電針督脈穴對高血壓復合阿爾茨海默病大鼠學習記憶能力及血清一氧化氮和內皮素水平的影響

張立娟，王康鋒，楊傳華

·中醫(yī)·中西醫(yī)結合研究·

電針督脈穴對高血壓復合阿爾茨海默病大鼠學習記憶能力及血清一氧化氮和內皮素水平的影響

張立娟，王康鋒，楊傳華

目的 探討電針督脈穴對高血壓復合阿爾茨海默病（AD）大鼠學習記憶能力及血清一氧化氮（NO）、內皮素（ET）水平的影響。方法 雄性Wistar大鼠采用隨機數(shù)字表法分為假手術組、模型組、西藥組和電針組，每組10只，采用“兩腎一夾”法制備腎性高血壓大鼠動物模型，在此基礎上雙側海馬區(qū)注射Aβ25-35復制AD模型，西藥組給予鹽酸多奈哌齊和卡托普利灌胃，電針組選取百會、大椎進行針刺，共治療8周。治療前后檢測其尾動脈血壓，對各組大鼠進行Morris水迷宮實驗，并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測治療后血清NO、ET水平。結果 造模前4組大鼠血壓比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。造模后，模型組、西藥組、電針組大鼠血壓較假手術組升高（P＜0.05）。治療后，模型組、電針組大鼠血壓較假手術組升高（P＜0.05）；電針組大鼠血壓較模型組降低、較西藥組升高（P＜0.05）。治療后，模型組、西藥組、電針組大鼠4個方向逃避潛伏期較假手術組延長（P＜0.05）；西藥組、電針組大鼠4個方向逃避潛伏期較模型組縮短（P＜0.05）；電針組大鼠東向和北向逃避潛伏期較西藥組縮短（P ＜0.05）。造模后，模型組、西藥組、電針組大鼠跨臺次數(shù)較假手術組減少（P＜0.05）；治療后，模型組、西藥組大鼠跨臺次數(shù)較假手術組和電針組減少（P＜0.05）。治療后，假手術組、西藥組、電針組大鼠NO水平較模型組升高，ET水平較模型組下降（P＜0.05）；假手術組、西藥組、電針組大鼠血清NO、ET水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）。結論 電針督脈穴能降低高血壓復合AD大鼠尾動脈血壓，改善AD大鼠學習記憶能力，提高NO水平，降低ET水平，提示其療效機制可能與調節(jié)血管內皮因子有關。

電針；高血壓；阿爾茨海默??；一氧化氮；內皮素

張立娟，王康鋒，楊傳華.電針督脈穴對高血壓復合阿爾茨海默病大鼠學習記憶能力及血清一氧化氮和內皮素水平的影響［J］.中國全科醫(yī)學，2015，18（3）：317-321.［www.chinagp.net］

Zhang LJ，Wang KF，Yang CH.Effects of electroacupuncture at acupoints of the Governor Vessel on learning and memory ability，serum levels of nitric oxide and endothelin in rats with hypertension combined with Alzheimer′s disease［J］.Chinese General Practice，2015，18（3）：317-321.

同行評議：

近年來的研究發(fā)現(xiàn)，高血壓也是阿爾茨海默病的主要危險因素之一，老年患者的認知功能障礙至少部分與高血壓相關。針刺療法是祖國醫(yī)學的瑰寶，因其安全有效，已得到越來越多醫(yī)生和患者的喜愛，而督脈作為奇經(jīng)八脈之一，被稱為“陽脈之?！?，因其走行上的特殊性，與腦的關系得到中醫(yī)學者廣泛肯定，被稱為“廣義上的腦”。針刺督脈穴位對阿爾茨海默病的療效已得到大量的臨床驗證，但相關的基礎研究仍很薄弱，雖然有相關文獻指出一氧化氮和內皮素與阿爾茨海默病相關，亦有相關文獻證實針刺降壓的機制與調節(jié)血管內皮因子有關，但是對于針刺治療阿爾茨海默病的機制與一氧化氮和內皮素相關的研究比較少見。本研究復制出高血壓復合阿爾茨海默病動物模型，通過對大鼠血壓變化、行為學實驗、血清一氧化氮和內皮素水平的分析，驗證電針督脈穴對高血壓復合阿爾茨海默病模型大鼠的治療作用，并探討電針督脈穴治療高血壓復合阿爾茨海默病的作用機制，具有一定的創(chuàng)新性。

