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    酒糟生產(chǎn)酵母培養(yǎng)物的固態(tài)發(fā)酵工藝研究

    2015-09-01 18:21:13馮會(huì)家王建興趙瓊洲
    科技視界 2015年25期
    關(guān)鍵詞:酒糟

    馮會(huì)家 王建興 趙瓊洲

    【摘 要】提出了利用酒糟制備酵母培養(yǎng)物,既可以作為飼料蛋白,又可以作為動(dòng)物益生因子。確定了最佳發(fā)酵工藝條件。

    【關(guān)鍵詞】酒糟;酵母培養(yǎng)物;固態(tài)發(fā)酵工藝

    0 研究背景

    酒糟含有大量的蛋白質(zhì)、氨基酸、糖、纖維素、維生素及香味物質(zhì)等。目前,其用途主要為直接作為飼料、制作調(diào)味品及培養(yǎng)食用菌等,其附加值低。如何使堆積如山的酒糟變廢為寶,亟待解決。

    酵母培養(yǎng)物,是一種新型綠色微生態(tài)制劑,指酵母菌在特定條件下發(fā)酵基質(zhì)而制得的產(chǎn)品,主要由基質(zhì),酵母細(xì)胞及代謝產(chǎn)物組成。這些物質(zhì)能促進(jìn)動(dòng)物腸胃微生物的生長(zhǎng),改善消化能力,提高免疫力、脫毒,因此有利于動(dòng)物的健康生長(zhǎng),在畜禽生產(chǎn)中應(yīng)用前景廣闊。飼料行業(yè)需要大量的蛋白原料,我國(guó)每年進(jìn)口3000萬(wàn)噸以上的大豆才能滿足需要。黃酒糟富含蛋白質(zhì),但其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值不均衡、含水量高、直接飼喂利用率低,且常常堆積變質(zhì)。利用酵母發(fā)酵黃酒糟,可作為一種很好的蛋白飼料來(lái)源,在一定程度上緩解蛋白飼料的壓力。

    1 過(guò)程與方法

    1.1 材料,試劑及器材

    材料:黃酒糟、釀酒酵母和糖化酶等。

    YPD培養(yǎng)基:葡萄糖2%,胰蛋白胨2%,酵母浸粉1%,瓊脂粉1.8%,滅菌115℃、20min。使用前以入100μg/mL添加氨芐青霉素,終濃度為100μg/mL。

    儀器:恒溫水浴鍋、恒溫培養(yǎng)箱、潔凈工作臺(tái)、恒溫?fù)u床、顯微鏡、干燥箱等。

    1.2 種子液制備

    稱取適量干酵母于100mL的三角瓶,以1:9(g:mL)加入以溫度為38~42℃的蒸餾水,1%添加葡萄糖,封口,于38~42℃水浴15min,28~32℃水浴活化1h至起泡,即為活化好的酵母種子液。

    1.3 固態(tài)發(fā)酵工藝優(yōu)化

    新鮮黃酒糟于烘箱中45℃烘干,密封保存。用時(shí)取適量,根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)添加一定比例的物質(zhì)拌勻,每組設(shè)置3個(gè)平行,分別計(jì)數(shù),求平均值。優(yōu)化過(guò)程如下:

    首先,對(duì)糖化酶添加量進(jìn)行優(yōu)化,起始發(fā)酵條件為:取20g干糟,加入罐頭瓶中,水料比1:1,接種量1×108CFU/g,糖化酶添加量分別為0、50、100和250U/g,自然pH,封口。培養(yǎng)30℃、72h,計(jì)算活菌數(shù)。其次,對(duì)裝料量進(jìn)行優(yōu)化,在前一批優(yōu)化的基礎(chǔ)上,選擇最優(yōu)的糖化酶添加量100U/g,裝料量梯度分別為10,20,30,40和50g,其它條件不變。發(fā)酵結(jié)束后,計(jì)數(shù)活菌數(shù)。依次類推,分別對(duì)水料比(0.50,0.75, 1.00,1.25和1.50),接種量(0.50×108,1.00×108,1.25×108,1.50×108和2.00×108CFU/g),溫度(25、28、30、32和35℃)和pH值(4.0,4.5,5.0,6.0和7.0)進(jìn)行優(yōu)化。

    1.4 酵母活菌計(jì)數(shù)

