HPLC法測定血脂康膠囊中Monacolin類成分的含量

王麗娟 陳四喜 楊雁冰 孫福金 王俊峰 李謎 燕學(xué)波

HPLC法測定血脂康膠囊中Monacolin類成分的含量

王麗娟 陳四喜 楊雁冰 孫福金 王俊峰 李謎 燕學(xué)波

目的 建立HPLC測定血脂康膠囊中洛伐他汀、莫納可林L和脫水洛伐他汀3種成分的含量。方法 采用Ag ilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，以甲醇-0.05%磷酸(78∶22)為流動相，流速：1.0 mL/min，柱溫：35℃，檢測波長：238 nm。結(jié)果 洛伐他汀、莫納可林L和脫水洛伐他汀的線性范圍分別為4.18～20.88 μg/mL(r＝0.999 8)、0.50～3.96 μg/mL(r＝0.999 9)和1.30～6.50 μg/mL(r＝0.999 9)；加樣回收率(n＝9)分別為99.8%、99.5%、100.4%。結(jié)論 本方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于血脂康膠囊中洛伐他汀、莫納可林L和脫水洛伐他汀3種成分的含量測定。

血脂康膠囊；HPLC；洛伐他??；莫納可林L；脫水洛伐他??；含量測定

血脂康膠囊是以中藥紅曲為原料，具有活血化瘀、健脾消食等功效的產(chǎn)品。臨床用于治療高脂血癥，動脈粥樣硬化引起的心腦血管疾病[1-2]，主要成分紅曲在相同的劑量情況下與洛伐他汀相比具有更強的降脂綜合療效，并降低了長期服用他汀類降脂藥物可能產(chǎn)生的毒副作用[3-4]。隨著知名度的提高，市場上已出現(xiàn)一些假冒產(chǎn)品，這些產(chǎn)品嚴(yán)重危害人民的生命安全，而現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅以測定單一成分Monacolin K含量為指標(biāo)，較難區(qū)別假冒產(chǎn)品。單一的含量測定指標(biāo)無法全面反映并控制制劑質(zhì)量，本實驗利用HPLC法同時測定3種Monacolin類成分的質(zhì)量檢測方法，對控制質(zhì)量、確保臨床療效具有重要意義。

1 儀器與試藥

安捷倫1200高效液相色譜儀；AG285分析天平(Metter Toledo公司)；超聲波清洗器(功率250 W，頻率45 Hz)；離心機(jī)(上海常思工貿(mào)有限公司)。

血脂康膠囊(北大維信生物科技有限公司，批號：20081117、20090703、20090713)。洛伐他丁、莫納可林L和脫水洛伐他汀對照品 (內(nèi)酯型)均為自制；甲醇為色譜純，磷酸、氫氧化鈉為分析純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 混合對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓真空干燥24 h的對照品Monacolin K、Monacolin L和Dehydromonacolin K適量，加甲醇分別制成濃度為1.04 mg/mL、0.20 mg/mL、0.32 mg/mL的單一對照品儲備液。精密移取上述單一對照品儲備液各1.0 mL置同一25 mL量瓶中，精密加入0.1 moL/L氫氧化鈉溶液1 mL，搖勻，靜置10 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成Monacolin K、Monacolin L和Dehydromonacolin K濃度分別為41.76 μg/mL、7.93 μg/mL、12.96 μg/mL的混合溶液，作為混合對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 取血脂康膠囊3粒，置具塞錐形瓶中，精密加入75%乙醇25 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)20 min，放至室溫，再稱定重量，用75%乙醇補足減失的重量，搖勻，離心10 min(3 000轉(zhuǎn)/min)，精密量取上清液5.0 mL，置50 mL量瓶中，精密加入0.1 mol/L氫氧化鈉溶液5.0 mL，搖勻，靜置10 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 陰性對照溶液的制備 不加血脂康膠囊，按供試品溶液制備方法，制得缺血脂康的陰性對照溶液，色譜條件相同，結(jié)果陰性對照溶液在與對照品相同保留時間處未顯色譜峰，故認(rèn)為無干擾(圖1)。

