合成大麻素JWH-250的高效液相色譜分析方法研究

苗翠英，邱志遠(yuǎn)，翟晚?xiàng)?，?巍，全雪峰，王兆玉

（1.中國(guó)人民公安大學(xué)刑事科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 100038；2.公安部物證鑒定中心， 北京 100038）

合成大麻素JWH-250的高效液相色譜分析方法研究

苗翠英1，邱志遠(yuǎn)1，翟晚?xiàng)?，魏 巍1，全雪峰1，王兆玉1

（1.中國(guó)人民公安大學(xué)刑事科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 100038；2.公安部物證鑒定中心， 北京 100038）

目的 建立合成大麻素JWH-250的高效液相色譜分析方法。方法 考查梯度洗脫的有機(jī)相初始濃度和梯度洗脫的陡度、流速、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)等參數(shù)，初步建立JWH250的高效液相色譜分析方法，并對(duì)專屬性、線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性等指標(biāo)進(jìn)行方法驗(yàn)證， 進(jìn)一步優(yōu)化色譜條件，確定高效液相色譜法檢測(cè)JWH-250的最佳條件。結(jié)果 在紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為214 nm，有機(jī)相初始濃度為63%，梯度陡度為4.2%/min，流速為0.8 mL/ min，柱溫 34℃條件下，JWH-250 在 0.2～10 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)R=0.999 964 9，檢出限（S/ N≥3）為 0.1 μg/mL，日內(nèi)精密度（RSD）為0.64%，日間精密度（RSD）為1.72%。結(jié)論 實(shí)驗(yàn)表明，該方法測(cè)定合成大麻素JWH-250快速、靈敏、準(zhǔn)確、可靠。

法醫(yī)毒物學(xué)；高效液相色譜法；合成大麻素；JWH-250

合成大麻素是當(dāng)今流行的一類新型策劃藥，是在管制藥物分子結(jié)構(gòu)上對(duì)一些不重要的地方加以修飾，得到的一系列與原藥物結(jié)構(gòu)相異，但效果相似甚至更強(qiáng)的“合法”藥物，能夠使吸食者高度興奮，具有較強(qiáng)的致幻作用。若濫用，極易導(dǎo)致藥物成癮、心血管疾病、精神異常。合成大麻素按分子結(jié)構(gòu)可分為苯甲?；胚犷悺⒈揭阴；胚犷?、萘甲酰基吲哚類、非經(jīng)典結(jié)構(gòu)大麻素等幾類［1］，其中萘甲酰基吲哚類和苯乙?；胚犷惡铣纱舐樗厥悄壳盀E用比較嚴(yán)重的合成大麻素。JWH-250屬于苯乙?；胚犷惡铣纱舐樗兀悄壳笆澜绶秶鷥?nèi)較為流行的合成大麻素，中文名稱1-戊基-3-（2-甲氧基苯乙?；┻胚幔?］，分子式C22H25NO2，分子量335.1885，JWH-250的結(jié)構(gòu)式見圖1。我國(guó)2014年1月1日起實(shí)施的《精神藥品品種目錄》已將JWH-250列為一類精神藥品進(jìn)行管制［3］。本文以JWH-250標(biāo)準(zhǔn)品溶液為試樣，通過改變梯度洗脫程序的有機(jī)相初始濃度和梯度陡度、流速、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)等參數(shù)，建立JWH-250的高效液相色譜分析方法，通過驗(yàn)證專屬性、線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性等對(duì)色譜條件展開進(jìn)一步優(yōu)化和確證，最終確定高效液相色譜法檢測(cè)JWH-250的最佳條件，以期為預(yù)防和打擊合成大麻素類新型毒品犯罪活動(dòng)提供技術(shù)支持和服務(wù)［4］。

圖1 JWH-250的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structure of JWH-250

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Prominence UFLC（日本島津公司），配有LC-20AD XR型泵、SIL-20AC XR型進(jìn)樣器、SPD-20A型紫外檢測(cè)器、CTO-20AC 型柱溫箱、數(shù)據(jù)處理軟件LC solution；島津ODS-SP型（150mm×4.6mm，5 μm）色譜柱；EYELA型渦旋混合器；KQ3200型超聲振蕩器；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（SIGMA公司，德國(guó)）；純水儀（美國(guó)Millipore公司）。

