絲瓜藤提取物治療鼻炎的機(jī)理研究

陳衛(wèi)衛(wèi)，梁　迪，李海濤，梁秀珍，劉華鋼，李　媛（.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧　5000；.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京　009；.廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局，廣西 南寧　5009）

絲瓜藤提取物治療鼻炎的機(jī)理研究

陳衛(wèi)衛(wèi)1，2，梁迪1，李海濤2，梁秀珍1，劉華鋼3，李媛1
（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京210029；3.廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局，廣西 南寧530029）

摘要：［目的］探討絲瓜藤提取物治療鼻炎的作用機(jī)理。［方法］采用卵清白蛋白和Al（OH）3建立小鼠過(guò)敏性鼻炎模型，按劑量灌服相應(yīng)藥物10 d，觀察小鼠的癥狀和鼻黏膜組織形態(tài)學(xué)的病理變化，并檢測(cè)血清中的組胺含量及鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。［結(jié)果］絲瓜藤氯仿部位提取物能有效改變鼻炎小鼠鼻黏膜病理改變，減少血清中組胺含量及鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，從而達(dá)到治療鼻炎的作用。［結(jié)論］絲瓜藤治療鼻炎的作用機(jī)制可能是通過(guò)降低組胺水平和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

關(guān)鍵詞：絲瓜藤；鼻炎；卵清白蛋白；作用機(jī)理

鼻炎（allergic rhinitis，AR）屬于中醫(yī)學(xué)“鼻淵”范疇，內(nèi)因以肺、脾、腎虛損為主，外因多以風(fēng)寒侵襲或異氣、異味刺激所致，常以突然和反復(fù)的鼻癢、鼻塞、噴嚏、流清涕、鼻腔黏膜蒼白腫脹為特征，為臨床常見(jiàn)且多發(fā)的疾?。?］。鼻炎若長(zhǎng)期治療無(wú)效，會(huì)導(dǎo)致過(guò)敏性哮喘、鼻竇炎、鼻息肉、中耳炎和變應(yīng)性結(jié)膜炎的發(fā)生，嚴(yán)重影響患者學(xué)習(xí)和工作，導(dǎo)致生活質(zhì)量下降，兒童可引起發(fā)育遲緩。目前治療鼻炎的藥物主要是抗組織胺藥、腎上腺皮質(zhì)激素和阻止肥大細(xì)胞脫顆粒的膜穩(wěn)定劑，臨床上常用非那根、撲爾敏等藥物治療，但有嗜睡、口干、頭暈等副作用［2］。中藥在防治鼻炎方面具有一定的優(yōu)勢(shì)，副作用較小［3-5］。筆者在前期研究發(fā)現(xiàn)，絲瓜藤具有抗炎、抗過(guò)敏作用，有效成分是氯仿提取部位［6］。為了進(jìn)一步驗(yàn)證其療效，本試驗(yàn)通過(guò)建立小鼠鼻炎模型，觀察其提取物治療鼻炎的作用機(jī)理，為合理開(kāi)發(fā)絲瓜藤資源提供參考和依據(jù)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1試藥絲瓜藤采于廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物園，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)寧小清高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為葫蘆科植物絲瓜Luffa cylindrica（L.）Roem.的根和莖。絲瓜藤提取物由本課題組制備，取絲瓜藤適量，用95%乙醇回流提取2次，每次1 h，濾過(guò)，合并提取液，回收乙醇得到絲瓜藤粗提物。粗提物用氯仿萃取，回收溶劑，得到氯仿部位提取物，其中生藥含量（生藥g/萃取物g）為152.87 g/g。鼻炎康片（佛山德眾藥業(yè)有限公司，批號(hào):11101）；其余試劑均為化學(xué)純。

1.2動(dòng)物清潔級(jí)昆明小鼠，雌雄兼用，體重20±2g由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK（桂）2007-0003，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d供試。

1.3儀器BS224S電子天平（北京賽多利斯）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；Waters-2995高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；LG16-W離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。

