富血小板血漿應用于顆粒脂肪移植的研究進展

余　晶　綜述，吳毅平　審校（華中科技大學附屬同濟醫(yī)院整形美容外科湖北武漢430030）

富血小板血漿應用于顆粒脂肪移植的研究進展

余晶綜述，吳毅平審校
（華中科技大學附屬同濟醫(yī)院整形美容外科湖北武漢430030）

由于脂肪組織來源豐富、移植后質地外觀接近自然、操作簡便、對機體創(chuàng)傷小、成本相對其他人工填充材料低廉等優(yōu)勢，自體顆粒脂肪注射移植被整形美容外科醫(yī)師廣泛地應用于組織填充和重建［1-2］。但移植脂肪的存活率不確定，移植后組織的吸收率20%～70%，且可能出現(xiàn)囊腫、鈣化等并發(fā)癥［3-5］，極大地限制了其應用。為此，整形外科醫(yī)師已經(jīng)作出了很多努力來完善和標準化脂肪移植的手術操作流程，或者通過輔助治療，如：添加胰島素、生長因子（如：堿性成纖維細胞生長因子、血管內皮細胞生長因子、胰島素樣生長因子、瘦素等）、富血小板血漿，或與干細胞（脂肪來源干細胞或基質血管成分［6］、骨髓間充質干細胞、臍血來源間充質干細胞）混合移植、基因治療或細胞治療等，促進脂肪移植物的血運重建、脂肪組織再生、減少纖維化等，從而提高移植脂肪組織最終存活率。其中，將富血小板血漿應用于顆粒脂肪移植、促進移植脂肪存活，成為研究熱點之一。富血小板血漿（Platelet-rich Plasma，PRP）是由全血離心得到的含有高濃度血小板的血漿，富含來源于血小板的多種生長因子和黏附分子。PRP來源于自體組織、制備簡便，相對于其他輔助治療，如：人工合成或提取的生長因子、干細胞輔助脂肪移植等更安全、可行、經(jīng)濟。臨床和實驗研究已報道PRP對骨組織修復、創(chuàng)面修復、肌肉關節(jié)運動損傷修復有效。近年來，有臨床醫(yī)師將PRP應用于脂肪移植，雖然一些臨床報道有效，但證據(jù)仍夠不充分，目前僅有少量實施在小動物身上的基礎研究和前期臨床研究。此外，尚無明確的分子機制研究報道。本文通過回顧目前已有的相關文獻，探討PRP對脂肪移植物作用的可能分子機制?；仡櫮壳耙寻l(fā)表的對PRP應用脂肪移植的體外、動物和人體研究，為其臨床應用和未來研究方向提供依據(jù)。

1　富血小板血漿的定義

富血小板血漿（PRP）是自體的、含有高于全血濃度的血小板的少量血漿。成人全血的血小板計數(shù)是150 000～350 000/μl。只有當PRP中的血小板計數(shù)達到1，000，000/μl或者全血血小板數(shù)的4～7倍，才能取得臨床效果［7］。血小板中含有兩種顆粒：α顆粒和高密度顆粒。每個血小板中大約有50～80個α顆粒。目前已證實α顆粒中至少含有7種能激活創(chuàng)面修復的生長因子，包括三種血小板衍生因子（PlateletDerivedGrowthFactors，PDGF-AA，PDGF-BB和PDGF-AB）、轉生長因子-β（Transforming Growth Factors，TGF-β1和TGF-β2）、血管內皮細胞生長因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）和表皮生長因子（Epidermal Growth Factor，EGF）［8］。α顆粒中還含有三種細胞黏附蛋白：纖維蛋白原、纖維連接蛋白和玻連蛋白［9］。此外，還含有胰島素樣生長因子（Insulin-like Growth Factors，IGF-I，IGF-II）、成纖維細胞生長因子（Fibroblast Growth Factor，F(xiàn)GF）、內皮細胞生長因子（Endothelial Cell Growth Factor，ECGF）和血小板源性血管生長因子（Platelet Derived Angiogenesis Factor，PDAF）。高密度顆粒中也含有生物活性因子，包括組織胺、5-羥色胺、多巴胺、鈣離子和腺甘酸等，這些因子也參與創(chuàng)面修復，在創(chuàng)面修復的第一階段--炎癥反應期發(fā)揮重要作用。組織胺和5-羥色胺能增加毛細血管的通透性，使得炎癥細胞向損傷部位遷移并激活巨噬細胞［9］。