阿爾茨海默病 （Alzheimer′s disease，AD）是一種發(fā)生于中老年的原發(fā)性退行性腦變性疾病。本病致殘率高、死亡率高，隨著人口老齡化的加劇，AD引起的社會問題和經(jīng)濟問題日益突出。但是，本病發(fā)病機制尚未完全闡明，近年來的研究發(fā)現(xiàn)，高血壓也是AD的主要危險因素之一，老年患者的認知功能障礙至少部分與高血壓相關［1-3］。針灸作為一種非藥物療法對高血壓及AD的治療效果已得到廣泛肯定，但目前文獻報道大多僅停留于臨床觀察階段，基礎研究尤其是療效機制研究仍然十分薄弱，本研究復制出高血壓復合AD動物模型，觀察電針督脈穴對高血壓復合AD大鼠學習記憶能力及血清一氧化氮（NO）、內皮素（ET）水平的影響，探討針灸療效機制，以期為臨床應用針灸治療AD提供客觀依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動物 雄性Wistar大鼠60只，清潔級，鼠齡8～12周，體質量200～250 g，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實驗動物室提供 （許可證號：SCXK魯20130001）。

1.2藥品與試劑 鹽酸多奈哌齊片〔安理申，衛(wèi)材（中國）藥業(yè)有限公司，批號：130536A〕，卡托普利片（開博通，中美上海施貴寶制藥有限公司，批號：1308032），Aβ25-35 （A4559，規(guī)格：1 mg，Sigma公司），NO、ET試劑盒（EM-1360、ER-1595，北京博奧森生物技術有限公司）。

1.3儀器 大鼠血壓心率測定儀 （RBP-1B型，中日友好臨床醫(yī)學研究所），多功能生理記錄儀（BL-420E型，成都泰盟軟件有限公司），腦立體定向儀（江灣1號C型，上海川沙花木農機廠），佳健牌電子針灸治療儀（CMNS6-1型），華佗牌針灸針（直徑0.30 mm×25 mm），Morris水迷宮（淮北正華生物儀器設備有限公司），洗板機（AC8型，芬蘭ThermoLabsystems），酶標儀 （352型，芬蘭Labsystems MultiskanMS），微量高速離心機 （TG16W，長沙平凡儀器儀表有限公司），隔水式恒溫培養(yǎng)箱（GNP-9080型，青島正恒試驗設備有限公司）。

1.4分組及造模方法 將大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，采用隨機數(shù)字表法抽取10只作為假手術組，在相應造模階段給予與造模大鼠一致的手術創(chuàng)傷，但不結扎左腎動脈，于海馬區(qū)注射等量0.9%氯化鈉溶液。其余50只大鼠采用“兩腎一夾”法制備腎性高血壓大鼠動物模型［4］，具體方法為：2%戊巴比妥鈉（0.25 ml/100 g）腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定于手術臺上，四肢和牙齒用橡皮筋固定。用理發(fā)器在大鼠腹部脫毛，5%碘伏消毒腹部，75%乙醇脫碘，蓋上孔巾沿腹正中線作手術切口打開腹腔，按無菌操作，小心、鈍性分離出左腎動脈，然后穿入無菌絲線，把直徑為0.25 mm的針灸針與腎動脈血管長軸緊貼平行放置，用無菌絲線扎緊腎動脈和針灸針然后抽出針灸針，造成單側腎動脈狹窄。對側腎臟和動脈不觸及。術后3 d內青霉素 （3×104U/d）腹腔注射預防感染，并于7 d后開始用尾套法測量大鼠血壓和心率，重復3次取其均值，術后14 d尾動脈收縮壓在140 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）以上者［5］為成功的高血壓模型。在此基礎上，通過外源性Aβ25-35右側海馬區(qū)注射復制AD模型，具體方法為［6］：將麻醉后動物頭部固定在立體定向儀上，參照《大鼠腦立體定位圖譜》，選右側海馬為注射區(qū)，定位坐標：前囟后3.0 mm、中線右側2.0 mm、硬膜下2.6 mm。在坐標點周圍用牙科鉆環(huán)行鉆開顱骨，并分離暴露硬腦膜，緩慢垂直進針至靶點，然后將1 μl Aβ25 -35（10 μg/μl）緩慢注入，注射時間5 min，留針5 min，以保證溶液充分彌散，再緩慢撤針。Morris水迷宮測試評價大鼠的學習記憶能力，篩選AD模型。選取成功模型，采用隨機數(shù)字表法分為模型組、西藥組和電針組。

