取子宮濕重,按子宮濕重(m g)/大鼠體質(zhì)量(g)計算子宮指數(shù)。

    1.6 血鈣、血磷 腹主動脈取血后,送檢驗室用全自動生化分析儀測定血清鈣及磷。

    1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行處理,多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析(ONE-WAY ANOVA)進行分析,實驗結(jié)果以±s)表示。

    2 實驗結(jié)果

    2.1 各組血鈣、血磷及尿鈣與尿肌酐比值比較 見表1。與假手術(shù)組比較,模型組尿鈣與尿肌酐比值顯著增加(P<0.05);與模型組比較,BJL組及GSKL組尿鈣與尿肌酐比值顯著降低(P<0.05)。各組血鈣、血磷無明顯變化(P>0.05)。

    表1 各組血鈣、血磷及尿鈣與尿肌酐比值比較±s)

    表1 各組血鈣、血磷及尿鈣與尿肌酐比值比較±s)

    與假手術(shù)組比較,①P<0.05;與模型組比較,②P<0.05

    組別假手術(shù)組模型組BJL組GSKL組n998 10血鈣(mg/L)11.10±0.19 10.24±0.20 10.35±0.16 10.44±0.21血磷(mg/L)3.14±0.15 3.09±0.12 3.11±0.16 3.13±0.08尿鈣/尿肌酐0.210±0.050 0.510±0.127①0.132±0.047②0.218±0.049②

    2.2 各組子宮指數(shù)比較 見表2。與假手術(shù)組比較,模型組子宮指數(shù)顯著降低(P<0.05);與模型組比較,BJL組子宮指數(shù)明顯增加(P<0.05),GSKL組子宮指數(shù)略增加,差異無顯著性意義(P>0.05)。

    表2 各組子宮指數(shù)比較±s)mg/g

    表2 各組子宮指數(shù)比較±s)mg/g

    與假手術(shù)組比較,①P<0.05;與模型組比較,②P<0.05

    組別假手術(shù)組模型組BJL組GSKL組n9981 0子宮指數(shù)2.507±0.622 0.408±0.064①1.820±0.594②0.514±0.082

    3 討論

    骨組織是新陳代謝非常活躍的組織,這種代謝的標(biāo)志為骨吸收和骨形成的代謝藕聯(lián),即骨轉(zhuǎn)換。在骨轉(zhuǎn)換過程中產(chǎn)生的一些代謝物,稱為骨代謝生化標(biāo)志物或骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物。骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物分為骨形成標(biāo)志物和骨吸收標(biāo)志物,前者代表成骨細(xì)胞活動及骨形成時的代謝產(chǎn)物;后者代表破骨細(xì)胞活動及骨吸收時的代謝產(chǎn)物,特別是骨基質(zhì)降解產(chǎn)物。通過觀察骨代謝生物標(biāo)志物的水平,可以判斷骨轉(zhuǎn)換的狀態(tài)。絕經(jīng)后OP的發(fā)生是由于婦女的卵巢功能衰退,導(dǎo)致雌激素水平下降,影響骨的吸收,最終主要以骨量降低和骨纖維結(jié)構(gòu)的退行性改變?yōu)槠涮?/p>

    征,在臨床上則表現(xiàn)為骨脆性增加從而增加了骨折發(fā)生的幾率和風(fēng)險[3]。絕經(jīng)后OP為高轉(zhuǎn)換型。尿鈣與尿肌酐比值是骨吸收標(biāo)志物之一[4]。本研究造模并灌胃12周后,模型組尿鈣與尿肌酐比值明顯增加,BJL組及GSKL組尿鈣與尿肌酐比值明顯降低,提示補佳樂及骨疏顆??梢越档凸俏?,這可能是骨疏顆粒拮抗OP的機制之一。原發(fā)性O(shè)P血鈣、血磷水平一般均在正常范圍內(nèi)。本研究血鈣及血磷水平各組無明顯差異,與臨床符合。本研究采用摘除大鼠雙側(cè)卵巢復(fù)制OP模型,術(shù)后連續(xù)陰道涂片2個性周期。研究示大鼠陰道上皮性周期變化消失,模型復(fù)制成功。實驗后,模型組子宮指數(shù)較假手術(shù)組明顯降低,補佳樂可以明顯增加子宮指數(shù),骨疏顆粒略增加子宮指數(shù)。提示骨疏顆粒有類雌激素樣作用,但拮抗OP的作用機制與雌激素不盡相同。