2.4 色譜條件 色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.05%磷酸(78∶22)；檢測波長：238 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.2.1”項下開環(huán)混合對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL量瓶中，精密加入0.1 mol/L氫氧化鈉溶液2.0 mL，搖勻，靜置10 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得系列濃度(5個濃度)對照品溶液。精密吸取對照品溶液20 μL分別注入液相色譜儀，測得峰面積。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到Monacolin K、Monacolin L、Dehydromonacolin K的線性回歸方程分別為：Y＝55.37X＋3.12，r＝0.999 8；Y＝39.52X－1.31，r＝0.999 9；Y＝30.27X－0.54，r＝0.999 9。結(jié)果表明三者濃度分別在4.18～20.88、0.50～3.96、1.30～6.50 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 在上述色譜條件下，取同一混合對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測得洛伐他汀、莫納可林L和脫水洛伐他汀峰面積的RSD分別為0.96%、1.24%、1.07%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批號血脂康膠囊(批號：20081117)6份，按“2.2”項下方法平行制備供試品溶液，測得洛伐他汀、莫納可林L和脫水洛伐他汀3種成分的平均含量分別為0.28%、0.02%、0.05%；RSD分別為0.49%、0.91%、1.07%，表明本法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液(批號：20081117)，分別在0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，測定峰面積。洛伐他汀、莫納可林L和脫水洛伐他汀峰面積的RSD分別為0.93%、1.15%、1.28%，表明12 h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗 精密稱取已知含量的血脂康膠囊(批號：20081117)(約相當(dāng)Monacolin K 2.93 mg)，共5份，分別精密加入對照品依法制成供試品溶液，按上述色譜法測定，計算回收率，結(jié)果(表1)。

2.10 樣品測定 取3批血脂康膠囊(批號：20081117、20090703、20090713)各5份，按“2.2”項下方法制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液和混合對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，記錄峰面積，計算含量，結(jié)果(表2)，色譜圖(圖1)。

表1 回收率測定結(jié)果(n＝3)

表2 血脂康膠囊中monacolin類化合物含量測定

圖1 對照品(A)、血脂康膠囊(B)、陰性對照溶液(C)色譜圖

3 討論

從測定結(jié)果可以看出，所檢測3個批次的血脂康膠囊中3種Monacolin類成分的含量基本一致。血脂康膠囊原質(zhì)量控制方法以單一成分洛伐他汀(Monacolin K)為指標(biāo)，專屬性不夠強，無法全面反映并控制制劑質(zhì)量[5]。本實驗旨在研究建立同時測定3種Monacolin類成分的方法，從而為制定該產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供更可靠的依據(jù)，進(jìn)一步提高制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

若在制備工藝過程中溫度過高或時間過長，會造成Monacolin K等成分分解。高效液相色譜法可以檢測分解峰的存在，說明該法不僅可以測定產(chǎn)品含量，也可用于監(jiān)測生產(chǎn)工藝。

[1]謝靜，李東，王敏，等.HPLC法測定血脂康膠囊中洛伐他汀的含量[J].中國藥房，2010(45)：4287-4289.

[2]陳路，方紅城，張志杰，等.血脂康對高血壓合并高血脂患者血管內(nèi)皮功能的影響[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2011(24)：72.

[3]潘磊，張婷，李得加.血脂康與辛伐他汀治療2型糖尿病血脂異常有效性和安全性的Meta分析[J].疑難病雜志，2013(8)：581-583.

[4]范寶川.阿托伐他汀與血脂康膠囊治療原發(fā)性高脂血癥的療效比較[J].中國民族民間醫(yī)藥，2013(24)：69.

[5]劉小寶.高效液相色譜法測定血脂康軟膠囊中洛伐他汀的含量[J].江西中醫(yī)藥，2007(7)：76.

Objective To develop an HPLC method for simultaneous determination of lovastatin，monacolin L and dehydrated lovastatin in Xuezhikang capsules.Methods An Agilent Zorbax SB-C18 column(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used with a mobile phase of methanol-0.05%phosphoric acid solution(78∶22)，with the flow rate of 1.0 mL/min，the column temperature of 35 ℃，and the detection wavelength of 238 nm.Results The linearity ranges of lovastatin，monacolin L and dehydrated lovastatin were over 4.18～20.88 μg/mL(r＝0.999 8)，0.50～3.96 μg/mL(r＝0.999 9)，and 1.30～6.50 μg/mL(r＝0.999 9).The average recoveries(n＝9)of lovastatin，monacolin L and dehydrated lovastatin were respectively 99.8%，99.5%and 100.4%.Conclusion The method is simple and accurate with high repeatability，which can be adopted for the simultaneous determination of lovastatin，monacolin L and dehydrated lovastatin in Xuezhikang capsules.

Xuezhikang capsules；HPLC；Lovastatin；Monacolin L；Dehydrated lovastatin；Content determination

2014-04-23)

1005-619X(2015)05-0479-03

10.13517/j.cnki.ccm.2015.05.015

475003 71320部隊門診部(王麗娟)；464000 解放軍第154醫(yī)院(陳四喜，燕學(xué)波)；116018 解放軍海軍訓(xùn)練艦支隊(楊雁冰，孫福金)；464000 河南省信陽市第三人民醫(yī)院(王俊)；450013 河南省軍區(qū)直屬醫(yī)院(李謎)

陳四喜