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    紅藍草紫色素分離純化研究

    2015-10-09 22:36蔣紅芝義崇寬楊昌鵬
    湖北農業(yè)科學 2015年17期
    關鍵詞:分離純化

    蔣紅芝+義崇寬+楊昌鵬

    摘要:以紅藍草(Peristrophe baphica Bremk)莖葉為原料,用溶劑萃取法提取紫色素,用大孔樹脂吸附法分離紫色素,進而探討紅藍草紫色素的吸附與分離條件。結果表明,根據吸附前后溶液吸光度和顏色的變化,選擇X-5、D4020、D101、S-8作為紅藍草紫色素的吸附樹脂;洗脫溶劑以乙醇為佳,且乙醇體積分數以75%為宜;乙醇洗脫效果為D101>X-5>D4020,而S-8吸附的色素很難被乙醇洗脫。進行色素柱層析分離時,X-5和D101大孔樹脂分離富集紅藍草紫色素的效果優(yōu)于D4020大孔樹脂。

    關鍵詞:紅藍草(Peristrophe baphica Bremk);紫色素;分離純化;大孔樹脂

    中圖分類號:TS202.3 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2015)17-4256-03

    紅藍草(Peristrophe baphica Bremk)又名紅藍、山藍、觀音草,為爵床科(Acanthaceae)植物山藍的地上部分,為多年生草本植物。人工種植容易,中國華南各省區(qū)均有人工種植。紅藍草雖為藥用植物資源,但富含天然色素。從紅藍草的莖、葉中提取的天然色素食用安全,具有很高的利用價值。前期研究表明,用水提和醇提的紫色素穩(wěn)定性、耐熱性較好[1-3],但由于提取的過程中帶入果膠、蛋白質等雜質,烘干的成品黏性較大,不利于干燥與保存。本試驗以紅藍草為原料,采用溶劑萃取法提取紫色素,研究不同大孔樹脂對該色素的吸附與分離效果,旨在為生產上提取與分離紅藍草紫色素提供參考,同時為開發(fā)利用紅藍草提供理論依據。

    1 材料與方法

    1.1 材料、儀器與試劑

    供試材料:市購的紅藍草(葉子不帶毛)。

    儀器:BB331-A多功能食品攪拌機(佛山市順德區(qū)任發(fā)電器實業(yè)有限公司)、T-500型電子天平(美國雙杰兄弟集團有限公司)、WD800G格蘭仕微波爐(格蘭仕微波爐電器有限公司)、800B低速臺式離心機(上海安亭科學儀器廠制造)、RE52-86A旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)、VIS-7220可見分光光度計(北京瑞利分析儀器公司)、DBS-100電腦全自動部分收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司)、HL-2B恒流泵(上海滬西分析儀器廠有限公司)、層析柱(上海錦華層析設備廠)、DFZ型真空干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司)、2XZ-2型旋片真空泵(浙江黃巖求精真空泵廠制造)、QN-100球形濃縮罐(溫州中翔輕工機械廠)、ZG真空干燥機(常州市博立干燥制粒設備有限公司)等。

    主要試劑:S-8、X-5、D101、D4020、D401、D301、D151、D296R大孔樹脂(天津市光復精細化工研究所生產);無水乙醇、丙酮等。

    1.2 方法

    1.2.1 紅藍草紫色素提取的工藝流程 紅藍草→清洗→晾干→切碎、粉碎→色素提取→紫色素提取液。

    1.2.2 紅藍草紫色素含量的測定 根據蔣紅芝等[1-3]報道的紅藍草紫色素特征吸收峰(λ=580 nm)測定吸附前以及靜態(tài)、動態(tài)吸附后色素液的吸光度(A580 nm),乘以稀釋倍數后作圖。

    1.2.3 各因素對紅藍草紫色素吸附效果的影響 試驗考察了不同型號(S-8、X-5、D101、D4020、D401、D301、D151、D296R)樹脂對色素吸附效果的影響,并考察了溶劑乙醇及丙酮對色素的洗脫效果以及乙醇體積分數(55%、75%、95%)對色素洗脫效果的影響。

    1.2.4 紅藍草紫色素柱層析分離的工藝流程 吸附樹脂預處理→裝柱→平衡→添加色素提取液→樹脂吸附色素→用洗脫溶劑洗脫色素→收集色素液[4,5]→測定吸光度(A580 nm),乘以稀釋倍數后作圖。

    2 結果與分析

    2.1 紅藍草紫色素的樹脂吸附與分離

    2.1.1 不同樹脂對紅藍草紫色素的吸附效果 分別稱取10.00 g S-8、X-5、D101、D4020、D401、D301R、D151、D296R 8種型號預處理過的樹脂于8個燒杯中,加入紅藍草紫色素提取液20.00 mL,在室溫下靜置吸附一定時間后測定上清液的吸光度。由圖1可知,所用的8種樹脂吸附紅藍草紫色素180 min后,上層清液吸光度由小到大的順序為S-8、D301R、D296R、X-5、D4020、D101、D401、D151。由此可見,S-8大孔樹脂的吸附效果最好,其次是D301R、D296R大孔樹脂。但從吸附后樹脂的顏色看,X-5、D4020、D101均為紅紫色,S-8吸附色素后為藍紫色,而D301R(弱堿型)、D296R(強堿型)吸附色素后為藍綠色,顏色發(fā)生了改變。所以考慮用X-5、D4020、D101、S-8作為紅藍草紫色素的吸附樹脂。