JWH-250（1.0 mg/mL）、四氫大麻酚（Δ9-tetrahydrocannabinol THC， 100 μg/mL）標(biāo)準(zhǔn)品溶液（美國(guó)Cerilliant公司），大麻二酚（cannabidiol CBD，1.0 mg/mL）對(duì)照品、大麻酚（cannabidnol CBN，1.0 mg/mL）對(duì)照品（中國(guó)食品藥品鑒定研究所）；乙腈色譜純?cè)噭绹?guó)Fisher Scientific公司）；高純水（經(jīng)Millipore simplicity純水系統(tǒng)制備）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)工作液

取1.0 mg/mL的JWH-250標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，用甲醇稀釋，配制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；取0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，配制成質(zhì)量濃度分別為0.05、0.02、0.01、0.005、0.002 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液備用。

1.3 樣品溶液的制備

在干燥清潔的實(shí)驗(yàn)環(huán)境下，對(duì)繳獲的香料毒品進(jìn)行充分研磨，精密稱取適量，用20 mL甲醇定容，超聲脫氣20min，5000 r/min離心5 min，再經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，濾液備用。

2 結(jié)果與討論

2.1 有機(jī)相初始濃度的選擇

有機(jī)相初始濃度是指梯度洗脫程序開始時(shí)流動(dòng)相中有機(jī)相占全部流動(dòng)相的體積分?jǐn)?shù)。本實(shí)驗(yàn)以乙腈-高純水為流動(dòng)相對(duì)檢測(cè)物進(jìn)行梯度洗脫［5］，在梯度陡度為1%/min、柱溫為35℃、流速為1 mL/min的色譜條件下，考察有機(jī)相初始濃度（50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%）對(duì)各指標(biāo)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：有機(jī)相初始濃度自50%增加到80%的過程中，保留時(shí)間隨有機(jī)相初始濃度增加而減少，從19.5 min降到了4.2 min；峰面積受有機(jī)相初始濃度變化的影響不大；峰高隨有機(jī)相初始濃度增加而升高，從39332增加到81356；理論塔板數(shù)隨有機(jī)相初始濃度增加而降低，從41847下降到7679。根據(jù)上述結(jié)果，暫定有機(jī)相初始濃度為63%。

2.2 梯度陡度的選擇

在有機(jī)相初始濃度為63%、柱溫為35℃、流速為1 mL/min的色譜條件下，將梯度陡度設(shè)為0.5%/ min、1.0%/min、1.5%/min、2.0%/min、2.5%/min、3.0%/min、3.5%/min、4.0%/min、4.5%/min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，考察梯度陡度對(duì)各指標(biāo)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：梯度陡度自0.5%/min增加到4.5%/min的過程中，保留時(shí)間隨梯度陡度增加而減少，從9.7 min降到了7.5 min；峰面積受梯度陡度變化的影響不大；峰高隨有機(jī)相初始濃度增加而升高，從45808增加到85982；理論塔板數(shù)隨梯度陡度增加而升高，從13706上升到26319。為保證較高的柱效和響應(yīng)值，將梯度陡度選定為4.2%/min。

2.3 流速的選擇

在有機(jī)相初始濃度為63%、梯度陡度為4.2%/ min、柱溫為35℃的色譜條件下，將流速設(shè)為0.8、0.9、1.0、1.1、1.2 mL/min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，考察流速對(duì)各指標(biāo)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：流速自0.8 mL/min增加到1.2mL/min的過程中，保留時(shí)間隨流速增加而減少，從9.7 min降到了6.9 min；峰面積隨流速的增加而減小，從715302減小到478663；峰高隨流速的增加而降低，從82436下降到65134；理論塔板數(shù)隨梯度陡度增加而降低，從27524降低到19092。據(jù)此將流速設(shè)定為0.8 mL/min。

2.4 柱溫的選擇

在有機(jī)相初始濃度為63%、梯度陡度為4.2%/ min、流速為0.8 mL/min的色譜條件下，將柱溫設(shè)為30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，考察柱溫對(duì)各指標(biāo)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：柱溫自30℃增加到40℃的過程中，保留時(shí)間隨柱溫增加整體趨勢(shì)下降，從5.640 min降至5.313 min；但柱溫自38℃升至40℃過程中，保留時(shí)間從5.302 min略升至5.313 min；峰面積基本保持不變；峰高隨柱溫的升高而上升，從68593增加到71772；理論塔板數(shù)隨柱溫升高整體趨勢(shì)下降。據(jù)此確定流速為34℃。

