間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)的CD8α+Jagged2highCD11bhigh調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞防治小鼠aGVHD*

童嘉琦，吳萍，黃欣，賴沛龍，耿素霞，翁建宇，杜欣△(南方醫(yī)科大學(xué)，廣東廣州5055;廣東省人民醫(yī)院血液科，廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，廣東廣州50080)

間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)的CD8α+Jagged2highCD11bhigh調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞防治小鼠aGVHD*

童嘉琦1，2，吳萍1，2，黃欣2，賴沛龍2，耿素霞2，翁建宇2，杜欣2△
(1南方醫(yī)科大學(xué)，廣東廣州510515;2廣東省人民醫(yī)院血液科，廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，廣東廣州510080)

目的:觀察間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)的CD8α+Jagged2highCD11bhigh調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞(MSC-DCregs)，對小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影響。方法:體外誘導(dǎo)MSC-DCregs。以C57BL/6(H-2b)小鼠為供鼠、接受清髓性全身照射(TBI)預(yù)處理的BALB/c(H-2d)小鼠為受鼠進(jìn)行移植。分為以下5組:為正常對照組;TBI組;移植組:移植物為1×107骨髓細(xì)胞(BMCs);aGVHD組:移植物為1×107BMCs+1×107脾細(xì)胞(SpCs);MSC-DCregs組:移植物為1×107BMCs+1×107SpCs+1×106MSC-DCregs。監(jiān)測植入情況、H2-Kb嵌合率、aGVHD評分、生存和病理學(xué)改變。結(jié)果:處理1 0 d后所有小鼠造血恢復(fù)，30 d后嵌合率檢測轉(zhuǎn)為供鼠型。aGVHD組和MSC-DCregs組中位生存期分別為27 d和33 d，MSC-DCregs組生存期較aGVHD組延長(P＜0.01)，臨床評分比aGVHD組低(P＜0.01)，33 d的皮膚、肝臟病理學(xué)改變均優(yōu)于aGVHD組。結(jié)論:MSC-DCregs具有防治aGVHD的作用，其相關(guān)作用機(jī)理待進(jìn)一步研究。

間充質(zhì)干細(xì)胞;調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞;急性移植物抗宿主病

［ABSTRACT］AIM:To investigate the role ofmesenchymal stem cell-induced regulatory dendritic cells(MSCDCregs)in mouse acute graft-versus-host disease(aGVHD)model.METHODS:Bonemarrow cells from BALB/c(H-2d)mice were isolated and were induced to differentiate into DCs.The DCswere selected by flow cytometry，and after 10 d co-culture with MSCs，they were induced to be MSC-DCregs.Male 8-week-old C57BL/6(H-2b)mice were used as donormice.The female 8-week-old BALB/c(H-2d)mice，who had received 100 cm source-skin distance，30 cm×30 cm radiation field，700 cGy total body irradiation(TBI)pretreatmentwere used as recipientmice.The recipientswere divided into 5 groups:control group，TBIgroup(injected withmedium only)，bonemarrow transplantation group(injected with 1 ×107bonemarrow cells)，aGVHD group(injected with 1×107bonemarrow cells and 1×107spleen cells)，and MSCDCregs group(injected with 1×107bonemarrow cells，1×107spleen cells and 1×106MSC-DCregs).The white blood cell count，recipients’chimerism，clinical evaluation of aGVHD，survival analysis and pathological changes were determined.RESULTS:Hematopoieic recovery was seen at10 d after transplantation.The recipients’chimerism was parallel to the donors’at30 d.Themedian survival time of themice in aGVHD group and MSC-DCregs group was 27 d and 33 d，and the survival rates at 30 d were 20%and 100%(P＜0.01)，respectively.The clinical scores of themice in MSCDCregs group were lower than those in aGVHD group(P＜0.01).Moreover，the pathological changes in the skin and liver of themice in MSC-DCregs group were less serious than those in aGVHD group.CONCLUSION:The MSC-DCregs induce an aGVHD tolerance in vivo，and further research of itsmechanism is still in great necessary.

