連翹薄層鑒別方法的改進(jìn)△

周歡，王小平，白吉慶

(陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046)

·基礎(chǔ)研究·

連翹薄層鑒別方法的改進(jìn)△

周歡，王小平，白吉慶*

(陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046)

目的：對(duì)連翹薄層色譜鑒別的展開系統(tǒng)進(jìn)行改進(jìn)。方法：改進(jìn)了原標(biāo)準(zhǔn)的展開系統(tǒng)，增加了蘆丁、槲皮素的鑒別。采用硅膠G板，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(8∶1∶0.5)為展開劑，置紫外光燈(365 nm)下，檢視連翹酯苷A和槲皮素；再噴10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰，檢視連翹苷和蘆丁。結(jié)果：供試品色譜中，連翹酯苷A、槲皮素、連翹苷和蘆丁的斑點(diǎn)清晰，重復(fù)性好。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)單，用毒性較小的二氯甲烷替代了原標(biāo)準(zhǔn)中的三氯甲烷，綠色環(huán)保，同時(shí)還可以鑒別連翹中的蘆丁、槲皮素，可替代原標(biāo)準(zhǔn)用于連翹的鑒別。

連翹；薄層鑒別；連翹苷；蘆??；連翹酯苷A；槲皮素

連翹為木犀科植物連翹Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實(shí)。秋季果實(shí)初熟尚帶綠色時(shí)采收，除去雜質(zhì)后蒸熟、曬干，習(xí)稱“青翹”。其具有清熱解毒，消腫散結(jié)，疏散風(fēng)熱之功能，可用于治療乳癰、丹毒、風(fēng)熱感冒、瘟病初起，癰疽，瘰疬，高熱煩渴，神昏發(fā)斑，熱淋澀痛[1]。連翹主產(chǎn)于山西、陜西、河南等地。青翹中富含苯乙醇苷類、木質(zhì)素及其苷類、黃酮類、萜類、生物堿、揮發(fā)油等化合物[2-8]，現(xiàn)代臨床上多用于治療呼吸道感染，急性腎炎、肝炎、腦膜炎等疾病。現(xiàn)代藥理研究表明，連翹具有抗菌、抗炎、抗病毒、保肝解熱等作用[3-4，7-8]。2010版《中華人民共和國(guó)藥典》中連翹的薄層色譜鑒別只鑒別了連翹苷，改進(jìn)方法中新增蘆丁、連翹酯苷A、槲皮素對(duì)照品，使方法更科學(xué)、更完整。同時(shí)原標(biāo)準(zhǔn)中展開劑使用了毒性較大的三氯甲烷，其有潛在的致癌性[9]，因此，本試驗(yàn)對(duì)展開系統(tǒng)進(jìn)行了改進(jìn)，以減少對(duì)人體的危害及環(huán)境的污染。通過(guò)研究，建立了一種較為理想的薄層鑒別展開系統(tǒng)。供試品色譜中所鑒別的成分斑點(diǎn)清晰，分離度好，重復(fù)性好。該方法可以替代原標(biāo)準(zhǔn)用于連翹的鑒別。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

JM-B20002電子天平(諸暨市超澤衡器設(shè)備有限公司，d=0.01 g)；BT 125D電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司，d=0.1 mg，0.01 mg]；200 g多功能粉碎機(jī)(上海樹立儀表有限公司)；101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱(科偉)；KQ300VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；ZF-90多功能暗箱式紫外透射儀(上海寶山顧村電光儀器廠)；

1.2 試藥

連翹苷對(duì)照品、蘆丁對(duì)照品、連翹酯苷A對(duì)照品、槲皮素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為110821-200711，080-9705，111810-201103，100081-200907)；二氯甲烷、三氯甲烷、甲酸、甲醇、石油醚、乙酸乙酯等試劑均為分析純。連翹藥材經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院白吉慶副教授鑒定為木犀科植物連翹的果實(shí)，產(chǎn)地為陜西商洛、河南三門峽、湖北鄖縣、河北井陘縣。

2 方法和結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 供試品溶液的制備 取本品粉末1 g，加石油醚(30～60 ℃)20 mL，密塞，超聲處理15 min，濾過(guò)，棄去石油醚液，殘?jiān)鼡]干石油醚；加甲醇20 mL，密塞，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使其溶解，作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照溶液的制備 精密稱取連翹苷對(duì)照品1.61 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得連翹苷對(duì)照品溶液；精密稱取蘆丁對(duì)照品1.01 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得蘆丁對(duì)照品溶液；精密稱取連翹酯苷A對(duì)照品1.58 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得連翹酯苷A對(duì)照品溶液；精密稱取槲皮素對(duì)照品1.02 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得槲皮素對(duì)照品溶液。

2.2 結(jié)果

2.2.1 改進(jìn)方法 照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)[8]，吸取上述4種對(duì)照品溶液各2 μL和供試品溶液4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(8∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干。置于紫外光燈(365 nm)下檢視連翹酯苷A和槲皮素，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，結(jié)果見圖1。再噴10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰，檢視連翹苷和蘆丁，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，結(jié)果見圖2。

注：1.陜西產(chǎn)連翹；2.連翹酯苷A對(duì)照品；3.河南產(chǎn)連翹；4.槲皮素對(duì)照品；5.湖北產(chǎn)連翹。圖1 連翹的薄層色譜法鑒別(改進(jìn)方法)

