麥角甾苷眼用固體脂質(zhì)納米粒制備及其體外釋藥的研究*

佟　玲，李志寶，陳　靜，劉志東，張　莉，王寶成

麥角甾苷眼用固體脂質(zhì)納米粒制備及其體外釋藥的研究*

佟玲1，2，李志寶3，陳靜1，2，劉志東1，2，張莉1，2，王寶成3

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，現(xiàn)代中藥發(fā)現(xiàn)與制劑技術(shù)教育部工程中心，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津300193；3.通藥制藥集團(tuán)股份有限公司，通化134000）

［目的］研究麥角甾苷眼用固體脂質(zhì)納米粒的制備方法及其體外釋放的情況。［方法］采用乳化蒸發(fā)-低溫固化法制備麥角甾苷固體脂質(zhì)納米粒，超濾離心法測其包封率，并對其粒徑、電位、進(jìn)行進(jìn)一步考察，用差示掃描量熱儀（DSC）表征其性質(zhì)，采用透析法考察固體脂質(zhì)納米粒中麥角甾苷的體外釋放行為。［結(jié)果］麥角甾苷固體脂質(zhì)納米粒的平均粒徑為85.56 nm，Zeta電位約為-20.97 mV，藥物平均包封率為88.31%，DSC表明其理化性質(zhì)穩(wěn)定可靠，體外12 h累計釋放率62.46%。［結(jié)論］制備的麥角甾苷固體脂質(zhì)納米粒包封率較高，粒徑小且分布均勻，有良好的緩釋作用。

麥角甾苷；固體脂質(zhì)納米粒；包封率；穩(wěn)定性；體外釋放

肉蓯蓉［Cistanche tubulosa（Scheuk）Whight］為列當(dāng)科（Orobanchaeceae）植物肉蓯蓉干燥帶鱗葉肉質(zhì)莖。主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、青海、新疆等地。主治男子陽痿、女子不孕、血崩、腰膝酸軟、血枯便秘等癥狀。據(jù)報道，肉蓯蓉具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、抗氧化、增強體力［1-3］等藥理作用。苯乙醇苷類為肉蓯蓉的主要有效成份［4］，其中麥角甾苷（Acteoside）為其主要活性成分之一。因麥角甾苷為小分子水溶性成分，半衰期短，易水解，不易透過眼內(nèi)生物膜屏障等性質(zhì)導(dǎo)致其生物利用度較低。固體脂質(zhì)納米粒（SLN）可提高藥物生物利用度，增加其穩(wěn)定性，具有良好的靶向作用［5］，同時，兼具脂質(zhì)體和乳劑的能夠大規(guī)模生產(chǎn)、毒性低等優(yōu)點，是一種有發(fā)展前景的新型給藥系統(tǒng)［6-8］。

本實驗采用乳化固化法制備麥角甾苷固體脂質(zhì)納米粒（麥角甾苷-SLN），對其粒徑、電位、包封率進(jìn)行測定，用差示掃描量熱法（DSC）表征其性質(zhì)，同時考察了其體外釋放。

1　儀器與試劑

1.1儀器Nano ZS型激光散射粒徑分析儀（Malvern，英國）；TK-20A型透皮擴(kuò)散試驗儀（上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司）；超濾離心管，透析袋，Milli-Q超純水系統(tǒng)（Millipore，美國）；XS20S型電子天平（十萬分之一，Mettler-Toledo，瑞士）；高速冷凍離心機(jī)（J-25 Beckman，美國）。

1.2試劑麥角甾苷（天津中新藥業(yè)，≥98%）；卵磷脂（Lipoid S-100，上海東尚實業(yè)有限公司）；單硬脂酸甘油酯（天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠）；聚氧乙烯（40）硬脂酸酯（Myrj52，南京威爾化工有限公司）；山崳酸甘油酯ATO888（Gattefosse，法國）；三氯甲烷，乙醇（分析純，天津康科德科技有限公司）；乙腈，甲醇（色譜純，天津康科德科技有限公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1麥角甾苷固體脂質(zhì)納米粒的制備稱取處方量麥角甾苷、大豆卵磷脂、單硬脂酸甘油酯、及山崳酸甘油酯溶于5 mL無水乙醇，加熱至75℃作為有機(jī)相，另取Myrj52，加入10 mL超純水，水浴75℃使之溶解作為水相。將有機(jī)相緩慢加入600 r/min攪拌的水相中，繼續(xù)攪拌至有機(jī)溶劑揮發(fā)至4 mL。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得麥角甾苷-SLN［9-11］。

