HPLC測定三七傷藥片中人參皂苷Rgl的含量

郭利群 張洪 楊光梅

摘要：目的建立三七傷藥片中人參皂苷Rgl高效液相色譜含量測定方法。方法采用Agilent1260高效液相色譜法，使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑Agilent SB - C18 4.6×250mm色譜柱，流動相為乙腈一水梯度洗脫，檢測波長203cm，柱溫：30℃結(jié)果 該方法人參皂苷Rgl含量在（0-0.015） mg/mL范圍內(nèi)線性良好，人參皂苷Rgl平均回收率為97. 8%。結(jié)論該方法比《中國藥典》科學(xué)、準(zhǔn)確，并能夠檢測出三七傷藥片中有效成分人參皂苷Rgl含量。

關(guān)鍵詞：HPLC；三七傷藥片；人參皂苷Rgl；含量

中圖分類號：R284

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1007 - 2349（ 2015） 02 - 0068 - 03三七是三七傷藥片中最主要的藥材之一，現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中主要控制三七傷藥片中柚皮苷含量，沒有測定其三七中皂苷類成分，本方法采用液相色譜法測定三七傷藥片中人參皂苷Rg1的含量，完善了三七傷藥片的質(zhì)量控制，保證了藥品的質(zhì)量。1 儀器與試藥高效液相色譜儀（德國Agilent公司1260，HPLC，紫外檢測器）、超聲波儀（上?？茖?dǎo)有限公司功率：350 W、工作頻率：53 KHz）、電子天平（梅特勒一托利多XP204）、色譜柱（十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑Agilent SB - C18 4.6×250 mm）。人參皂苷Rgl對照品（中國食品藥品檢定院提供，批號為（110703 - 201027）、色譜純的乙腈（德國merk公司提供）、純化水（過0. 22 um的密理博制純水機(jī)）。2方法與結(jié)果2.1 溶液的制備2.1.1 對照品溶液精密稱取人參皂苷Rgl對照品約5mg，置10 mL量瓶中，加甲醇適量溶解，并用甲醇稀釋至刻度。2.1.2供試品溶液取三七傷藥片40片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取約1.0g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加甲醇40 mL，超聲處理30 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得。2.1.3 陰性樣品溶液的制備 取陰性樣品1 g（按處方缺三七的），按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液2.2高效色譜條件流動相：乙腈（A）和水（B）柱溫30℃，流速1.0 mL/min，檢測波長為203 nm，精密量取上述供試品溶液及對照品溶液各10μL.分別注入HPLC儀，記錄色譜圖，取主峰面積，按外標(biāo)法計算樣品濃度。梯度洗脫見表l。2.3專屬性試驗按以上色譜條件精密吸取對照品溶液，供試品溶液，陰性對照溶液各10μl，分別注入高效液相色譜儀，觀察結(jié)果，記錄色譜圖。結(jié)果表明，其他藥味不干擾供試品溶液中人參皂苷Rgl的測定，人參皂苷Rgl分離良好。2.4線性關(guān)系考察精密量取人參皂苷Rgl對照對照品溶液，2、4、8、10、20、30μl，在上述色譜條件下，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積y對實際進(jìn)樣量（ μl）進(jìn)行線性同歸，回歸方程及線性范同見表1。結(jié)果表明，進(jìn)樣濃度在0. 000～0.015 mg/mL范罔內(nèi)，人參皂苷Rgl與峰面積呈線性關(guān)系。2.5精密度試驗精密吸取對照品溶液10μl，按以上色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄人參皂苷Rgl的峰面積，如下圖，表2，求得人參皂苷Rgl的峰面積為l188. 6766，人參皂苷Rgl的RSD為0.16%.2.6 重復(fù)性測定 按樣品測定的方法制備同一批號樣品6份，按以上色譜條件依次進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖并計算得到人參‘皂苷Rgl的含量和相應(yīng)的RSD%，該樣品人參皂苷Rgl平均含量為1. 68 mg/片，RSD%為1.4%。見表3。2.7 回收率試驗精密稱取已知含量的人參皂苷Rgl的三L傷藥片樣品9份，置于具塞錐形瓶中，每份分別精密稱取人參皂苷Rgl對照品2.0 mg按供試品溶液制備方法處理，定容至10 mL容量瓶中，制成樣品溶液，用外標(biāo)法計算人參皂苷Rgl的含量并計算其回收率和RSD%，，該樣品人參皂苷Rgl回收率為97. 77% ，RSD%為1.8%.見表4。2.8含量測定 精密稱取不同批號的樣品細(xì)粉粉0.5g（每批平行各取2份），分別按供試品溶液的制備方法處理，制成供試品溶液。分別取制備的供試品溶液，人參皂苷Rgl對照品溶液各10μL進(jìn)樣，按以上色譜條件測定，按外標(biāo)法以峰面積計算人參皂苷Rgl含量，結(jié)果見表53討論3.1進(jìn)樣體積選擇用高效液棚色譜（HPLC）同時測定人參皂苷Rgl含量時，人參皂苷Rgl峰形和基線受進(jìn)樣體積影響，在進(jìn)樣體積2、4、8、10 .20 .30μl線性條件下測試了人參皂苷Rgl的峰面積及線性關(guān)系，進(jìn)樣體積10μl以下峰面積和基線較好，而進(jìn)樣體積20 .30μl峰面積和基線較差，所以進(jìn)樣時應(yīng)選擇10μl為進(jìn)樣體積進(jìn)行檢測效果較好3.2分析時間 該梯度分析時間為45min，從樣品分析圖譜來：梯度時間35min以后幾乎沒有樣品雜質(zhì)峰出現(xiàn)，但本品為多成分中藥制劑適當(dāng)延長分析時間，可以避免雜質(zhì)的干擾與分析。保證樣品分析含量分析的可靠性與準(zhǔn)確性。3.3以人參皂苷Rgl控制三七傷藥片中的有效成分含量三七傷藥片中含有中藥三七其含有的有效成分為Rgl、Re、Rbl、Rl、Rd等，但在整個三七傷藥片多味中藥制劑中所含的比例不是最大，所以在成分含量控制中有些較小的成分無法檢出。而其中人參皂苷Rgl的含量超過信噪比約為3：1檢出限（0. 5ug/mL）較多，能夠準(zhǔn)確檢出，因此，以控制三七中目標(biāo)特征峰人參皂苷Rgl含量的分析方法作為三七傷藥片有效成分含量的方法是意義的。3.4分析方法該分析方法比《中國藥典》2010年版一部中三七傷藥片中僅對所含成分柚皮苷的含量測定方法，更為全面、科學(xué)、有效地檢測本品的有效組分的含量；能更好地反映藥品的特性和質(zhì)量。參考文獻(xiàn)：[1]國家藥典委員會編，中國藥典.2010年版.一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.1.[2]謝耀軒，林亞珠；超高效液相色譜法測定三七中人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb1和三七皂苷Rl的含量[J]；廣東藥學(xué)院學(xué)報；2011 .27（5）.[3]郭??；李敏；高巖；UPLC法測定保健品中五種人參皂苷的含量[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2012，7.（收稿日期：2014–11-06）