［KEY WORDS］Mesenchymal stem cells;Regulatory dentritic cells;Acute graft-versus-host disease

急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease，aGVHD)是異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，Allo-HSCT)后的常見并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者生存時間和生活質(zhì)量。

在aGVHD的進(jìn)展中，抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)處于啟動、維持和調(diào)控特異性免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)是抗原提呈和激活初始T細(xì)胞能力最強(qiáng)的APC。調(diào)節(jié)性DCs(regulatory DCs，DCregs)是一類未成熟DCs，能分泌白細(xì)胞介素-10等抑制因子誘導(dǎo)免疫耐受［1］。近年來，文獻(xiàn)報道Notch信號通路決定和調(diào)控DCs的分化［2-4］。Jagged2是Notch配體，Jagged 2高表達(dá)的DCregs能在體內(nèi)增殖并維持特異性免疫耐受［2］。

間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)參與調(diào)節(jié)DCs的發(fā)生和成熟［5］。將MSCs與DCs共培養(yǎng)，產(chǎn)生間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞(mesenchymal stem cell-induced regulatory dendritic cells，MSC-DCregs)，既能促使T細(xì)胞對特異性抗原耐受;還可以在小鼠體內(nèi)保留增殖能力和對非特異性有絲分裂原產(chǎn)生免疫反應(yīng)的能力，提示其可能保留了對腫瘤和微生物產(chǎn)生免疫反應(yīng)的能力［2］。我們的前期研究已成功誘導(dǎo)出CD8α+Jagged2highCD11bhighDCregs［6］。本研究擬通過體外誘導(dǎo)MSCDCregs，觀察MSC-DCregs對aGVHD的影響，旨在探索aGVHD的新治療模式。

材料和方法

1材料

供鼠為8周齡雄性C57BL/6小鼠(H-2b)，受鼠為8周齡雌性BALB/c小鼠(H-2d)，SPF級，均購于中山大學(xué)實驗動物中心。BALB/c小鼠MSCs購自Cyagen Biosciences。重組小鼠粒-單核集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF)、白細(xì)胞介素4(interleukin 4，IL-4)、干細(xì)胞因子(stem cell factor，SCF)、Fms樣酪氨酸激酶3配體(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand，F(xiàn)lt3L)購于PeproTech。培養(yǎng)基(DMEM-LG、DMEM-HG和RPMI-1640)、胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)及青、鏈霉素購自Gibco。FACS Calibur流式細(xì)胞儀為Becton Dickinson產(chǎn)品。流式檢測抗體:PE標(biāo)記的小鼠單克隆抗體CD11c和Jagged2、APC-CY7標(biāo)記的小鼠單克隆抗體CD8α、FITC標(biāo)記的小鼠單克隆抗體CD11b、Percp-eF710標(biāo)記的H2-Kb及同型對照(rat IgG2α PE/κAPC-CY7 isotype control和rat IgG2bκFITC isotype control)抗體均購自eBioscience。

2移植前準(zhǔn)備

2.1受鼠準(zhǔn)備移植前7 d飲用含抗生素(紅霉素250 mg/L，慶大霉素3.2×105U/L)的滅菌水進(jìn)行腸道準(zhǔn)備，并維持至移植后14 d。

2.2制備骨髓細(xì)胞(bonemarrow cells，BMCs)無菌分離C57BL/6供鼠股骨和脛骨，RPMI-1640培養(yǎng)基沖洗出骨髓，懸液通過4號針頭制成單細(xì)胞懸液，裂解紅細(xì)胞5 min，RPMI-1640培養(yǎng)基洗滌3次并重懸(250×g離心5 min)，計數(shù)后調(diào)整細(xì)胞濃度。

2.3制備脾細(xì)胞(spleen cells，SpCs)無菌分離C57BL/6供鼠脾臟，RPMI-1640培養(yǎng)基沖洗3次，在200目不銹鋼篩網(wǎng)中用2 mL玻璃注射器內(nèi)芯輕輕碾磨過濾，濾液通過4號針頭制成單細(xì)胞懸液，裂解紅細(xì)胞5 min，RPMI-1640培養(yǎng)基洗滌3次并重懸(250×g離心5 min)，計數(shù)后調(diào)整細(xì)胞濃度。