1.5治療方法 電針組從模型成功的第2天起，給予電針治療，方法為：將大鼠固定在固定器內，保持清醒狀態(tài)，參考《實驗針灸學》［7］選取百會（頂骨正中）、大椎 （第7頸椎與第1胸椎間背部正中），用華佗牌30號1寸毫針，于百會穴斜刺0.5寸、大椎穴正刺0.5寸，連接電針治療儀，施以疏密波，頻率16 Hz，強度以局部肌肉輕微收縮為度，留針30 min，1 次/d，均在下午進行。西藥組給予鹽酸多奈哌齊（0.45 mg/ kg）和卡托普利（2.25 mg/kg）灌胃，1次/d。假手術組、模型組和西藥組進行與電針組相同時間、相同程度的捉抓刺激。假手術組、模型組和電針組給予與西藥組等量0.9%氯化鈉溶液灌胃。以上均連續(xù)治療8周。

1.6檢測指標及方法

1.6.1血壓測試 采用大鼠尾動脈脈搏間接測壓法，檢測造模前、造模后、治療后所有大鼠的尾動脈血壓，取收縮壓為觀察指標，以mm Hg表示，取連續(xù)3次血壓值的平均值為測量結果。

1.6.2學習記憶能力測試 大鼠治療前及治療結束后3 d分別行Morris水迷宮實驗［8］。Morris水迷宮為一恒溫圓形水池，水溫 （25±2）℃，直徑150 cm，高60 cm，水深35 cm，池壁上緣等距離標有東、南、西、北4個入水點，以這4個入水點將水池等分成4個象限，水中加墨汁使其不透明，在東北象限的中央放置一直徑為9 cm，高33 cm的平臺，沒入水下2 cm，整個實驗期間其位置保持不變，水池周圍參照物、燈光強度也保持不變。（1）定向航行實驗：每天將大鼠依次從東、南、西、北4個入水點面向池壁放入水池中。記錄90 s內動物自入水到找到平臺后四肢爬上平臺時所需要的時間，作為逃避潛伏期。如果大鼠90 s內找到平臺，記錄90 s內實際逃避潛伏期；如果90 s內未找到平臺，由實驗者將其引上平臺并停留10 s，逃避潛伏期記錄為90 s。每天訓練1次，共5 d，第6天進行測試。（2）空間探索實驗：第7天撤走平臺進行空間探索實驗，任選1個入水點將大鼠面向池壁放入，記錄90 s內大鼠跨越原平臺的次數(shù)。試驗結束后用ImagePro-Plus系統(tǒng)對大鼠游泳軌跡錄像進行處理。

1.6.3血清NO、ET水平測定 實驗結束后，腹主動脈取血，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測血清NO、ET水平，具體方法參考試劑盒說明書進行。