2　富血小板血漿的制備

最好在手術前采集全血制備PRP，因為手術開始后術區(qū)會出現(xiàn)血小板聚集和觸發(fā)凝血反應，降低外周循環(huán)中的血小板數(shù)。PRP制備的原理是根據(jù)全血中各成分的密度差異，經(jīng)離心來分離得到濃聚血小板的血漿。通常采用二次離心抗凝的全血來獲得PRP。第一次離心后，紅細胞沉積在最下方，與血漿分離，中間出現(xiàn)白色的薄層，含有大量血小板。取血漿和中間層進行第二次離心后，血小板沉積，留取約1/4的血漿與血小板混合均勻后即得到PRP［7-10］。目前，文獻報道的離心力和離心時間各不相同。目前一致認可的是在第二次離心時采用較高的離心力，以增加血小板數(shù)量和減少制備時間。但高速離心會導致血小板破裂，引起制備過程中的生長因子釋放，最終降低所得PRP中血小板、生長因子的含量，影響其生物活性。Dugrillon等［11］通過研究離心力對生長因子含量的影響發(fā)現(xiàn)，隨著離心力從400g到1200g的增加，PRP中血小板的計數(shù)隨之增加。但當離心力從400g增加到800g時，TGF-β的含量明顯增加，而繼續(xù)增加離心力到1000g和1200g時，TGF-β的含量卻沒有繼續(xù)增加。因此，第二次離心的最佳離心力可能是800g。

雖然通過離心制備PRP操作簡單，但僅適用于實驗室研究，因為在臨床中常需要較大量的PRP，以離心法制備工作量大，且容易污染。因此，市場上出現(xiàn)了兩種提取PRP的自動化設備。一種是標準化的細胞分離和收集設備，從一個單位的（200ml）全血中提取PRP，適用于制備較大劑量的PRP，如用于顆粒脂肪移植隆乳術和乳房再造術等。通常能達到2～4倍血小板濃聚。這種設備的優(yōu)勢是能自動化制備較大量的PRP，而且剩余的紅細胞和血漿可以回輸給患者。另外一種是為快速制備小劑量的PRP而設計的設備，以用于骨移植、脂肪移植或關節(jié)軟骨運動損傷的治療等。這類設備有Curasan，PCCS，Anitus，SmartPReP，GPS和Symphony II system，通常從45～60ml全血中提取出約6ml的PRP，但血小板濃聚度不一致，從2倍到8倍不等［7，10，12］。

3　PRP的激活

血小板激活是α顆粒與血小板膜融合、胞吐釋放蛋白，和分泌型蛋白質通過添加組蛋白和碳水化合物側鏈活化的過程。Marx等［7，10］最早報道的方法是將6mlPRP與1ml氯化鈣和凝血酶混合物（10，000單位胎牛凝血酶溶于10ml 10%氯化鈣溶液）混合從而激活PRP。但使用凝血酶激活PRP通常會導致生長因子在激活后的10min內快速釋放，1h內釋放超過95%。因此，Marx等推薦在PRP激活后的10min內、在受區(qū)使用凝血酶。這種方法通常用于制備和收集PRP中的所有生長因子。另一種方法是單純添加氯化鈣（CaCl2）。添加氯化鈣后，PRP中的凝血酶原轉化為凝血酶，激活血小板、引起纖維蛋白凝集，PRP形成凝膠狀，血小板釋放出的生長因子被包埋在纖維蛋白基質中、釋放緩慢，可持續(xù)釋放7d以上。這種方法是臨床上將PRP用于脂肪移植軟組織填充時最常使用的方法。