2.4制備MSC-DCregs參照前期研究方法進(jìn)行［6］。

3移植

將BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組，除正常對照組外的其它小鼠接受100 cm源皮距，30 cm×30 cm照射野，700 cGy，698跳，單次全身照射(total body irradiation，TBI)預(yù)處理。照射后立即補(bǔ)充飲水，休息4 h。根據(jù)分組情況，分別經(jīng)尾靜脈輸注終體積為0.4 mL的RPMI-1640培養(yǎng)基或細(xì)胞懸液。正常對照(control)組(同步飼養(yǎng)，無干預(yù));TBI組(TBI后輸注RPMI-1640培養(yǎng)基);移植組(TBI后輸注1×107BMCs);aGVHD組(TBI后輸注1×107BMCs、1×107SpCs);MSC-DCregs組(TBI后輸注1×107BMCs、1×107SpCs和1×106CD8α+Jagged2highCD11bhighDCregs)。

4移植后監(jiān)測

4.1造血恢復(fù)監(jiān)測每組取2只小鼠于移植后7 d、10 d和14 d時計數(shù)外周血白細(xì)胞數(shù)。方法:斷尾取血10μL，加入190μL白細(xì)胞稀釋液中混勻，改良Neubauer計數(shù)板充池，靜置1 min后觀察。

4.2嵌合率檢測制備移植后30 d存活小鼠的骨髓單細(xì)胞懸液，調(diào)整有核細(xì)胞濃度至2×1010cells/L。每100μL懸液加入2.5μL PerCP-eFluor?710 H2-Kb Antibody，混勻，4℃避光孵育30 min。裂解紅細(xì)胞，用PBS洗滌2次(400×g離心5 min)并重懸，流式細(xì)胞術(shù)檢測至少30 000個細(xì)胞，計算H2-Kb+細(xì)胞的百分比。

4.3aGVHD臨床評價觀察受鼠移植后飲食及活動情況，注意有無倦怠、體重下降、弓背、翹毛、脫毛、皮膚潰瘍、腹瀉或肛門有排泄物等表現(xiàn)。移植后7 d開始稱重，每3 d進(jìn)行aGVHD臨床評分(評分標(biāo)準(zhǔn)見表1)。

表1　小鼠aGVHD臨床評分標(biāo)準(zhǔn)Table 1.Standard clinical evaluation of aGVHDmice

4.4組織病理學(xué)檢查10%甲醛溶液固定小鼠的心、肝、脾、肺、腎、大腸、小腸和皮膚24 h。組織脫水，過程如下:80%乙醇50 min，90%乙醇50 min，95%乙醇80 min，100%乙醇80 min，二甲苯90 min，低熔點石蠟75 min(62℃)，高熔點石蠟25 min(64℃)。包埋蠟塊(62℃)后切片(50～57℃)，將片置于玻片上，70℃干燥20min。室溫冷卻，HE染色:二甲苯21 min，100%乙醇2 min、95%乙醇2 min、80%乙醇1 min、蒸餾水1 min，蘇木精染液15 min，流水沖洗1 min，0.5%鹽酸乙醇10 s，2%碳酸鋰水溶液1 min，流水沖洗10min，80%乙醇1 min、95%乙醇2 min，80%乙醇1min，100%乙醇3min，二甲苯2min。封片。顯微鏡下觀察。

4.5生存情況記錄小鼠生存時間，繪制Kaplan-Meier生存曲線，觀察終點為第60天。

5轉(zhuǎn)歸判斷

5.1造血重建WBC≥1×109/L。

5.2造血功能衰竭瀕死時WBC＜1×109/L。

5.3aGVHD出現(xiàn)弓背、脫毛、皮膚潰瘍、腹瀉或肛門有排泄物、倦怠、體重下降等臨床表現(xiàn)，WBC≥1× 109/L，皮膚、肝臟等器官的組織病理學(xué)檢查存在aGVHD病理改變。