1.7統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1實驗動物數(shù)量分析 假手術組大鼠均全部存活。其余50只大鼠在“雙腎一夾”手術過程中死亡6只，術后7 d存活大鼠40只，血壓從術后7 d開始升高，至術后14 d收縮壓升高至140 mm Hg以上33只，雙側海馬區(qū)注射Aβ25-35過程中死亡2只，最后存活31只，采用隨機數(shù)字表法選取30只成功模型，分為模型組、西藥組和電針組，最終納入結果分析的大鼠40只，每組10只。

2.24組大鼠治療前后血壓比較 造模前4組大鼠血壓比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。造模后4組大鼠血壓比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其中，模型組、西藥組、電針組大鼠血壓較假手術組升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。治療后4組大鼠血壓比較，差異有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）；其中，模型組、電針組大鼠血壓較假手術組升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；電針組大鼠血壓較模型組降低、較西藥組升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表1）。

2.34組大鼠治療后學習記憶能力測試結果 4組大鼠治療后Morris水迷宮實驗4個方向逃避潛伏期比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其中，模型組、西藥組、電針組大鼠4個方向逃避潛伏期較假手術組延長，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；西藥組、電針組大鼠4個方向逃避潛伏期較模型組縮短，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；電針組大鼠東向和北向逃避潛伏期較西藥組縮短，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表2）。

4組大鼠造模后及治療后跨臺次數(shù)比較，差異均有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）；其中，造模后模型組、西藥組、電針組大鼠跨臺次數(shù)較假手術組減少，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；治療后模型組、西藥組大鼠跨臺次數(shù)較假手術組和電針組減少，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表3）。

2.44組大鼠治療后血清NO、ET水平比較 4組大鼠治療后血清NO、ET水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其中，假手術組、西藥組、電針組大鼠NO水平較模型組升高，ET水平較模型組下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；假手術組、西藥組、電針組大鼠血清NO、ET水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05，見表4）。

表1　4組大鼠治療前后血壓比較（±s，mm Hg）Table 1 Comparison of levels of BP among 4 groups of rats before and after treatment

表1　4組大鼠治療前后血壓比較（±s，mm Hg）Table 1 Comparison of levels of BP among 4 groups of rats before and after treatment

注：與假手術組比較，*P＜0.05；與電針組比較，△P＜0.05

組別　只數(shù)　造模前　造模后　治療后假手術組　10　108±12　115±13　124±20模型組　10　111±11　156±11*　164±24*△西藥組　10　111±14　157±13*　125±22△電針組　10　109±16　157±10*　136±22*F值0.960?。?.001　0.001 0.099　32.244　6.766 P值

表2　4組大鼠治療后　Morris水迷宮實驗各方向逃避潛伏期比較（±s，s）Table 2 Comparison of Morris water maze test escape latent period in eachdirection among 4 groups of rats after treatment

表2　4組大鼠治療后　Morris水迷宮實驗各方向逃避潛伏期比較（±s，s）Table 2 Comparison of Morris water maze test escape latent period in eachdirection among 4 groups of rats after treatment

注：與假手術組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與西藥組比較，▲P＜0.05

組別只數(shù)　東　南　西　北假手術組10　14.6±3.4　17.8±6.3　15.7±3.7　13.5±3.4模型組　10　37.8±9.1*　40.3±10.2*　34.7±10.3*　40.3±8.3*西藥組　10　27.8±7.1*△　29.1±10.2*△27.2±6.7*△　31.8±7.3*△電針組　10　21.3±6.0*△▲24.9±6.4*△24.7±7.6*△　24.7±8.8*△▲F值＜0.001?。?.001?。?.001?。?.001 21.630　12.260　11.010　24.410 P值

表3　4組大鼠造模后及治療后跨臺次數(shù)比較（±s，次）Table 3 Comparison of frequency of crossing the platform among 4 groups of rats after modeling and treatment

表3　4組大鼠造模后及治療后跨臺次數(shù)比較（±s，次）Table 3 Comparison of frequency of crossing the platform among 4 groups of rats after modeling and treatment