2.5 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

為實(shí)現(xiàn)對(duì)不同波長(zhǎng)的考察，本實(shí)驗(yàn)采用二極管陣列檢測(cè)器（DAD）對(duì)JWH-250標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行分析，光譜圖見圖2。JWH-250在波長(zhǎng)200 nm附近吸收強(qiáng)度達(dá)到最大值。對(duì)最佳檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇，考慮以下兩方面：（1）優(yōu)選目標(biāo)物質(zhì)的較強(qiáng)吸收波長(zhǎng)；（2）盡量避免流動(dòng)相中本底的干擾。檢測(cè)波長(zhǎng)越低，越容易受到流動(dòng)相本底干擾，基線隨洗脫梯度變化幅度越大，可能對(duì)峰形和峰面積都造成不利影響，比如積分的漂移或者偏差等［6］，這些因素都有可能影響最終的定量結(jié)果。因此，最終確定最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為214 nm。

圖2 JWH-250的光譜圖Fig.2 Spectrogram of JWH-250

2.6 優(yōu)化前后對(duì)比

記錄JWH-250標(biāo)準(zhǔn)溶液在預(yù)實(shí)驗(yàn)條件（檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，有機(jī)相濃度為70%、梯度陡度為1%/ min，柱溫為35℃，流速為1 mL/min）下的色譜行為，并與有機(jī)相初始濃度為63%、梯度陡度為4.2%/min、流速為0.8 mL/min、柱溫為34℃、檢測(cè)波長(zhǎng)為214 nm的色譜條件下的色譜行為進(jìn)行對(duì)比，考察實(shí)驗(yàn)方案的優(yōu)化效果。

通過對(duì)比可知，經(jīng)優(yōu)化，JWH-250的保留時(shí)間略有滯留，由9.244 min升至9.678 min；但峰面積、峰高、理論塔板數(shù)數(shù)值都有顯著提升，峰面積從574187升至637541，峰高從53190升至84841，理論塔板數(shù)從16662.038升至34787.312。因此，本實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化方案效果良好、切實(shí)可行。

2.7 專屬性考察

由于在實(shí)際繳獲的合成大麻素毒品中可能含有天然大麻素的成份，如大麻二酚（CBD）、大麻酚（CBN）和四氫大麻酚（THC），為了考察這三種天然大麻素成份對(duì)JWH-250是否存在干擾，將JWH-250標(biāo)準(zhǔn)品與上述幾種天然大麻素的標(biāo)準(zhǔn)品混合制成待測(cè)試樣，并用優(yōu)化方法進(jìn)行分析，色譜圖見圖3。JWH-250與其他組分之間的分離度均大于2，能夠?qū)崿F(xiàn)完全分離，方法專屬性良好。

2.8 線性關(guān)系與檢出限

精密吸取一定量0.1 mg/mL的JWH-250標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用甲醇逐級(jí)稀釋，配制成質(zhì)量濃度0.05、0.02、0.01、0.005、0.002 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別進(jìn)樣，每份樣品在相同條件下進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量均為10 μL，在有機(jī)相初始濃度為63%、梯度陡度為4.2%/min、流速為0.8mL/min、柱溫為34℃的色譜條件下進(jìn)行分析，以JWH-250的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）建立線性回歸方程：Y=36525020X-4291.956，R2=0.999 929 9，R=0.999 964 9。結(jié)果表明，JWH-250在檢測(cè)濃度2～100 μ g/ ml范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 96。本實(shí)驗(yàn)以信噪比S/N（p/p）≥3確定檢出限，得到JWH-250的檢出限為0.1μg/mL。

2.9 精密度

取0.01 mg/mL的JWH-250標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在改善后的色譜條件下，1日內(nèi)分別進(jìn)樣6次，計(jì)算日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。連續(xù)6日，每天平行進(jìn)樣2次，取平均值Xn（n=1，2，3，4，5，6），計(jì)算X1～X6的日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果表明，JWH-250的日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.64%，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.72%，精密度良好。

2.10 實(shí)際樣本分析

采用1.3樣品處理方法，在實(shí)驗(yàn)確定的優(yōu)化色譜條件下對(duì)案件繳獲的香料毒品樣品進(jìn)行檢測(cè)分析，考察目標(biāo)檢測(cè)物與其他組分的分離效果和抗干擾性，評(píng)價(jià)優(yōu)化方案的實(shí)際操作性。得到某一實(shí)際樣本的色譜圖見圖4。經(jīng)過與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，色譜圖中JWH-250峰，能與其他物質(zhì)清晰地分離。實(shí)際樣本所得峰面積代入線性回歸方程，計(jì)算得實(shí)際樣本中JWH-250的質(zhì)量濃度c為0.01512 mg/mL；將c=0.01512 mg/mL代入公式：樣品中的目標(biāo)物含量（純度）% = 0.01512mg/mL×稀釋體積/樣品重量×100%，最后可得JWH-250的含量為0.53%。