2.2麥角甾苷-SLN包封率的測定

2.2.1色譜條件色譜柱為DIKMAODSC18（200mm× 4.6 mm，5 μm），流動相：乙腈-0.1%甲酸水（22∶78），檢測波長：330 nm，流速：1 mL/min，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取麥角甾苷適量，用甲醇分別稀釋至2.5，5.0，10.0，25.0，35.0，50.0 μg/mL的系列對照品溶液。進(jìn)樣量為10 μL，以峰面積對質(zhì)量濃度做回歸曲線，回歸方程為A=16 361C-6 552，R2=0.999 8，結(jié)果表明麥角甾苷在2.5～50.0 μg/m范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3精密度實驗取質(zhì)量濃度為2.5，10.0，50.0 μg/mL的麥角甾苷甲醇溶液，于1 d內(nèi)測定5次，以計算日內(nèi)精密度，連續(xù)測定3 d，確定日間精密度。結(jié)果日內(nèi)RSD為0.32%，日間RSD分別為0.12%和0.22%，儀器精密度符合要求。

2.2.4過膜回收率測定取濃度7.65，15.3，30.6μg/mL 3種濃度的麥角甾苷溶液2 mL于30 K超濾離心管中，4 000 rpm/min離心20 min后取下層濾液，HPLC測定麥角甾苷質(zhì)量濃度（C），過膜回收率=C過膜前/ C過膜后。高中低3種麥角甾苷溶液過膜回收率分別為98.62%，97.47%，99.12%。超濾離心管對麥角甾苷無吸附作用，可用來測定麥角甾苷-SLN包封率。

2.2.5麥角甾苷-SLN包封率的測定取0.5 mL麥角甾苷-SLN，加入甲醇稀釋至2.5 mL，超聲20 min使之破乳，過0.45 μm濾膜，采用HPLC測定其總藥物質(zhì)量濃度（C總）。取0.5 mL麥角甾苷-SLN，加入超純水稀釋至2.5 mL，放入30 K超濾離心管中，4 000 rpm離心20 min后取下層濾液，HPLC測定其游離藥物質(zhì)量濃度（C游離）。計算麥角甾苷-SLN包封率。包封率=（1-C游離/C總）×100%C游離為SLN混懸液中游離藥物質(zhì)量濃度，C總為SLN混懸液藥物總的質(zhì)量濃度。

2.3粒徑及Zeta電位測定取最優(yōu)處方制備的麥角甾苷-SLN混懸液適量，用水稀釋10倍，分別測定粒徑和Zeta電位［12］。粒徑為（85.56±6.16）nm，見圖1，Zeta電位為（-20.97±1.30）mA，見圖2。

2.4重復(fù)性實驗按最優(yōu)處方平行制備3批麥角甾苷-SLN，包封率分別為88.71%，88.56%，87.66%。表明此方法重復(fù)性較好。

2.5DSC檢測將麥角甾苷標(biāo)準(zhǔn)品，空白納米粒凍干粉，麥角甾苷-SLN凍干粉和麥角甾苷標(biāo)準(zhǔn)品與空白SLN物理混合物（5∶1）適量分別置于坩堝中。以氮氣流20 mL/min、加熱速率10℃/min的條件下，從0℃升溫到150℃，見圖3。

圖1　麥角甾苷-SLN粒徑圖Fig.1　The submicron size of acteoside-SLN

圖2　麥角甾苷-SLN Zeta電位圖Fig.2　The Zeta potential of acteoside-SLN

結(jié)果顯示，麥角甾苷在69.92℃有相變峰，空白-SLN在44.77℃出現(xiàn)相變峰。比較麥角甾苷-SLN與物理混合物DSC曲線，物理混合物在45.85℃和67.73℃出現(xiàn)兩個相變峰，分別對應(yīng)空白-SLN和麥角甾苷的相變溫度。而麥角甾苷-SLN的DSC曲線中，麥角甾苷單體的相變峰消失，表明麥角甾苷被包裹于納米粒中。

圖3　DSC圖譜Fig.3　DSC spectrum

2.6麥角甾苷-SLN體外釋放以生理鹽水為溶出介質(zhì)，采用透析法進(jìn)行測定。精密吸取1.5 mL麥角甾苷-SLN溶液，置于透析袋中，兩端封口固定于溶出杯內(nèi)。取釋放介質(zhì)200 mL加熱至37℃，于0.5、1、1.5、2、4、6、8、10、12 h吸取1 mL釋放介質(zhì)，過0.45 μm濾膜，進(jìn)HPLC計算其藥物累積釋放度［13-14］。并同時補充1 mL同溫度的介質(zhì)。結(jié)果見圖4。結(jié)果顯示，麥角甾苷溶液組在4 h釋放完全，達(dá)到平臺期，釋放率達(dá)94.96%。而麥角甾苷-SLN在8 h時釋放達(dá)到平臺期，釋放率為57.38%。