還有一種收集PRP中的生長因子的方法是冷凍/復溫循環(huán)法（freeze/thaw cycle）［12-13］。具體操作是，將PRP置入-80℃冰箱24h，隨后37℃水浴1h，接著2000g離心10min。將上清液用0.22μm的濾器過濾后，儲存在-80℃。

4　PRP中生長因子的含量

文獻報道了不同的制備方法和不同的激活方法下PRP中生長因子的含量不同。

4.1 PRP的制備和儲存方法

PRP的制備方法影響PRP中生長因子的含量。Weibrich等［12-13］比較了血細胞分離儀和5種快速PRP提取設備所獲得的PRP經(jīng)激活后的生長因子的含量（見表1）。

PRP的存儲方式同樣影響PRP生長因子的含量。Pietramaggiori等研究了三種存儲方法下生長因子的含量：新鮮冷凍，添加保護液凍干保存，不添加保護液凍干保存。結果顯示，三種儲存方法都能有效地保存PRP中的生長因子，新生冷凍保存的PRP經(jīng)活化后得到TGF-β334.4ng/ml，PDGF8672 pg/mL，EGF2185.2pg/ml，VEGF330.8pg/ml；不添加保護液凍干保存的PRP經(jīng)激活后等到TGF-B 314.8ng/mL，PDGF7304pg/mL，EGF2016.4pg/ml，VEGF346.4pg/ml；添加保護液凍干保存的PRP經(jīng)激活后得到TGF-β 245.2ng/ml，PDGF7784pg/ml，EGF2064.8pg/ml，VEGF 268 pg/ml。

4.2 PRP激活方法

PRP的激活方法影響PRP中生長因子的釋放。Kim等比較了4種激活方法下生長因子的含量：①10%CaCl2·2H2O；②0.1%Triton-X；③142.8 U/ml凝血酶和14.3mg/ml CaCl2·2H2O；④在剪切力和20 μg/mL膠原蛋白預先激活后，添加10U/ml凝血酶和2mM CaCl2·2H2O。四種方法都能充分地激活血小板［14］。使用方法2和方法3，PDGF和TGF-β的釋放更充分，獲得含量更高；而方法4獲得VEGF含量更高；方法1獲得的FGF的含量更高。因此，不能說明哪一種方法最佳。Eppley等［15-16］使用凝血酶/氯化鈣混合物激活PRP，得到的生長因子PDGF-BB（120ng/mL），TGF-β1（120ng/ml），VEGF（995ng/ ml），EGF（129ng/ml）。而Weibrich等［17］評估了115例PRP樣本采用冷凍/復溫循環(huán)法激活時的生長因子釋放情況，觀察到PDGF-AB（117ng/mL）、TGF-β1（169ng/mL）、IGF-I（84ng/mL）大量釋放，而PDGFBB（10ng/mL）和TGF-β12（0.4ng/mL）含量較少。

通常認為PRP中的血小板數(shù)越多，釋放的生長因子含量越高。但Weibrich［13］和Eppley等［15-16］發(fā)現(xiàn)生長因子的含量與PRP中血小板數(shù)量無明顯的相關性，不能根據(jù)血小板數(shù)量預估生長因子的含量?？赡茉蛴醒“逯蓄w粒數(shù)量或存儲的生物活性物質含量存在差異，不同激活方法下生長因子的釋放情況不同，可能有來自其他細胞（如：白細胞）或血漿源性的生長因子等。

表1　人PRP釋放的生長因子含量

5　PRP對脂肪移植物的作用

5.1顆粒脂肪游離移植

顆粒脂肪移植物中含有至少兩群細胞：成熟的脂肪細胞和間質血管成分（stromal vascularfraction，SVF）細胞［18］。間質血管成分一個異源的細胞群，包含前脂肪細胞（preadipocytes）、脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）、內皮細胞、平滑肌細胞、周細胞、白細胞和肥大細胞等。在游離移植后早期，顆粒脂肪移植物由組織的滲透供養(yǎng)。隨后，移植物由新生的血管重建血供。成熟脂肪細胞在缺血缺氧環(huán)境下，可能出現(xiàn)壞死或去分化；當血供重建后，去分化的脂肪細胞可能重新分化為成熟的脂肪細胞。前脂肪細胞和脂肪來源干細胞能耐受缺血缺氧，且在缺血缺氧刺激下增殖、分化，對移植脂肪的存活也起到重要作用［6，19］。