5.4移植相關(guān)死亡除aGVHD和造血衰竭之外原因?qū)е碌乃劳?，包括感染、出血和器官功能衰竭等原因，小鼠死亡前WBC≥1×109/L，但無aGVHD臨床表現(xiàn)和病理改變。

6統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)資料收集與統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 13.0分析軟件。正態(tài)分布樣本數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，非正態(tài)分布樣本數(shù)據(jù)以中位數(shù)表示，采用log-rank檢驗分析小鼠生存情況差異。不同時點連續(xù)測量的樣本采用重復(fù)測量設(shè)計的方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1造血重建監(jiān)測

移植后第10天各組小鼠造血均恢復(fù)，細(xì)胞計數(shù)均大于1×109。第30天存活小鼠嵌合體分析全部轉(zhuǎn)為供鼠型，見圖1。

Figure 1.Flow cytometry analysis of the anti-mouse H2-Kb monoclonal antibody expression in peripheral blood before and after the transplantation.A:antibody expression in BALB/c mice before the transplantation;B:antibody expression in C57BL/6 mice;C:antibody expression in BALB/c mice of the aGVHD group on the 30th day after transplantation;D:antibody expression in BALB/c mice of the MSC-DCregs group on the 30th day after transplantation.圖1　流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠移植前后外周血抗小鼠H2-Kb單克隆抗體的表達(dá)

2生存時間

TBI組小鼠照射后全部死于造血功能衰竭，中位存活12.5 d;aGVHD組和MSC-DCregs組中位存活時間為27 d和33 d，且log-rank檢驗顯示2組小鼠的生存時間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，(P＜0.01)，見圖2。

Figure 2.The survival of mice in aGVHD group and MSCDCregs group(n=5).圖2　aGVHD組和MSC-DCregs組生存曲線圖

3臨床表現(xiàn)

移植組小鼠觀察至第60天無aGVHD表現(xiàn)。aGVHD組小鼠表現(xiàn)為倦怠、豎毛、弓背、進(jìn)行性體重減輕、脫毛、反復(fù)皮膚潰瘍、肛周紅腫及分泌物多，見圖3;MSC-DCregs組上述表現(xiàn)稍輕，出現(xiàn)時間遲于aGVHD組。aGVHD評分具體見表2，行重復(fù)測量設(shè)計的方差分析發(fā)現(xiàn):MSC-DCregs組(表中簡稱為DCregs組)臨床評分低于aGVHD組(F=15.018，P＜0.01)，即MSC-DCregs對aGVHD表現(xiàn)出一定的防治作用(P＜0.05)。結(jié)果提示:時間效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義(F=59.004，P＜0.01)，說明aGVHD評分隨時間變化而增高;時間與處理交互效應(yīng)無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.939，P＜0.05)，說明在aGVHD組和MSCDregs組中，aGVHD評分隨時間變化的趨勢相同;2組間的aGVHD評分，MSC-Dregs比aGVHD組低(P＜0.01)，即MSC-Dregs對aGVHD有防治作用，見圖4。

Figure 3.Clinical features of aGVHDmice.A:mice arched their back;B:hairless，costive and weak mice;C:mice with inflamed anuses and increased crissal secretions;D～F:hairlessmice with skin ulcers.圖3　小鼠aGVHD臨床表現(xiàn)

表2　各組在不同時點的aGVHD評分Table 2.The clinical aGVHD scores at different time points(Mean±SD.n=5)