3　討論

藥物經(jīng)角膜滲透與其自身的理化性質(zhì)有關(guān)，具有相對分子質(zhì)量、分子半徑及適宜親脂性［15］的藥物較容易透過角膜。麥角甾苷是水溶性成分，水溶性強，脂溶性較差，因此不易透過角膜。為解決這一問題，本實驗將其制備成SLN以增加藥物在角膜中的透過量，水溶性較好的藥物包封率較低，因此需要選用一種適宜的方法制備麥角甾苷-SLN。SLN的制備方法有很多，主要有高壓均質(zhì)法、熱熔分散法、薄膜-超聲分散法、乳化-固化法等［16-17］。本實驗采用乳化-固化法制備麥角甾苷-SLN，在單因素分析的基礎(chǔ)上，以單硬脂酸甘油酯及山崳酸甘油酯混合物為納米粒脂質(zhì)材料，Myrj 52及大豆卵磷脂作為混合表面活性劑。所得的納米粒粒徑、電位、包封率等性質(zhì)均較好，形態(tài)良好、外觀澄清透明有乳光存在，且操作簡單，重現(xiàn)性好。

圖4　麥角甾苷累計釋放曲線Fig.4　Accumulation releasing curve of acteoside

包封率是評價納米粒質(zhì)量的重要指標(biāo)，有多種測定方法，如：超速離心法、超濾離心法、凝膠柱層析法等［12，18-20］。實驗前期對超速離心法和超濾離心法進(jìn)行了考察，將制備好的麥角甾苷-SLN置于高速離心機(jī)中（轉(zhuǎn)速為14 000 rpm、1 h），離心后上清液中仍然有乳光存在，證明SLN和游離藥物并沒有完全分離。由于受到儀器的最高轉(zhuǎn)速和時間的限制，無法使納米粒及游離麥角甾苷完全分離，故放棄此方法。本實驗采用超濾離心法，分別對輔料中影響藥物包封率的因素進(jìn)行單因素考察，最終確定優(yōu)化處方中各個輔料用量。超濾離心法對SLN及游離藥物分離完全、效果較好，且重復(fù)性好，故采用超濾離心法測定麥角甾苷-SLN的包封率。

麥角甾苷為水溶性藥物，因而采用磷酸鹽緩沖液（pH5.8、pH6.6、pH7.4）和生理鹽水得以保證藥物在漏槽狀態(tài)下進(jìn)行釋放，而穩(wěn)定性實驗結(jié)果顯示麥角甾苷在生理鹽水中12 h穩(wěn)定，故采用生理鹽水作為體外釋放介質(zhì)。研究結(jié)果顯示，麥角甾苷溶液在釋放4 h時釋放達(dá)到94.96%，內(nèi)外基本達(dá)到平衡。而麥角甾苷固體脂質(zhì)納米粒體外釋放前8 h時釋放較快，釋放率達(dá)57.38%，隨后開始緩慢釋放，12 h累計釋放率為總藥量的62.46%，表明麥角甾苷-SLN緩釋性較麥角甾苷溶液組強，有良好的緩釋效果。

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（本文編輯：高杉，于春泉）

Preparation of acteoside solid lipid nanoparticle and the in vitro release characteristics

TONG Ling1，2，LI Zhi-bao3，CHEN Jing1，2，LIU Zhi-dong1，2，ZHANG Li1，2，WANG Bao-cheng3
（1.Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin State Key Laboratory of Modern Chinese Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；3.Tongyao Pharmaceutical Group Stock Co.，Ltd.，Tonghua 134000，China）

［Objective］To study the preparation of acteoside solid lipid nanoparticle（SLN）and its in vitro release behavior.［Methods］Emulsification-evaporation was appropriate for the preparation of acteoside solid lipid nanoparticle and entrapment efficiency was measured by ultrafiltration.The properties of SLN including mean diameter and Zeta potential were studied.The physical property was measured by DSC and the release property was studied by dialysis method.［Results］Mean diameter and Zeta potential of prepared acteoside solid lipid nanoparticle were 85.56 nm and-20.97 mV.The mean drug entrapment efficiency was 88.31%.The physical property tested by the result of DSC was stability，and the in vitro accumulative release was 62.46%of the total drug.［Conclusion］The acteoside SLN prepared in this study has high encapsulation efficiency and small size which has an even distribution and the in vitro release could be in a well sustained way.

acteoside；solid lipid nanoparticle；entrapment efficiency；stability；in vitro release

R283.1

A

1672-1519（2015）06-0368-04

10.11656/j.issn.1672-1519.2015.06.13

教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃（NCET-12-1068）。

佟玲（1989-），女，碩士研究生，研究方向為中藥藥劑學(xué)。

劉志東，E-mail:lonerliuzd@163.com。

（2014-12-27）