注：與假手術組比較，*P＜0.05；與電針組比較，△P＜0.05

組別　只數(shù)　造模后　治療后假手術組10　3.80±0.79　3.90±0.88模型組　10　2.30±0.95*　2.10±0.99*△西藥組　10　2.00±0.82*　2.90±0.99*△電針組　10　2.40±0.96*　3.90±0.99 F值＜0.001?。?.001 8.230　8.140 P值

表4　4組大鼠治療后血清　NO、ET水平比較?。ā纒）Table 4 Comparison of serum levels of NO and ET among 4 groups of rats after treatment

表4　4組大鼠治療后血清　NO、ET水平比較　（±s）Table 4 Comparison of serum levels of NO and ET among 4 groups of rats after treatment

注：NO=一氧化氮，ET=內皮素；與模型組比較，*P＜0.05

組別　只數(shù)　NO（μmol/L）　ET（pg/ml）假手術組　10　64±11*　174±15*模型組　10　41±11　208±11西藥組　10　60±12*　174±21*電針組　10　54±13*　183±19*F值＜0.001?。?.001 7.630　8.800 P值

3　討論

目前，AD發(fā)病率逐年升高，高血壓是AD的主要危險因素之一，本研究模擬臨床AD患者先出現(xiàn)血壓升高，之后發(fā)生腦組織損害、學習記憶能力下降的病理過程，在復制高血壓模型的基礎上，再復制AD模型，建立高血壓復合AD模型。從實驗結果看，模型組血壓升高，學習記憶能力明顯減退，模型制作成功。

祖國醫(yī)學認為AD的發(fā)生與腎精虧虛、髓海失充有關，病位在腦，而督脈循行上“貫脊屬腎”“入絡腦”，其所屬穴位大部分可以治療腦部疾病，故有“病變在腦，首取督脈”之說。黃琴峰等［9］總結發(fā)現(xiàn)，AD的針刺治療以體針為主，常取督脈穴，其占各經(jīng)穴次之首，百會、大椎等多被選作主穴。現(xiàn)代眾多醫(yī)家采用百會、大椎為主治療AD亦取得了理想的治療效果［10-11］。百會為“三陽五會”，位居巔頂，有醒腦益智、開竅醒神之功，大椎為 “諸陽之會”，為手足三陽經(jīng)之脈氣交會之處，電針此二穴，可疏通氣血、通調督脈、醒腦開竅、益智復聰［5］。同時，百會、大椎穴性屬陽，能通達陰陽脈絡，連貫周身經(jīng)穴，調節(jié)機體陰陽平衡，有降壓之效［12-13］。本研究選擇電針百會、大椎治療高血壓復合AD，結果顯示，電針百會、大椎可以縮短Morris水迷宮實驗逃避潛伏期時間，增加跳臺次數(shù)，改善AD大鼠學習記憶能力，療效優(yōu)于西藥組，同時可以降低血壓，但降壓幅度不如卡托普利。推測其療效機制可能與調節(jié)血管內皮因子有關。

NO和ET是常見的血管內皮因子，NO具有強有力的擴張血管、降低血壓、抑制血小板黏附和聚集等作用，是已知的具有抗高血壓作用的保護性因子［14］；ET有強烈的收縮血管和升高血壓的作用，是迄今為止所知的體內最強烈持久的血管收縮因子［15-17］。正常情況下，NO、ET兩者保持動態(tài)平衡，共同維持血管張力，調節(jié)血管內皮功能，而在病理狀態(tài)下兩者動態(tài)平衡失調，導致血壓升高。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，血管內皮功能障礙與AD的發(fā)生也有關系［18-19］。NO是神經(jīng)系統(tǒng)重要的信號分子，與AD發(fā)病的Aβ沉積、tau過磷酸化等病理過程密切相關，其通過調節(jié)AD的微血管損傷和氧化應激，影響AD的發(fā)生和發(fā)展［20］。有研究證實，AD患者血清NO水平較健康對照組降低［21］，ET水平則高于健康對照組［22］。本研究結果顯示，電針督脈穴后AD大鼠血清NO水平升高，ET水平下降，提示電針督脈穴治療高血壓和AD的機制與調節(jié)血管內皮因子有關，但是電針對其他調節(jié)元素的作用仍不清楚，亟待進一步研究驗證。

本課題人員貢獻：張立娟負責實驗設計和論文撰寫，王康鋒和張立娟負責具體實驗實施和數(shù)據(jù)統(tǒng)計，楊傳華負責論文的審校及實驗過程中的質量控制。

［1］Skoog I，Lernfelt B，Landahl S，et al.15-year longitudinal study of blood pressure and dementia［J］.Lancet，1996，347（9009）：1141-1145.