4主要組織病理學(xué)改變

本模型主要表現(xiàn)為皮膚和肝臟aGVHD。皮膚: BMT組皮膚的主要病理學(xué)表現(xiàn)為表皮變薄，皮脂腺發(fā)育不良，皮下脂肪少;aGVHD組皮膚表現(xiàn)為表皮增厚，皮膚附屬器缺如，皮膚潰瘍、大片壞死組織，壞死組織的真皮層中大量淋巴細(xì)胞浸潤;MSC-DCregs組可發(fā)現(xiàn)皮膚組織表皮變薄，皮脂腺發(fā)育不良，毛發(fā)僅見，淋巴細(xì)胞浸潤少見，未見大片壞死組織。肝臟:BMT組的肝臟組織表現(xiàn)為肝細(xì)胞變性、退變，核大小不一，肝血竇擴(kuò)張;aGVHD組的肝臟組織間質(zhì)大量淋巴細(xì)胞片狀浸潤，肝索排列紊亂;MSC-DCregs組肝臟間質(zhì)中淋巴細(xì)胞散在分布，不成灶，肝中央靜脈擴(kuò)張明顯，肝索縱向正常排列，見圖5。

Figure 4.The clinical aGVHD scores in aGVHD group and MSC-DCregs group at different time points(n=5).圖4　 aGVHD組和MSC-DCregs組不同時點的aGVHD臨床評分

Figure 5.Pathological alterations of different groups on the 33th day after transplantation.圖5　移植后第33天不同組別小鼠的病理學(xué)改變

討論

移植物抗宿主病是異基因造血干細(xì)胞移植后的一個常見而又重要的并發(fā)癥，盡管供體是人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)完全相合的同胞，或者使用免疫抑制劑預(yù)防aGVHD，但aGVHD仍會發(fā)生，并嚴(yán)重影響患者的生存率。目前公認(rèn)的aGVHD進(jìn)程分為3階段。首先，放化療使宿主細(xì)胞損傷，分泌炎癥因子激活A(yù)PC，活化供體T細(xì)胞;其次，APC將處理后的抗原提呈，在共刺激信號的協(xié)同作用下刺激T細(xì)胞增殖，Th1/Th2失衡，NK、NKT、B細(xì)胞等介入;最后，效應(yīng)細(xì)胞攻擊靶器官。DCs是激發(fā)初始T細(xì)胞活化最有效的APC，其功能與成熟程度密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素誘導(dǎo)產(chǎn)生的高表達(dá)IL-12的DCs可以富集調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Tregs)，并通過IFN-γ和IL-12促使供體CD4+T細(xì)胞凋亡，從而減輕aGVHD。因此，DCs的可塑性有望應(yīng)用于防治aGVHD［7］。

MSCs參與調(diào)節(jié)DCs生長周期中的所有環(huán)節(jié)，DCs是MSCs免疫抑制活性的關(guān)鍵靶點［5］。研究表明，經(jīng)MSCs誘導(dǎo)的DCs可以促使初始T細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)門regs［8］。MSCs還可誘導(dǎo)骨髓CD34+細(xì)胞向DCregs轉(zhuǎn)化［9］，從而在誘導(dǎo)外周耐受中發(fā)揮重要作用［2］。近期研究表明，Notch信號通路決定和調(diào)控DCs的分化［2-4］。MSCs通過Jagged1和Jagged2配體抑制DCs的成熟、分化等功能，誘導(dǎo)DCs轉(zhuǎn)化為DCregs，發(fā)揮致免疫耐受作用。Jagged是Notch的配體，主要參與DCs免疫耐受的調(diào)節(jié)。Hoyne等［3］發(fā)現(xiàn)Notch配體Jagged1介導(dǎo)的DCs不僅能誘導(dǎo)抗原特異性的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)，還能特異募集該調(diào)節(jié)性T細(xì)胞到局部淋巴器官發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用。Lin等［10］在給移植后的小鼠輸注高表達(dá)Jagged1的DC和CD40L抗體后發(fā)現(xiàn)移植物的生存時間顯著延長。深入研究表明，受鼠的免疫反應(yīng)得到抑制，異基因反應(yīng)特異性T細(xì)胞的反應(yīng)減弱，TGF-β合成增加，Tregs數(shù)量增多，而這些結(jié)果與Jagged1-Notch信號通路的激活密切相關(guān)。過表達(dá)人類Jagged1的鼠DCs提呈的抗原能誘導(dǎo)外周幼稚的CD4+T細(xì)胞分化為Tregs;Jagged2也可以誘導(dǎo)此反應(yīng)，從而抑制原發(fā)性和獲得性免疫反應(yīng)，并可以將抗原特異性的耐受轉(zhuǎn)移給受體鼠。Zhang等［2］利用MSCs誘導(dǎo)產(chǎn)生高表達(dá)Jagged2的MSC-DCregs，該MSC-DCregs能體外抑制淋巴細(xì)胞的增殖;體內(nèi)環(huán)境下，在保留對非特異性有絲分裂原的免疫反應(yīng)和增殖能力的同時，能抑制遲發(fā)超敏反應(yīng)，誘導(dǎo)T細(xì)胞對特異性抗原免疫耐受。因此，MSCDCregs體內(nèi)抑制aGVHD可能的途徑主要為:(1)激活T細(xì)胞Notch信號通路，抑制T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞產(chǎn)生［2-3，11］;(2)分泌IL-10等抑制因子誘導(dǎo)免疫耐受［1］;(3)高表達(dá)吲哚胺2，3-雙加氧酶誘導(dǎo)CD4+和CD8+細(xì)胞低反應(yīng)性［12］;(4)通過FasL/Fas作用途徑激發(fā)下游多種機(jī)制誘導(dǎo)活化型CD4+T細(xì)胞的凋亡繼而抑制其增殖，在初次免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要的負(fù)調(diào)控功能，從而抑制了aGVHD的發(fā)生［13-14］。