圖3 混標(biāo)試樣色譜圖Fig.3 Chromatogram of the mixed standard sample

圖4 實(shí)際樣本色譜圖Fig.4 Chromatogram of a seized drug sample

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)建立了合成大麻素JWH-250的高效液相色譜分析法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在紫外檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm，有機(jī)相初始濃度63%，梯度陡度4.2%/min，流速 0.8 mL/ min，柱溫 34℃條件下，JWH-250 在2～100 μg/ml范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)大于 0.999 96，檢出限（S/ N≥3）為 0.1 μg/ml，精密度良好。在優(yōu)化條件下，對(duì)JWH-250與大麻酚、四氫大麻酚及大麻二酚混合液進(jìn)行檢測(cè)，JWH-250能與其他組分很好分離。經(jīng)對(duì)案件中實(shí)際樣本進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，該方法操作簡(jiǎn)便、快速、可靠，分離效果好，是一種可行的分析方法，可用于公安實(shí)踐中JWH-250的檢測(cè)分析。

［1］ 錢振華，徐鵬，劉克林，等.當(dāng)今策劃藥的流行趨勢(shì)［J］.刑事技術(shù)， 2013（3）:14-18.

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［3］ 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局，中華人民共和國(guó)公安部，中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員.精神藥品目［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2013.

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［6］ 翟晚?xiàng)?，張春水，高利?高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定新型香料毒品中的10種合成大麻素［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2014，33（8）:1-6.

引用本文格式：苗翠英， 邱志遠(yuǎn)， 翟晚?xiàng)鳎?等.合成大麻素JWH-250的高效液相色譜分析方法研究 ［J］.刑事技術(shù)， 2015，40（ 5）:396-399.

Determination of Synthetic Cannabinoid JWH-250 by HPLC

MIAO Cuiying1，QIU Zhiyuan1，ZHAI Wanfeng2，WEI Wei1，QUAN Xuefeng1，WANG Zhaoyu1
（1.School of Forensic Science and Technology， People’s Public Security University of China， Beijing 100038， China； 2.Institute of Forensic Science，Ministry of Public Security， Beijing 100038， China）

Objective As one kind of the most popular designer drugs， synthetic cannabinoid has been presenting a tough challenge for law enforcement and public security officials.JWH-250， one of the phenacyl-indoles abused all around the world， has recently been included under the latest Psychotropic Drug Directory by Chinese government.In order to improve the accuracy and sensitivity of determining JWH-250 in actual cases and enrich the research means for this drug， high performance liquid chromatography （HPLC） was utilized.Methods Chromatographic parameters were tested and optimized based on the performance of least interference to the results quality and repeatedness， together with the ascertainment of linear relationship， precision and stability.Eventually， the ideal conditions for detection of the synthetic cannabinoid JWH-250 by HPLC were established.Results Under optimized conditions （UV wavelength at 214 nm， initial concentration of the organic phase of 63%， gradient steepness of 4.2%/min， fl ow rate of 0.8 mL/min， and column temperature of 34°C）， a good linearity was achieved over the range of 2～100 μg/ml， with the correlation coeffi cient R=0.9999649 and limit of detection（S/N≥3）as to 0.1 μg/mL.The precision was good with the intra-day and inter-day RSDs less than 0.59% and 1.74%， respectively.JWH-250 can be completely separated from Δ9-tetrahydrocannabinol （THC）， cannabinol （CBN） and cannabidiol （CBD）.Conclusions The method is rapid， sensitive and accurate， applicable to quantitative determination of the synthetic cannabinoid JWH-250 by validation experimen t of a sample from an actual case， a promising choice for providing technical support to prevent and combat the drug-related criminal activities.

forensic toxicology； high performance liquid chromatography； synthetic cannabinoids； JWH-250

DF795.1

A

1008-3650（2015）05-0396-04

10.16467/j.1008-3650.2015.05.012

苗翠英（1962—），女，四川人，教授，本科，研究方向?yàn)榉治龌瘜W(xué)、毒物毒品技術(shù)。 E-mail: miao_cy@sina.com

2015-06-23