［2］Kilander L，Nyman H，Boberg M，et al.Hypertension is related to cognitive impairment：a 20-year follow-up of 999 men［J］. Hypertension，1998，31（3）：780-786.

［3］Cui Y，Wu QH，Hao YH，et al.Alzheimer′s Disease-related Risk Factors［J］.Chinese General Practice，2012，15（9）：3000.（in Chinese）崔宇，吳群紅，郝艷華，等.阿爾茨海默病發(fā)病的相關危險因素研究［J］.中國全科醫(yī)學，2012，15（9）：3000.

［4］Dai Y，Peng WJ，Xu ZJ.Modification of gloidblatt 2K1C hypertension model in rats［J］.Laboratory Animal Science and Administration，2006，23（2）：60-61.（in Chinese）戴勇，彭武建，徐卓佳.“兩腎一夾”腎性高血壓大鼠模型的改進 ［J］.實驗動物科學與管理，2006，23（2）：60-61.

［5］Shao Y，Lai XS，Guan CW，et al.Effect of electroacupuncture on learning-memory ability of vascular dementia rats with concomitant hypertension and hyperlipemia［J］.Acupuncture Research，2009，34（6）：368-375.（in Chinese）邵瑛，賴新生，關楚威，等.“通督調神固本”電針法對高血壓-高血脂復合血管性癡呆模型大鼠學習記憶干預的初步研究［J］.針刺研究，2009，34（6）：368-375.

［6］Wang LL，Wang Z，Gao XH，et al.Effect of donepezil on expression of brain-derived neurotrophic factor in hippocampus in rats induced by Aβ 25-35［J］.Chinese General Practice，2010，13（1）：166-168.（in Chinese）王亮亮，王哲，高旭紅，等.鹽酸多奈哌齊對側腦室注射Aβ25 -35大鼠海馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子表達的影響［J］.中國全科醫(yī)學，2010，13（1）：166-168.

［7］李忠仁.實驗針灸學［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003：327.

［8］Lyu C，Hu XL，Zhu GC，et al.Establishment of a rat model with Alzheimer′s disease induced by beta-amyloid protein［J］.Acta Acedamiac MedicinaeJiangxi，2005，45（1）：28，39.（in Chinese）呂誠，胡小令，祝高春，等.β-淀粉樣蛋白所致模擬老年性癡呆動物模型的建立［J］.江西醫(yī)學院學報，2005，45（1）：28，39.

［9］Huang QF，Liu J.Study on the clinical regularity of acupuncture in the treatment of dementia［J］.Chinese Journal of Integrative Medicine on Cardio/Cerebrovascular Disease，2010，8（7）：799-801.（in Chinese）黃琴峰，劉婕.針灸治療癡呆的臨床規(guī)律探討［J］.中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2010，8（7）：799-801.

［10］Zhao LG，Ma L，Li YJ，et al.Observation on therapeutic effect of acupuncture at Baihui and Dazhui in treatment of senile dementia ［J］.Journal of Clinical Acupuncture and Moxibustion，2007，23 （9）：42-43.（in Chinese）趙立剛，馬莉，李亞杰，等.針刺百會、大椎治療老年性癡呆的療效觀察 ［J］.針灸臨床雜志，2007，23（9）：42-43.