2　方法與結(jié)果［7-10］

2.1鼻炎動(dòng)物模型的建立選取合格健康的小鼠，以卵清白蛋白（OVA）10 μg和Al（OH）32 mg溶于1 ml生理鹽水中，進(jìn)行腹腔注射，隔天1次，連續(xù)7次（14 d）；于第15 d開(kāi)始，以1%OVA生理鹽水溶液噴霧吸入激發(fā)，每次10 min，連續(xù)7 d。對(duì)同致敏天數(shù)的小鼠進(jìn)行眼球采血，離心取得血清并按倍數(shù)（1/2，1/4，1/8，1/16，1/32）稀釋，然后分別取0.1 ml上述稀釋好的各種血清注射于正常未致敏小鼠背部皮內(nèi)。48 h后，尾靜脈注射1 ml卵白蛋白伊文思藍(lán)生理鹽水溶液（2 mg卵白蛋白和10 mg伊文思藍(lán)溶于生理鹽水中），30 min后將小鼠頸椎脫臼處死，剝離皮膚測(cè)定藍(lán)斑直徑，藍(lán)斑直徑大于5 mm判定為陽(yáng)性反應(yīng)，提示動(dòng)物已被致敏，并可繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2給藥治療取造模成功的小鼠，隨機(jī)分為:模型對(duì)照組，鼻炎康組，絲瓜藤高、中、低劑量組，每組10只。另設(shè)10只為空白對(duì)照組。絲瓜藤高、中、低劑量組的劑量分別為3.46，1.73，0.865/kg；鼻炎康組劑量為0.64 g/kg；模型對(duì)照組和空白對(duì)照組用等體積的生理鹽水灌胃，連續(xù)用藥10 d。在給藥期間，除空白對(duì)照組外，余組小鼠每隔1天用1%OVA溶液霧化吸入，激發(fā)維持，霧化時(shí)間為每次灌胃后1 h。

2.3檢測(cè)指標(biāo)于末次給藥后30 min給予1%OVA激發(fā)，激發(fā)后觀察30 min內(nèi)小鼠出現(xiàn)鼻癢、噴嚏、流涕等情況及癥狀輕重，動(dòng)物鼻炎癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。然后摘眼球取血，離心取血清測(cè)定其組胺含量；取小鼠的鼻中隔進(jìn)行鼻黏膜組織病理切片，并選取5個(gè)高倍視野（×1 000）計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞（EOS），計(jì)算其平均值作為該切片的代表值；取外周血作白細(xì)胞分類測(cè)定。

表1　動(dòng)物鼻炎癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理運(yùn)用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間差異采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有顯著性差異。

3　結(jié)果

3.1各組癥狀積分及組胺含量、鼻黏膜EOS計(jì)數(shù)結(jié)果

見(jiàn)表2。

表2　各組癥狀改善及組胺含量、鼻黏膜EOS計(jì)數(shù)（±s，n=10）

表2　各組癥狀改善及組胺含量、鼻黏膜EOS計(jì)數(shù)（±s，n=10）

注:與空白組比較，①P＜0.05；與模型組比較，②P＜0.05；下同

組別劑量（g/kg）空白對(duì)照組—模型對(duì)照組—鼻炎康組　0.64絲瓜藤低劑量組　0.865絲瓜藤中劑量組　1.73絲瓜藤高劑量組　3.46癥狀積分（分）組胺含量（μg/ml）鼻黏膜EOS（個(gè)/HP）0.60±0.84　0.6237±0.3347　0.70±0.67 7.20±1.14①　1.6046±0.1349①　4.80±0.79①1.30±0.48②　0.7689±0.3397②　2.80±0.63②2.20±0.63②　1.2619±0.0162②　1.70±0.48②1.90±0.73②　1.0630±0.0235②　1.50±0.53②1.70±0.82②　0.8674±0.0256②　1.10±0.57②

表2癥狀積分結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組癥狀積分明顯升高（P＜0.05）；與模型對(duì)照組比較，絲瓜藤各劑量組及鼻炎康組癥狀積分顯著下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明用藥后癥狀得以明顯緩解。

組胺含量測(cè)定及鼻黏膜EOS計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，模型對(duì)照組組胺含量及鼻黏膜EOS計(jì)數(shù)明顯高于空白對(duì)照組（P＜0.05）；與模型對(duì)照組比較，絲瓜藤各劑量組及鼻炎康組組胺含量及鼻黏膜EOS計(jì)數(shù)顯著下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3.2各組白細(xì)胞分類測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　各組白細(xì)胞分類測(cè)定結(jié)果（±s，n=10）