本實驗室的前期研究發(fā)現(xiàn)，在SCF、IL-4、Flt3L和GM-CSF存在的環(huán)境下誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞，可以得到CD8α+CD11bhighDCs。與MSCs共培養(yǎng)后，這群細(xì)胞低表達(dá)表面協(xié)同刺激分子(CD86、CD80和CD40)，低表達(dá)抗原攝取、處理和提呈相關(guān)，誘導(dǎo)抗原特異性T細(xì)胞免疫的CD205+分子，同時表達(dá)MHC-II類分子;高表達(dá)CD11b、Jagged1和Jagged2。上述結(jié)果說明MSCs可通過上調(diào)Notch信號通路Jagged1和Jagged2表達(dá)，誘導(dǎo)DCs向MSC-DCreg轉(zhuǎn)化，但仍保留其轉(zhuǎn)化為免疫應(yīng)答DCs的能力。本研究的結(jié)果顯示:MSC-DCregs可以減輕aGVHD的嚴(yán)重程度，延長小鼠生存時間;組織病理學(xué)顯示MSC-DCregs組淋巴細(xì)胞浸潤較aGVHD組減輕，由此我們推測，MSCDCregs可能抑制淋巴細(xì)胞增殖，阻止淋巴細(xì)胞在靶器官中聚集并攻擊靶器官中組織細(xì)胞，從而誘導(dǎo)免疫耐受。因此，MSCs誘導(dǎo)的高表達(dá)Jagged2和CD11b的MSC-DCregs在小鼠體內(nèi)具有致免疫耐受性，可能成為防治aGVHD的新型細(xì)胞治療工具，但其作用機(jī)制仍需進(jìn)一步的研究。

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M esenchymal stem cell-induced CD8α+Jagged2highCD11bhighregulatory dendritic cells prevent and treatmouse aGVHD

TONG Jia-qi1，2，WU Ping1，2，HUANG Xin2，LAIPei-long2，GENG Su-xia2，WENG Jianyu2，DU Xin2
(1Southern Medical University，Guangzhou 510515，China;2Department of Hematology，Guangdong General Hospital/ Guangdong Academy of Medical Sciences，Guangzhou 510080，China.E-mail:miyadu@hotmail.com)

R392.12

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2015.05.020

1000-4718(2015)05-0882-06

2015-01-20［修回日期］2015-03-03

國家自然科學(xué)基金資助項目(No.30972790;No.81270648;No.81370665;No.81300446);廣東省自然科學(xué)基金資助項目(No.S2012010009560);廣東省科技計劃(No.2013B021800186;No.2013B021800201);廣州市科技計劃(No.201400000003-4;No.201400000003-1)

Tel:020-83827812-62122;E-mail:miyadu@hotmail.com