    發(fā)酵結(jié)束后,將產(chǎn)物取出,平攤于報(bào)紙上,將粘結(jié)的發(fā)酵物切成大小基本一致的顆粒狀,置于45℃鼓風(fēng)干燥箱,每隔1h進(jìn)行翻動(dòng)1次,烘干。取10g于250mL的三角瓶中,加入90mL蒸餾水,適量滅菌的玻璃珠,封口,30℃、200r/min振蕩30min。將三角瓶取出,靜置20s,即為10-1稀釋液。取該稀釋液1mL,加入到9mL無(wú)菌水的試管中,搖勻成10-2稀釋液,依次稀釋至10-5-10-7,各取100μL涂布于YPD平板,培養(yǎng)箱中30℃倒置培養(yǎng)2d后計(jì)數(shù)。

    1.5 酵母自溶(酵母培養(yǎng)物的制備)

    發(fā)酵結(jié)束之后,往罐頭瓶中加入45mL水、180mg蛋白酶(50U/mg)和12mg的酵母破壁酶(400U/mg),調(diào)節(jié)pH值為6.5,于50℃作用24h,45℃烘干。此時(shí)90%以上酵母細(xì)胞壁破裂,釋放營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

    1.6 成分分析

    為了對(duì)比黃酒糟及酵母培養(yǎng)物的營(yíng)養(yǎng)成分,分別測(cè)定粗蛋白、多肽、粗脂肪、還原糖、粗淀粉、粗纖維和灰分的含量。為評(píng)價(jià)可溶性蛋白的分子量分布,取1g干酒糟或酵母培養(yǎng)物溶解于10mL醋酸緩沖液中(0.05M,pH4.5),搖勻,沉淀10m,4℃、10, 000r/min離心10min,去掉沉淀,將上清通過(guò)0.2μm濾膜,用快速蛋白液相色譜儀(SuperdexTM 75色譜柱)檢測(cè)多肽及氨基酸。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 固態(tài)發(fā)酵工藝優(yōu)化

    酒糟中含有大量酵母無(wú)法利用的淀粉,糖化酶可以將淀粉降解成小分子的糖類。結(jié)果表明(圖1),添加糖化酶效果顯著,添加量為100U/g時(shí),活菌數(shù)達(dá)到穩(wěn)定值為對(duì)照組的2.6倍,后略有降低,糖化酶價(jià)格較為昂貴,以100U/g為最適添加量。

    酒糟粘性較大,裝料量過(guò)多,不利于通氣和散熱。反之,通氣良好,但是水分蒸發(fā)過(guò)快。裝料量低于30g時(shí),酵母菌數(shù)隨裝料量的增加而增加,高于30g時(shí),隨著裝料量的增加,反而對(duì)酵母生長(zhǎng)產(chǎn)生相對(duì)抑制作用(圖2)。故選擇30g為最適裝料量。

    固態(tài)發(fā)酵,水分是一個(gè)關(guān)鍵因素。水分過(guò)高,基質(zhì)密度大、不疏松,影響供氧。反之,水分蒸發(fā)過(guò)快。水料比低于1.25時(shí),隨著比值的增大,活菌數(shù)快速增加,比值超過(guò)1.25后,菌數(shù)略有下降(圖3)。故水料水比以1.25為最佳。

    接種量過(guò)大,不僅造成菌種資源的浪費(fèi),而且使得培養(yǎng)基內(nèi)的水分相應(yīng)偏高,基質(zhì)粘連,不利于酵母生長(zhǎng)。反之過(guò)低,致起始生物量低,降低增殖速度,延長(zhǎng)發(fā)酵周期。

    由圖4知,接種量達(dá)1.25×108后,活菌數(shù)增長(zhǎng)緩慢,繼續(xù)增加接種量,菌體增長(zhǎng)受到抑制(圖4)。故選取1.0×108CFU/g作為最適接種量。在一定范圍內(nèi),溫度的升高有利于酵母的生長(zhǎng)繁殖及代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生,但是溫度過(guò)高,導(dǎo)致酶類失活,甚至直接導(dǎo)致菌體死亡。反之,菌體生長(zhǎng)緩慢,周期延長(zhǎng)。由圖5知,最適溫度為30℃。

    pH值是發(fā)酵過(guò)程中的重要參數(shù),它通過(guò)影響菌體細(xì)胞膜的通透性,來(lái)改變酵母對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收,以及影響酵母自身酶系的活力。釀酒酵母的最適生長(zhǎng)pH值為4.2~5.0,實(shí)驗(yàn)表明pH4.5為最佳(圖6)。