對于顆粒脂肪組織游離移植后的轉歸，主要有兩種觀點：宿主替代理論和細胞存活理論。前者認為，移植后的脂肪細胞不能存活，出現(xiàn)壞死并逐漸被宿主的巨噬細胞吞噬、取代；后者認為，顆粒脂肪組織游離移植后部分脂肪細胞可以通過組織間的滲透供養(yǎng)直至血運重建而存活下來［5］。近年來，學者Kotaro Yoshimura［20-21］提出了“三區(qū)域理論”：認為顆粒脂肪組織游離移植后早期由組織間滲液供養(yǎng)，在這種缺血環(huán)境下，僅最外層（存活區(qū)surviving zone，厚度＜300μm）的成熟脂肪細胞能存活下來，內部的成熟脂肪細胞不能存活。中間區(qū)域（再生區(qū)regenerating zone）能耐受缺血缺氧的脂肪來源干細胞和前脂肪細胞部分存活下來，參與脂肪細胞的再生、組織重塑；而移植物最中心（壞死區(qū)necrotic zone）所有細胞都不能存活，壞死區(qū)最終被吸收或被纖維結締組織取代。

5.2 PRP在移植脂肪存活中的作用

PRP可能通過以下方面促進移植脂肪的存活：①由其血漿成分為移植物提供營養(yǎng)支持；②在多種促血管生成細胞因子的作用下，促進移植物的血管新生、血供重建，如：PDGF、PDAF和VEGF［14］；③促進移植物內脂肪來源干細胞和前脂肪細胞的增殖和分化。許多臨床前期研究證實了PRP能促進脂肪移植物的血管生成［22］，但PRP對成熟脂肪細胞或脂肪來源干細胞作用的研究尚不多。許多研究發(fā)現(xiàn)PRP能促進脂肪來源干細胞的體外增殖，但最佳作用濃度尚存在爭議。Kakudo等［23］報道1%和5%的激活的PRP（actived Platelet Rich Plasma，aPRP）能促進人脂肪來源干細胞的增殖，但超過5%的濃度反而抑制人脂肪來源干細胞的增殖。但Cervelli等［24］研究發(fā)現(xiàn)在1%到50%的濃度范圍內，aPRP對人脂肪來源干細胞增殖的促進作用存在劑量依賴。有些學者認為能用PRP取代ADSCs培養(yǎng)基中的胎牛血清，PRP既能促進ADSCs的增殖，也避免了某些疾病，如克雅氏?。–reutzfeldt-Jakob）的傳播。

5.3 PRP促進移植脂肪存活的機制

PRP對成熟脂肪細胞或脂肪來源干細胞影響的分子機制尚無足夠的文獻報道。我們的相關前期研究表明，PRP對ADSCs體外增殖的促進作用可能與其對cyclinD1表達的上調有關，但PRP同時也提高了CDK抑制劑p27Kip1的蛋白水平，提示PRP可能通過提高p27Kip1的蛋白水平抑制了ADSCs的過度增殖［25］。Liu等［26-27］研究PRP對骨質疏松癥的治療，發(fā)現(xiàn)PRP能上調前脂肪細胞（3T3L1細胞株）的成骨分化潛能，下調其成脂分化潛能；此外，PRP能通過增加特異性的成骨基因，如RunxII、OPN和OCN的表達，和減少成脂分化基因，如PPAR-r和Leptin的表達，促使成熟脂肪細胞向成骨細胞分化。Fukaya等［28］發(fā)現(xiàn)PRP能抑制高度成脂分化的前脂肪細胞的凋亡，其分子途徑是降低DAPK1水平和BIM mRNA的表達；他們認為PRP能通過增強移植物中的前脂肪細胞的抗凋亡活性從而提高移植脂肪的存活率。Cervelli等［24］研究PRP對脂肪來源干細胞的作用發(fā)現(xiàn)，單獨應用PRP不能促進人脂肪來源干細胞的成脂分化，但當添加胰島素后，PRP通過FGFR-1和Erb2調控的Akt途徑，明顯增強人脂肪來源干細胞的成脂分化潛能。