    2.1.2 紅藍草紫色素洗脫溶劑的選擇 稱取已充分吸附色素的各種樹脂1.00 g,分別加入16 mL 95%乙醇、丙酮作為洗脫溶劑,先用玻璃棒充分攪勻,然后在常溫下靜態(tài)洗脫,測定洗脫后紅藍草紫色素液的吸光度。由表1可知,乙醇洗脫效果為D101>X-5>D4020,3種樹脂洗脫液均為紫紅色,而S-8樹脂用乙醇作為洗脫溶劑難以洗脫。除D101外,7種樹脂用丙酮作洗脫溶劑時均難以洗脫。所以選擇乙醇作為紅藍草紫色素的洗脫溶劑。

    2.1.3 紅藍草紫色素洗脫溶劑體積分數的選擇 分別稱取0.40 g已充分吸附色素的3種型號樹脂D101、X-5、D4020,加入不同體積分數的乙醇溶液16 mL,洗脫80 min,測定上清液的吸光度。由圖2可知, 75%乙醇對充分吸附色素的D101、X-5、D4020型樹脂洗脫效果最好??傮w來看,洗脫溶劑乙醇的體積分數宜采用75%。

    綜合以上試驗結果,選擇D101、X-5、D4020三種樹脂作為紅藍草紫色素的吸附樹脂,選擇75%乙醇作為紅藍草紫色素的洗脫溶劑。

    2.2 紅藍草紫色素的柱層析分離效果

    由圖3可知,紅藍草紫色素經D101、X-5、D4020樹脂吸附柱層析分離后,均出現(xiàn)了1個洗脫峰,說明紫色素集中在1個洗脫峰。與D4020樹脂相比,X-5和D101樹脂吸附柱層析的洗脫峰比較窄,洗脫下來的紫色素比較集中,即分離洗脫的效果較好。說明X-5和D101大孔樹脂分離富集紅藍草紫色素的效果優(yōu)于D4020樹脂。

    2.3 紅藍草紫色素理化指標評價結果

    采用6.1 kg的紅藍草為原料,水為浸提劑,料液比(m∶V)為1∶3,煮沸10 min提取紫色素,減壓濃縮得15 000 mL紫色素濃縮液,用D101、X-5樹脂靜態(tài)吸附后,用75%乙醇洗脫,得到11 500 mL濃縮液,再進行減壓濃縮,得3 800 mL紫色素濃縮液,然后于60 ℃真空干燥,得20.23 g固體紫色素。此固體紫色素呈深藍紫色,呈晶體狀、粒狀或粉末,液體呈紅紫色(濃)、藍紫色(稀),具有紅藍草植物香風格,符合感觀要求。

    理化指標:產品經廣西壯族自治區(qū)輕工產品質量監(jiān)督檢驗站檢驗,鉛(Pb)含量為0.48 mg/kg,總砷(以As計)含量為0.80 mg/kg。可見,紅藍草紫色素中鉛、總砷含量均符合GB 28311-2012[6]中鉛(Pb)≤3(mg/kg)、總砷(以As計)≤2(mg/kg)的要求。

    3 結論

    不同型號的樹脂對紅藍草紫色素的吸附及洗脫效果均有所不同。各種型號樹脂對該色素的吸附效果順序為S-8>D301R>D296R>X-5>D4020>D101>D401>D151;根據吸附前后吸光度和顏色變化,用X-5、D4020、D101、S-8作為紅藍草紫色素的吸附樹脂。乙醇洗脫效果為D101>X-5>D4020,而S-8吸附的色素很難被乙醇洗脫;洗脫溶劑宜使用75%乙醇。進行色素柱層析分離時,X-5和D101大孔樹脂分離富集紅藍草紫色素的效果優(yōu)于D4020大孔樹脂。試驗所得固體紅藍草紫色素呈深藍紫色,呈晶體狀、粒狀或粉末,液體呈紅紫色(濃)、藍紫色(稀),具有紅藍草植物香風格,符合感觀要求;理化指標經廣西壯族自治區(qū)輕工產品質量監(jiān)督檢驗站檢驗,鉛、總砷含量均符合GB 28311-2012[6]的要求。

    參考文獻:

    [1] 蔣紅芝,義崇寬,范務彩,等. 微波提取紅藍草紫色素工藝研究[J]. 湖北農業(yè)科學,2011,50(21):4463-4464,4468.

    [2] 蔣紅芝,范務彩,黃冬雪,等.超聲波醇提紅藍草紫色素工藝研究[J].湖北農業(yè)科學,2011,50(10):2101-2104.

    [3] 蔣紅芝,義崇寬,楊昌鵬,等.紅藍草紫色素穩(wěn)定性的研究[J].湖北農業(yè)科學,2012,51(19):4355-4357,4360.

    [4] 楊昌鵬,唐志遠,盧 藝,等.火龍果果皮紅色素的提取分離研究[J].安徽農業(yè)科學,2010,38(1):347-349,496.

    [5] 李崇瑛,王 安,楊 濤,等.食用天然色素的純化與研究進展[J].中國調味品,2007,343(9):18-22,38.

    [6] GB 28311-2012,食品安全國家標準 食品添加劑梔子藍[S].

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