注：1.陜西產(chǎn)連翹；2.連翹苷對(duì)照品；3.河南產(chǎn)連翹；4.蘆丁對(duì)照品；5.湖北產(chǎn)連翹；6.河北產(chǎn)連翹。圖2 連翹的薄層色譜法鑒別(改進(jìn)方法)

2.2.2 原方法 照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)[8]，吸取上述連翹苷對(duì)照品溶液和供試品溶液各3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，結(jié)果見圖3。

注：1.陜西產(chǎn)連翹；2.連翹苷對(duì)照品；3.河南產(chǎn)連翹；4.河北產(chǎn)連翹；5.湖北產(chǎn)連翹。圖3 連翹的薄層色譜法鑒別(藥典方法)

3 討論

溫度和濕度是薄層色譜鑒別的影響因素。本試驗(yàn)對(duì)展開環(huán)境的溫度進(jìn)行考察，結(jié)果在15～25 ℃，供試品色譜中主要斑點(diǎn)的分離度較好；同時(shí)對(duì)展開環(huán)境的相對(duì)濕度進(jìn)行考察，分別考察了相對(duì)濕度為20%、30%、60%、75%，結(jié)果在20%～60%，供試品色譜中主要斑點(diǎn)的分離度較好。對(duì)改進(jìn)后的方法進(jìn)行了穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)，穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，樣品在8 h內(nèi)進(jìn)行薄層鑒別，供試品色譜中主要斑點(diǎn)的分離度較好；重復(fù)性試驗(yàn)表明，改進(jìn)后的方法重復(fù)性良好。

2010版《中華人民共和國(guó)藥典》中連翹的薄層鑒別只鑒別了連翹苷，本試驗(yàn)對(duì)連翹的展開系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化，最終以二氯甲烷-甲醇-甲酸(8∶1∶0.5)為展開劑，對(duì)連翹進(jìn)行鑒別。該鑒別方法在鑒別連翹苷的同時(shí)，還增加了連翹酯苷A、蘆丁、槲皮素的鑒別，使連翹的鑒別更加完整。本次試驗(yàn)所建立的方法簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可為修訂該藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

原標(biāo)準(zhǔn)中連翹薄層鑒別的展開系統(tǒng)中使用三氯甲烷為主要展開劑，該試劑毒性較大，而本試驗(yàn)用毒性較小的二氯甲烷代替三氯甲烷。改進(jìn)后的展開系統(tǒng)不僅不會(huì)影響連翹中的連翹苷的鑒別，還能對(duì)連翹中的連翹酯苷A、蘆丁、槲皮素進(jìn)行鑒別，而且還減少了對(duì)人體的危害及環(huán)境的污染。

本試驗(yàn)所建立的方法不僅使連翹的鑒別更加科學(xué)、完整，而且還降低了展開系統(tǒng)對(duì)環(huán)境的污染及人體的傷害，可替代原標(biāo)準(zhǔn)用于連翹的鑒別。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：159-160.

[2] 白吉慶，王小平，曹林林.不同采收期青翹中4種活性成分的含量分析[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2012，40(7)：193-198.

[3] 付云飛，李清，畢開順.RP-HPLC 法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地連翹中的7種成分[J].中草藥，2013，44(8)：1043-1046.

[4] 胡靜，馬琳，張堅(jiān).連翹的研究進(jìn)展[J].中南藥學(xué)，2012，10(10)：760-764.

[5] 雷秋香，單彪，胡小倩.連翹藥理學(xué)作用研究進(jìn)展[J].河北醫(yī)藥，2012，34(24)：3802-3804.

[6] 雷建林，李艷桃，聶會(huì)生.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地連翹藥材中連翹苷的含量[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30(1)：202-204.

[7] 葉良紅.連翹有效成分的提取工藝和藥代動(dòng)力學(xué)研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2013.

[8] 許佳.青翅的質(zhì)量標(biāo)合理采收期初步研究[D].太原：山西大學(xué)，2013.

[9] 王海蘭.三氯甲烷的職業(yè)危害與防護(hù)[J].現(xiàn)代職業(yè)安全，2014，153(5)：110-112.

ImprovementofTLCIdentificationMethodforFructusForsythiae

ZHOUHuan，WANGXiaoping，BAIJiqing*

(ShaanxiUniversityofTCM，Xianyang712046，Shaanxi，China)

Objective：To improve the TLC identification method for Fructus Forsythiae.Methods：TLC developing system of the original quality standard was improved，and rutin and quercetin were added for identification.Using silica gel G thin layer plate，the sample，forsythoside A，rutin and quercetin were developed with dichloromethane-methanol-formic acid(8∶1∶0.5).Forsythoside A and quercetin were detected under the uv lamp(365 nm)，thereafter the TLC plate was sprayed with 10% ethanol solution of sulfuric acid，and heated at 105 ℃ to examine forsythoside A and rutin.Result：In the chromatogram，the spots of forsythoside A，rutin and quercetin.The method was repeatable.Conclusion：The method is simple and environment friendly，could replace the original standard to identify Fructus Forsythiae.

Fructus Forsythiae；thin layer identification；forsythia glycosides；rutin；forsythia ester glycosides A；quercetin

2015-01-28)

國(guó)家工業(yè)和信息化部中藥材扶持項(xiàng)目(工信部消費(fèi)[2012]369號(hào))；陜西省科技攻關(guān)中藥現(xiàn)代化項(xiàng)目(2014K14-01-01)

*

白吉慶，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥資源開發(fā)與利用研究；Tel：(029)38184880，E-mali:baijiqing323@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.010