5.4 PRP中生長因子的作用

PRP含有多種生理性的生長因子。成脂分化過程受多種激素和生長因子的調控［29］。IGF能通過上調PPAR配體的作用促進前脂肪細胞（3T3L1細胞株）的成脂分化。據(jù)報道，TGF-β1能抑制骨髓來源間質干細胞的成脂分化；EGF和PDGF能激活EGF和PDGF受體，通過MAP激酶信號傳導通路降低PPARr1的轉錄，從而抑制3T3L1前細胞的成脂分化。但當將PDGF成脂誘導培養(yǎng)基中時，PDGF能顯著提高前脂肪細胞的成脂分化能力，可能是由于提高了CCAAT增強子結合蛋白的表達［30］。此外，Stagier等發(fā)現(xiàn)，當不再在成脂誘導培養(yǎng)基中添加PDGF后，不僅發(fā)現(xiàn)3T3L1前細胞的成脂分化率下降，還發(fā)現(xiàn)3T3L1前細胞的凋亡增加。Craft等［31］研究發(fā)現(xiàn)微球緩釋的PDGF能促進移植脂肪的存活。綜上所述，除IGF外，PRP所含的單一的生長因子均抑制前脂肪細胞的成脂分化；PDGF對成脂分化的作用結論不一致。

雖然PRP中的大多數(shù)生長因子抑制成脂分化，但這些生長因子大都能促進血管生成。Rophael等［32］發(fā)現(xiàn)促血管生成生長因子VEGF、FGF、PDGF-BB的混合物，與單一的促血管生成生長因子相比，不僅能促進移植脂肪的早期血管生成，而且能促進脂肪細胞新生。因此，PRP的促血管生成作用不僅能提高成熟脂肪細胞的早期存活，可能還能促進脂肪細胞再生。

6　PRP應用于脂肪移植的臨床前期實驗研究

目前，已有多項探索PRP對移植脂肪存活作用的動物實驗研究（見表2），但研究結果不一致，且因移植脂肪來源、移植脂肪獲取方法、PRP的制備、與脂肪組織混合的比例、PRP激活方法以及受區(qū)各異等，研究結果不具有可比性。Por等［33］將PRP與人吸脂得到的顆粒脂肪組織以1:4混合后，移植到裸鼠的頭皮下，4個月后，觀察PRP組與對照組（生理鹽水組）在脂肪移植物存活率、新生血管、囊腫形成、纖維化程度、壞死程度或炎癥反應程度上均無顯著差異。但分析這一陰性結果的產(chǎn)生可能是由于在實驗中未添加激活劑（凝血酶或氯化鈣）激活PRP。Pires Fraga等［34］使用兔模型研究PRP對移植脂肪存活的作用，獲取兔背部肩胛下的皮下脂肪，PRP經(jīng)氯化鈣和凝血酶激活后，脂肪組織與PRP等體積混合，移植到兔耳部皮下；結果顯示PRP組存活脂肪細胞數(shù)和新生血管數(shù)較對照組（生理鹽水組）明顯增加，而壞死和炎癥反應面積比較小。Rodriguez-Flores等［35］通過抽脂得到兔的腹股溝顆粒脂肪組織，與經(jīng)氯化鈣激活后的PRP等體積混合后移植于兔唇部；移植后4個月觀察結果顯示，PRP組與對照組相比，新生血管和成活脂肪細胞的數(shù)量無明顯差異，但炎癥反應程度和囊腫形成低于對照組。Nakamura等［22］將大鼠的腹股溝脂肪與經(jīng)氯化鈣激活后的PRP按4:1混合后，移植后大鼠背部皮下結果顯示：在術后10d，PRP組與對照組在組織學上無明顯差異；但在術后20d，對照組的存活脂肪細胞面積較??；而且在移植后至少120d內，PRP組的肉芽組織和毛細血管形成、脂肪細胞存活優(yōu)于對照組。Oh等［33］將人吸脂得到的顆粒脂肪組織與激活（凝血酶和氯化鈣）后的PRP按7：2混合后，移植后裸鼠的頭部皮下；結果顯示：移植后10周，PRP組移植物的體積和重量較對照組大；對組織學觀察指標量化評分比較，發(fā)現(xiàn)PRP組的囊腫形成和纖維化程度低于對照組，但脂肪組織完整性和炎癥反應程度無明顯差異。綜合上文，激活的PRP應用于脂肪移植，能提高脂肪細胞的存活和促進血管新生，PRP還能減輕炎癥反應程度和減少囊腫形成。