［11］Ouyang Q，Li ZR，Mu YY，et al.Clinical observation of electric acupuncture combined with fentazine in treating mental symptoms of Alzheimer′s disease［J］.Shanghai J Acu-Mox，2000，19（6）：16-17.（in Chinese）歐陽頎，李忠仁，穆艷云，等.電針合并奮乃靜治療阿爾茨海默病精神癥狀的臨床觀察［J］.上海針灸雜志，2000，19 （6）：16-17.

［12］Dong YS，Xing SL.Effect of acupuncture needle-retention duration at baihui（GV20）and sishencong（EX-HN1）on blood pressure in hypertension patients［J］.AcupunctureResearch，2012，37 （3）：233-236.（in Chinese）董永書，行書麗.百會、四神聰穴久留針對高血壓患者血壓的影響［J］.針刺研究，2012，37（3）：233-236.

［13］Shen HY，Liu GA，Zhu XM.Case report of 120 hypertension patients treated by spray agent［J］.Shaanxi Journal of Traditional Chinese Medicine，2002，23（2）：114.（in Chinese）申洪硯，劉根安，朱秀敏.降壓噴劑治療高血壓病120例［J］.陜西中醫(yī)，2002，23（2）：114.

［14］劉建紅，姜平.老年糖尿病伴腦梗死患者血漿一氧化氮和內皮素含量變化的臨床意義［J］.中國煤炭工業(yè)醫(yī)學雜志，2013，16（7）：1143-1144.

［15］Xian SX，Jia WJ.Clinical Significance of plasma endotheline（ET）levels inpatientswithbloodhyperviscosity［J］.Journalof Radioimmunology，2004，17（6）：4381.（in Chinese）鮮社辛，賈維軍.血漿內皮素在高粘血癥中的臨床意義［J］.放射免疫學雜志，2004，17（6）：4381.

［16］Chen F，Wang L，Zhu ZY，et al.Progress in Research of Role of Endothelin-1 and Its Receptors in Cardiovascular Diseases［J］. Chinese General Practice，2013，16（9）：3149-3151.（in Chinese）陳芳，王麗，朱中玉，等.內皮素1及其受體在心血管疾病中作用的研究進展 ［J］.中國全科醫(yī)學，2013，16（9）：3149-3151.

［17］Tang BC，Ma JG，Bi XF，et al.Study on the relationship of helicobacter pylori infection and plasma endothelin in elder patients with vascular dementia as well as recurring cerebral infarction［J］. Chenese Journal of Difficultand Complicated Cases，2010，9（5）：360.（in Chinese）唐寶蒼，馬建國，畢向鋒，等.幽門螺桿菌感染及血清內皮素水平與老年再發(fā)腦梗死及血管性癡呆的相關性研究［J］.疑難病雜志，2010，9（5）：360.

［18］ FeelessM.TheBiochemicalpathwaysofNOformationfrom nitrovasdilators［J］.Cardiovasc Pharmacol，1991，17（3）：25 -33.

［19］Masaki T，Kimura S，Yanagisama M，et al.Molecular and celluar mechanism of endothelin regulation implications for vascular function ［J］.Circulation，1991，84（5）：1457-1461.

［20］Wu XQ，Wang XS.Research progress of nitric oxide/nitric oxide synthase in Alzheimer disease［J］.Medical Recapitulate，2012，18（1）：25-27.（in Chinese）吳曉強，王小姍.一氧化氮/一氧化氮合酶在阿爾茨海默病中的研究進展［J］.醫(yī)學綜述，2012，18（1）：25-27.

［21］Zhang QD，Qu ZS.The changes of blood lipid and endothelial function in patients with Alzheimer′s ddisease［J］.Chinese Journal of Practical Nervous Diseases，2008，11（8）：48-49.（in Chinese）張清德，曲忠森.阿爾茨海默病患者血脂及內皮功能的變化［J］.中國實用神經(jīng)疾病雜志，2008，11（8）：48-49.