    綜上所述,以黃酒糟生產(chǎn)酵母培養(yǎng)物的最佳發(fā)酵工藝為:糖化酶100U/g,裝料量30g,水料比1.25,接種量1.0×108CFU/g,溫度30℃,pH4.5、此時(shí)發(fā)酵產(chǎn)物烘干后活菌數(shù)為20.88×108億/g。

    2.2 營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)比

    經(jīng)發(fā)酵后的酵母培養(yǎng)物,其蛋白及多肽含量增加,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值提高,具體為(表1):粗蛋白含量為46.55%,增加了10.77%;多肽含量為6.97,增加了3.03%;粗脂肪為9.51%,略提高了2.32%;還原糖含量為10.56%,大幅度增加了7.6%;粗淀粉含量為11.78%,大幅度降低了25.84%;粗纖維為4.46%,略降低了0.28%;灰分含量為4.57%,增加了1.76%。

    如圖7所示,黃酒糟經(jīng)發(fā)酵,自溶制備成酵母培養(yǎng)物之后,酸溶性蛋白平均分子量降低,檢測(cè)到更多的多肽和游離氨基酸。多肽和氨基酸是食品中的功能成分,具有抗氧化、抗菌、提高免疫力等多種功效。

    目前,市場(chǎng)上的酵母培養(yǎng)物產(chǎn)品有:達(dá)威農(nóng)公司的“益康XP”,粗蛋白12%,粗纖維6.50%,粗脂肪3%,灰分5%;安琪酵母有限公司生產(chǎn)的“酵母自溶粉FM801”,粗蛋白含量約為40%,灰分12%;湖北高生生物飼料有限公司生產(chǎn)的“方祥益思特酵母培養(yǎng)物”,粗蛋白22.60%,多肽5%,粗纖維7.80%,灰分6.70%。本產(chǎn)品以黃酒糟為基質(zhì),在材料來(lái)源上與他們沒(méi)有可比性,但其粗蛋白和多肽含量較高,酵母活菌數(shù)達(dá)20.88×108億/g。由此可見(jiàn),黃酒糟生產(chǎn)酵母培養(yǎng)物具有一定的優(yōu)勢(shì),深層次挖掘其發(fā)酵工藝,作為蛋白飼料和功能性飼料添加劑,其前景廣闊。

    3 創(chuàng)新點(diǎn)

    本實(shí)驗(yàn)的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)如下:

    (1)提出了酒糟利用的一種潛在的途徑,制備酵母培養(yǎng)物,既可以作為飼料蛋白,又可以作為動(dòng)物益生因子。單純利用黃酒糟作為飼料蛋白,產(chǎn)品附加值低,只利用于黃酒糟富含蛋白質(zhì)的特性。而作為酵母培養(yǎng)物,不僅可以使其蛋白質(zhì)得到利用,而且使其功能發(fā)揮到極致,如多肽及氨基酸含量提高,酵母細(xì)胞內(nèi)的代謝產(chǎn)物等益生因子釋放得以利用。

    (2)確定了最佳發(fā)酵工藝條件,糖化酶100U/g,裝料量30g,水料比1.25,接種量1.0×108CFU/g,溫度30℃,pH4.5,此時(shí)發(fā)酵產(chǎn)物烘干后活菌數(shù)為20.88×108億/g,蛋白質(zhì)含量提高。與市場(chǎng)上酵母培養(yǎng)物產(chǎn)品相比,各有優(yōu)勢(shì)。

    (3)固態(tài)發(fā)酵,酶解破壁工藝相結(jié)合,取長(zhǎng)補(bǔ)短,相得益彰。通常,生產(chǎn)酵母培養(yǎng)物過(guò)程如下:液態(tài)發(fā)酵,厭氧酵母自溶,谷物吸附及烘干。此工藝周期長(zhǎng),需要長(zhǎng)時(shí)間的厭氧條件細(xì)胞壁才裂解并釋放營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),同時(shí)液態(tài)發(fā)酵能耗較高。而本工藝采用固態(tài)發(fā)酵富集菌體,簡(jiǎn)便易行;然后,采用廉價(jià)的常用酶類裂解酵母細(xì)胞壁,使代謝產(chǎn)物被釋放出來(lái),得到酵母培養(yǎng)物。

    [責(zé)任編輯:湯靜]

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