表2　PRP對脂肪移植作用的動物實驗研究

7　PRP應用于脂肪移植的臨床研究

PRP應用于脂肪移植的臨床研究的報道不多。Salgarello等［36］在早期研究中將自體脂肪組織與PRP按9:1混合移植用于乳房重建；采用單次離心法（3500rpm，5min）制備PRP，加入氯化鈣激活。整形外科醫(yī)師對手術的臨床效果評分，乳房超聲和X線攝影檢查評估脂肪壞死。結果顯示，PRP組與對照組（生理鹽水組）在手術效果評分上無明顯差異，在出現(xiàn)脂肪壞死的病例所占的比例上無明顯差異。100個病例被分成兩組：PRP混合脂肪移植組，單純脂肪移植組；病因有先天性單側乳房發(fā)育不良，乳腺癌后乳房重建和假體取出后乳房重建。采用梯度離心制備PRP，1100g離心10min；加入Ca2+激活PRP。術后1年，PRP混合脂肪移植組的體積維持率為69%，而單純脂肪移植組只有39%。此外，Gentile等［37］報道添加PRP輔助脂肪移植與添加SVF輔助脂肪移植的體積維持率（69%vs 63%）相似。Cervelli等［38］進一步研究發(fā)現(xiàn)40%體積比的PRP是最佳的混合比例，能促進移植脂肪的體積維持達50周。他們還發(fā)現(xiàn)對40%PRP/脂肪混合移植后的第7d和第15d于移植處局部注射胰島素，移植后12周觀察到注射胰島素組的移植脂肪組織的體積維持率高于對照組。前兩組臨床研究主要通過主觀評估對移植效果評分，指標有：①出現(xiàn)不對稱，畸形和不規(guī)則；②術區(qū)的效果；③一個或多個區(qū)域的脂肪吸收率；④移植脂肪組織維持的時間；⑤是否需要再次治療。雖然他們聲明有對術前和術后照片進行客觀對比，但事實上他們的比較方法仍采用的是主觀評分。目前有許多測量移植物三維體積變化的量化工具或軟件，如CT、MRI和3D-MD三維圖像分析軟件［39］，這樣得到的結果更客觀、具有可重復性、易操作性。

8　富血小板血漿纖維蛋白（PRF）及其對脂肪移植物的作用

富血小板血漿纖維蛋白（Platelet rich fibrin，PRF）被認為是第二代PRP，首次由Choukroun報道，主要應用于口腔頜面外科［40-42］。富血小板血漿纖維蛋白制備很簡單：抽取10ml靜脈血裝入離心管中，不需要抗凝，然后立即離心，3000rpm離心10min。全血在與管壁接觸后立即觸發(fā)凝血反應，纖維蛋白原在凝血酶的作用下轉化為纖維蛋白并凝聚。離心后，紅細胞沉積在最下層，纖維蛋白凝塊在中間層，最上層為血漿。纖維蛋白凝塊中含有大量血小板，血小板被激活釋放生長因子，這些生長因子也被包埋在纖維蛋白凝塊內。PRF的制備不需要添加抗凝劑或凝血酶等激活劑，但抽血后立即離心是制備PRF的關鍵。多個研究證實，不同于PRP在1d天內快速釋放大量生長因子，PRF能持續(xù)28d緩慢釋放PDGF和TGF。原因可能是PRF在離心的過程中逐漸、緩慢凝聚形成三維立體結構，將血小板釋放的生長因子包埋在纖維蛋白聚體內［43］。而PRP經(jīng)凝血酶激活，纖維蛋白迅速凝集并收縮、析出血清，血小板釋放的生長因子大量流失到血清中。

