12種中草藥對(duì)9種臨床致病性真菌的實(shí)驗(yàn)作用

于 軍，魯毅巍，李 旭，王 麗

（1.吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 醫(yī)學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，吉林 長(zhǎng)春130021；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春130033；3.吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 病原生物學(xué)系，吉林 長(zhǎng)春130021）

在當(dāng)今現(xiàn)代醫(yī)學(xué)水平高速發(fā)展的時(shí)代，在醫(yī)學(xué)科學(xué)基礎(chǔ)研究迅猛發(fā)展的今天，為了發(fā)揮老東北中草藥的特色，還有當(dāng)今臨床上廣譜抗生素、抗癌藥物和放療化療藥物的廣泛應(yīng)用，所以中草藥材抗深部真菌感染，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠有效。為此我們進(jìn)行了本實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)菌種 ①新型隱球菌（Cryptococcus neoformans），②鐮刀（Fusarium），③尖孢鐮刀（F.Oxysporum），④白色念珠菌（Candidiasis albicans），⑤標(biāo)準(zhǔn)22019近平滑念珠菌（Candidiasis Parapsilosis），⑥熱帶念珠菌（Candidiasis tropicalis），⑦克柔念珠菌（Candidiasis krusei），⑧疣狀瓶霉 （P.uerrucosa），⑨曲霉（Aspergillus）.

1.2 實(shí)驗(yàn)藥材 黃芪（Radix Astragali）；五倍子（Galla Chinensis）；白頭翁（Radix Pulsatillae）；射干（Belamcanda chinensis，DC）；金銀花（Lonicera japonia Thumb）；土槿皮（Psudolarix kaempferi）；蛇 床 子 （cnidium monnieri）；苦 參 （sophora flavesens）；虎杖（Polugonum Cuspidatum siebzucc）；黃連（coptis chinensis）；黃岑（scutellaria baicalensis Georgi）；葛根（Radix Puerariae）。

1.3 中藥藥液制備

取每種已粉碎中藥100g，用TP150超聲波提取器超聲1h。循環(huán)水式多用真空泵，抽濾過濾?；亓鳚饪s成50ml的藥液（旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE－52A，上海亞榮生化儀器廠）。濃縮成50ml藥液，濃度為2 g/ml，作為藥液備用。

1.4 制備 藥物培養(yǎng)基

本實(shí)驗(yàn)采用藥基試管法進(jìn)行MIC測(cè)定。將藥液2ml加入18ml改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基中混勻，成為終濃度為200mg/ml的藥物培養(yǎng)基，分裝，并作等倍稀釋，即第一管至第八管的濃度依次為：200 mg/ml，100mg/ml，50mg/ml，25mg/ml，12.5 mg/ml，6.25mg/ml，3.125mg/ml，1.56mg/ml的濃度。

1.5 對(duì)照培養(yǎng)基

沙氏瓊脂培養(yǎng)基；克霉唑培養(yǎng)基（濃度為0.25 μg－16μg/ml）

1.6 實(shí)驗(yàn)方法與觀察方法

將臨床采集的致病性細(xì)菌進(jìn)行分離，純培養(yǎng)，將真菌種接種至沙氏瓊脂斜面增菌培養(yǎng)，沙氏肉湯培養(yǎng)基將其制成菌液，接種于藥基及對(duì)照培養(yǎng)基中。置28度溫箱中培養(yǎng)15天，肉眼未見菌落生長(zhǎng)的最低濃度為該藥的MIC。

2 結(jié)果

在實(shí)驗(yàn)的12種中藥中均表現(xiàn)出一定的抗真菌作用。其中：射干、黃岑、土槿皮、黃連、抗真菌能力強(qiáng)。受試的中藥抗真菌MIC結(jié)果如表1，圖1。

3 討論

通過本實(shí)驗(yàn)研究，更加體現(xiàn)了老東北中藥基地的天然獨(dú)特作用。為了能更好的發(fā)揮中藥材的藥理作用，減少西藥的毒副作用，有效抑制真菌的感染及并發(fā)，尋找到了好的方法。

我們知道，天然中草藥的有效成份含蛋白質(zhì)、萜類、生物堿類、脂肪類等，這些有效成分會(huì)作用于真菌細(xì)胞，殺傷真菌細(xì)胞活性，從而達(dá)到抗真菌作用。還有目前臨床上將抗真菌中藥或復(fù)方中藥與唑類藥物聯(lián)合作用于抗真菌感染，從而提高抗真菌活性。本實(shí)驗(yàn)研究也是在50多種中草藥中挑選出抗真菌活性強(qiáng)的十二種中草藥，通過對(duì)十二種中草藥的活性實(shí)驗(yàn)來達(dá)到對(duì)致病性真菌的殺菌作用，黃連、白頭翁活性弱于其他十種中草藥的活性，由此為下一步挑選上述活性強(qiáng)的中草藥抗真菌的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究奠定了基礎(chǔ)。

綜所上述，中藥抗真菌材料范圍很廣。開采老東北中草藥資源豐富、且毒性小。我們下一步將建立動(dòng)物模型進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)抗真菌的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究，為中草藥治療臨床真菌感染提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

表1 中藥抗真菌MIC試驗(yàn)結(jié)果（±s）

表1 中藥抗真菌MIC試驗(yàn)結(jié)果（±s）

P＜0.01compared with control group

霉 曲霉黃芪 1.56±0.11 1.56±0.11 1.56±0.11 — — 100±0.5 3.125±0.31 3.125±0.31新型隱球菌 茄病鐮刀菌 尖孢鐮刀菌 白色念珠菌 近平滑念珠菌 熱帶念珠菌 克柔念珠菌 疣狀平—五倍子 12.5±0.31 — 50±0.21 50±0.21 12.5±0.31 3.125±0.31 6.25±0.32 —白頭翁 — — 1.56±0.11 — — 25±0.41 —射干 1.56±0.11 1.56±0.11 1.56±0.11 — — — — 100±0.51 —金銀花 1.56±0.11 1.56±0.11 3.125±0.32 — 6.25±0.32 — — 50±0.31 —土槿皮 1.56±0.11 1.56±0.11 1.56±0.11 — 100±0.51 — — 1.56±0.11 —蛇床子 1.56±0.11 1.56±0.11 100±0.51 — — — — 1.56±0.11 —苦參 25±0.41 25±0.41 25±0.41 — 100±0.51 100±0.51 — 25±0.42 3.125±0.32虎杖 100±0.51 25±0.41 6.25±0.32 100±0.51 — 100±0.5 50±0.21 1.56±0.11 —黃連 12.5±0.3 100±0.51 100±0.51 — 25±0.4 50±0.2 50±0.21 3.125±0.32 —黃岑 50±0.3 1.56±0.11 1.56±0.11 100±0.5 1.56±0.11 — 6.25±0.32 1.56±0.11 —葛根 1.56±0.11 1.56±0.11 1.56±0.11 50±0.21 100±0.5 3.125±0.31 1.56±0.11 —克霉唑 16±0.22 2.0±0.22 2.0±0.22 8±0.22 8±0.22 8±0.22 8±0.22 2.0±0.22—

圖1 12種中藥對(duì)主要的六種致病真菌的MIC

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