［22］Shi HC，Wang J，Jiang JD.Clinical significance of determination of plasma ET and serum folic acid，vitamin B12 levels in patients with Alzheimer′s diseases（AD）［J］.Journal of Radioimmunology，2007，20（6）：484-486.（in Chinese）施洪超，王軍，姜建東.AD患者血漿ET和血清FA、VitB12檢測的臨床意義［J］.放射免疫學雜志，2007，20（6）：484-486.

（本文編輯：陳素芳）

Effects of Electroacupuncture at Acupoints of the Governor Vessel on Learning and Memory Ability，Serum Levels of Nitric Oxide and Endothelin in Rats with Hypertension Combined with Alzheimer′s Disease

ZHANG Li-juan，WANGKang-feng，YANG Chuan-hua.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Shandong Academy of Traditional Chinese Medicine，Ji′nan 250014，China

Objective To investigate the effects of Electroacupuncture at acupoints of the Governor Vessel on learning and memory ability，serum levels of nitric oxide（NO）and endothelin（ET）in rats with hypertension combined with Alzheimer′s disease（AD）.Methods 40 male Wistar rats were divided into 4 groups equally by random number table method：pseudo operation group，model group，medication group and EA group，10 rats in each group，renal hypertensive rats model was established using the＂two kidney one clip＂method，then bilateral hippocampal region of rats was injected with Aβ25-35，thus rats model of renal hypertension and AD was established.Rats in medication group were intragastric administrated with donepezil hydrochloride and captopril，while rats in EA group underwent electroacupuncture at Baihui（GV 20）and Dazhui（GV 14）for 8 weeks.The tail artery blood pressure was detected before and after treatment，Morris water maze test was performed，serum levels of NO and ET after treatment were measured by ELISA method.Results There was no significant difference in blood pressure among four groups of rats（P＞0.05）.After modeling，the blood pressure of rats in model group，medication group and EA group was significantly higher than that in pseudo operation group，respectively（P＜0.05）.After treatment，the blood pressure of rats in model group and in EA group was significantly higher than that in pseudo operation group，respectively（P＜0.05）；however，the blood pressure in EA group was significantly lower than in model group，and significantly higher than that in medication group（P＜0.05）.After treatment，the escape latent period in every direction of rats in model group，medication group and EA group was significantly longer than that in pseudo operation group，respectively（P＜0.05）；the escape latent period in every direction of rats in medication group and EA group was significantly shorter than that in model group（P＜0.05）；the escape latent period in east and north direction of rats in EA group was significantly shorter than that in medication group（P＜0.05）.After modeling，frequency of crossing the platform of rats in model group，medication group and EA group was significantly decreased than that in pseudo operation group，respectively（P＜0.05）；after treatment，frequency of crossing the platform of rats in model group and medication group was significantly decreased than that in pseudo operation group and EA group，respectively（P＜0.05）.After treatment，the NO level in pseudo operation group，medication group and EA group was significantly higher than that in model group，respectively；while ET level in pseudo operation group，medication group and EA group was was significantly lower than that in model group，respectively（P＜0.05）.There was no significant difference in serum levels of NO and ET among pseudo operation group，medication group and EA group（P＞0.05）.Conclusion Electroacupuncture at acupoints of the Governor Vessel can reduce blood pressure of rats with hypertension combined with AD，improve their learning and memory ability，increase NO level and reduce ET level，which suggest that the effect mechanism may be related to regulating the vascular endothelial growth factor.

Electroacupuncture；Hypertension；Alzheimer′s disease；Nitric oxide；Endothelin

R 544.1 R743

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.03.017

國家自然科學基金青年基金資助項目（81303028）；山東省博士后創(chuàng)新項目（201301006）；山東省科技發(fā)展計劃（2014GSF119038）；山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃（2013-044，2013-126）

250014山東省濟南市，山東中醫(yī)藥大學2012級博士研究生，山東省中醫(yī)藥研究院（張立娟）；山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，高血壓國家臨床研究基地（王康鋒，楊傳華）

楊傳華，250014山東省濟南市，山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，高血壓國家臨床研究基地；

E-mail：yangchuanhua1962@126.com

2014-10-03；

2014-12-04）