由于PRF能夠持續(xù)、緩慢地釋放生長因子［44］，有學者開始對比研究PRF對脂肪移植物的作用是否優(yōu)于PRP。Liu等［26］對自體PRF或SVF對移植脂肪存活的作用進行研究，將兔的顆粒脂肪組織與PRF、SVF或PRF及SVF混合移植到兔的耳部，4周后觀察到，PRF+SVF+組的微血管密度和存活脂肪組織面積高于其他組，PRF組與SVF組的微血管密度和存活脂肪細胞面積無明顯差異，但均高于單純脂肪移植的對照組。移植后24周觀察到，單純脂肪移植組的移植脂肪吸收率最高，其次是PRF組、SVF組，吸收率最低的是PRF+SVF+組。這項研究表明，PRF和SVF都能促進移植脂肪的存活，且PRF和SVF具有協(xié)同作用。Keyban等［45］對比研究了PRP和PRF在面部脂肪移植中的作用，以吸收率（對比術前術后照片）、疼痛、水腫和瘀青等指標評價效果。結果顯示PRF在面部脂肪移植中的作用優(yōu)于PRP。

9　展望

綜上所述，在大多數(shù)小動物和臨床研究中，激活的PRP能促進移植脂肪的存活。臨床前期研究表明PRP可能通過促進血管新生、血運重建，提高移植脂肪的存活。然而在應用于臨床前，仍需要在大型動物上實驗的結果。大鼠和兔并不是理想的脂肪移植動物模型，因為這些動物的皮下脂肪較少，不能像臨床上一樣通過脂肪抽脂能獲得顆粒脂肪，也不可能實現(xiàn)多層次注射移植脂肪組織。

PRP與移植脂肪混合的比例仍需要在臨床應用中進一步探索。目前研究報道的比例有1:1，1:4，1:9等。在大體積脂肪移植，如脂肪移植乳房重建中，需要的PRP量較大，即使使用血細胞分離設備制備PRP、并將紅細胞血漿回輸，由于外周循環(huán)中血小板的大量丟失，可能導致凝血功能異常。

由于能持續(xù)、緩慢地釋放生長因子，PRF的作用優(yōu)于PRP。Kurita等［46］將PRP浸入可降解的明膠凝膠中，發(fā)現(xiàn)其促進大鼠缺血下肢血管再生的作用優(yōu)于PRP。Sell等［47］將PRP與蠶絲蛋白、聚乙醇酸或聚己內酯的電紡支架結合，發(fā)現(xiàn)其在35d內能持續(xù)釋放生長因子。PRP-電紡支架能促進脂肪來源干細胞（ADSCs）的增殖和巨噬細胞的趨化。因此，未來可以進一步研究緩釋PRP對移植脂肪的作用。此外，PRP與ADSCs或SVF在促進移植脂肪存活方面是否具有協(xié)同作用，也可作為進一步的研究方向。目前的臨床研究都是病例對照研究，未來需要雙盲的、隨機對照研究來提高循證醫(yī)學證據(jù)的等級。

10　小結

目前，大多數(shù)小動物實驗和臨床研究結果證實，PRP能提高移植脂肪組織的體積維持率，當生長因子持續(xù)、緩慢時，作用效果更佳。但仍需確定標準的PRP制備和激活方法。建議采用客觀的測量方法取代主觀評分來評估效果，如：CT、MRI和3D-MD三維圖像分析軟件等。此外，在應用于臨床前，仍需要關于PRP對移植脂肪作用的分子機制作進一步研究，仍需要大型動物實驗和隨機對照臨床研究的結果來支持和指導臨床應用。

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編輯/李陽利

Literature review of the application of platelet-rich plasm

吳毅平，教授、華中科技大學附屬同濟醫(yī)院整形美容外科主任；E-mail：us_ypwu@gmail.com

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2015-04-10

2015-05-06