    骨疏顆粒由狗脊、骨碎補、淫羊藿、熟地黃、杜仲、知母、黃芪、白術(shù)、蒼術(shù)、三七、羌活、獨活等組成。方中狗脊、骨碎補、淫羊藿、熟地黃、杜仲、知母補腎壯骨,黃芪、白術(shù)、蒼術(shù)補益脾氣,三七、羌活、獨活活血通絡(luò)止痛,共奏補腎健脾,活血通絡(luò)止痛之功?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示,淫羊藿總黃酮能有效防止維甲酸造成的鼠骨量丟失,改善骨組織顯微結(jié)構(gòu),調(diào)節(jié)骨生成與骨破壞的紊亂狀態(tài),從而有效對抗骨質(zhì)疏松的發(fā)生[5]。謝雁鳴等[6]研究發(fā)現(xiàn),骨碎補總黃酮能調(diào)節(jié)細(xì)胞因子血清白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-4、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平,顯著提高大鼠股骨、腰椎骨密度。杜仲葉醇提取物具有類激素作用,能增進大白鼠骨髓生成和增加其骨質(zhì)的強度[7]。黃芪水提液防止去卵巢大鼠骨丟失的效應(yīng)與乙烯雌酚相近,但機制不同。黃芪水提液不僅抑制去卵巢后的骨吸收,且能增加體重[8]。

    綜上,本研究提示了骨疏顆粒治療OP的一部分作用機制,今后將繼續(xù)研究骨疏顆粒治療OP的其他可能機制。

    [1]杜義斌,徐翔峰,彭江云.骨疏顆粒治療老年性骨質(zhì)疏松癥30例療效觀察[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2006,27(5):15.

    [2]杜義斌,吳洋,段艷蕊,等.骨疏顆粒治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥臨床觀察[J].新中醫(yī),2013,45(8):76-78.

    [3]張軍,張鵬,劉忠厚.絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥中醫(yī)領(lǐng)域存在問題及解決途徑[J].中國骨質(zhì)疏松雜志,2011,17(5):460-461.

    [4]中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松與骨礦鹽疾病分會.原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥防治指南(2011年)[J].中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志,2011,4(1):2-11.

    [5]回連強,曹春雨,劉婷,等.黔嶺淫羊藿總黃酮對抗維甲酸致大鼠骨質(zhì)疏松作用的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2014,20(3):170-174.

    [6]謝雁鳴,許勇鋼,趙晉寧,等.骨碎補總黃酮對去卵巢大鼠骨密度和細(xì)胞因子IL-6、IL-4、TNF-α水平的影響[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2004,10(1):34-37.

    [7]李亞平.杜仲葉提取物治療骨質(zhì)疏松淺見[J].四川中醫(yī),1996,14(9):16.

    [8]李朝陽,吳鐵,黃連芳,等.黃芪水提液與己烯雌酚對去卵巢大鼠骨代謝的影響[J].中草藥,1998,29(1):27-30.

    (責(zé)任編輯:駱歡歡)

    Effect of Gushu Granule on Bone Metabolism and Uterus Index in Ovariectomized Osteoporosis Rats

    MAO Haiqin,DU Yibin,XU Ying,et al

    Objective:To observe the effect of Gushu Granule(GG)on bone metabolism in rats with ovariectomy-induced osteoporosis,and to explore its possible protective and therapeutic mechanism for osteoporosis.Methods:Forty SD fem ale rats aged three-months were randomly divided into four groups,sham operation group,model group,Bujiale(BJL,estradiol valerate)group and GG group.The sham operation group only received operation for removing some fat,and the other three groups were given ovariectomy.Three days after ovariectomy,the rats were given corresponding drug by intragastric administration for twelve weeks.Serum levels of calcium and phosphorus,and ratio of urine calcium to urine creatinine were detected.The uterus was weighed for calculating uterus indexes.Results:The ratio of uterine calcium to uterine creatinine was increased in the model group(P<0.05 com pared with the sham operation group),and was decreased in BJL group and GG group(P<0.05 com pared with the model group).No statistical significant differences of serum levels of calcium and phosphorus were found between the two groups(P>0.05).The uterus indexes was significantly decreased in the model group(P<0.05 com pared with the sham operation group)and then was obviously increased in BJL group(P<0.05 com pared with the model group)while was mildly increased in GG group(P>0.05).Conclusion:Gushu granule can prevent osteoporosis by depressing bone absorption.

    Bone metabolism;Osteoporosis;Gushu Granule;Rats

    R589.5

    A

    0256-7415(2015)02-0213-03

    10.13457/j.cnki.jncm.2015.02.100

    2014-08-07

    云南省教育廳科學(xué)研究基金項目(2011Y410,2012C034);云南白藥、云南中醫(yī)學(xué)院中醫(yī)藥教育創(chuàng)新基金項目(YB2011J06);云南中醫(yī)學(xué)院科研基金項目(XK201309);云南省中醫(yī)醫(yī)院院級科研項目(2011YJ034)

    毛海琴(1978-),女,講師,主要從事中醫(yī)藥防治風(fēng)濕病研究。

    杜義斌,E-mail:dybys@126.com。

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