表3　各組白細(xì)胞分類測(cè)定結(jié)果（±s，n=10）

組　別劑量（g/kg）　嗜中性粒細(xì)胞（%）　嗜堿性粒細(xì)胞（%）　嗜酸性粒細(xì)胞（%）　淋巴細(xì)胞（%）　單核細(xì)胞（%）空白對(duì)照組模型對(duì)照組鼻炎康組絲瓜藤低劑量組絲瓜藤中劑量組絲瓜藤高劑量組--0.64 0.865 1.73 3.46 0.90±0.74　0.10±0.32　0.20±0.42　3.90±0.99　0.30±0.15 11.90±1.20①　11.10±1.20①　9.60±0.97①　10.70±1.25①　8.10±0.88①2.80±0.92②　2.60±0.70②　1.80±0.79②　3.80±0.79②　1.20±0.79②5.20±1.32②　6.90±0.88②　5.10±0.74②　7.50±0.85②　4.70±0.95②3.00±0.82②　5.10±0.74②　3.90±0.88②　6.90±0.74②　1.90±0.74②1.20±0.79②　3.00±0.82②　2.90±0.74②　4.90±0.74②　1.20±0.79②

表3結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組各類白細(xì)胞含量均明顯升高（P＜0.05）；而各用藥組中各類白細(xì)胞含量均有不同程度的下降，與模型對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。

3.3各組鼻黏膜病理切片圖見(jiàn)圖1。

圖1　各組鼻黏膜病理切片特征（HE染色，×40）

圖1顯示，空白對(duì)照組黏膜上皮未見(jiàn)增厚，黏膜下層未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；模型對(duì)照組黏膜上皮明顯增厚，并見(jiàn)黏膜下層大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（注:箭頭所指的為嗜酸性細(xì)胞）；鼻炎康組黏膜上皮增厚，黏膜下層嗜酸性粒細(xì)胞較模型對(duì)照組少；絲瓜藤低劑量組黏膜下層嗜酸性粒細(xì)胞減少；絲瓜藤中劑量組嗜酸性粒細(xì)胞較模型對(duì)照組大量減少，但黏膜上皮層及黏膜下層增厚，腺體增多；絲瓜藤高劑量組未見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，但黏膜上皮層及黏膜下層增厚，腺體增多較中劑量組少。

4　討論

AR是IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性疾病，其發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，有多種炎癥細(xì)胞及多種細(xì)胞因子參與，其中EOS作為變態(tài)反應(yīng)主要效應(yīng)細(xì)胞，其功能與其所產(chǎn)生和釋放的化學(xué)性介質(zhì)、顆粒相關(guān)蛋白和某些細(xì)胞因子有關(guān)。本試驗(yàn)研究顯示，絲瓜藤提取物能降低鼻黏膜中EOS計(jì)數(shù)，改善小鼠鼻炎癥狀。

組胺是肥大細(xì)胞釋放的主要炎性介質(zhì)，是引起AR鼻癢、流涕和噴嚏癥狀的主要原因之一，組胺與鼻腔上皮細(xì)胞中的Hl受體結(jié)合，引起血管通透性增加和腺體分泌亢進(jìn)，出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)的癥狀。因此組胺在AR的發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，AR模型對(duì)照組血清中組胺的含量明顯高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明AR發(fā)病時(shí)小鼠血清中組胺明顯增多，使小鼠鼻黏膜毛細(xì)血管通透性增加，腺體分泌增多，產(chǎn)生并加重變態(tài)炎癥性反應(yīng)。用藥后，與模型對(duì)照組比較，鼻炎康組及絲瓜藤高、中、低劑量組血清中組胺水平均顯著降低（P＜0.05），表明鼻炎康和絲瓜藤提取物均能顯著降低鼻炎小鼠血清中的組胺水平，使炎性介質(zhì)的釋放減少，并減少對(duì)鼻黏膜及其血管和腺體的刺激，減輕過(guò)敏反應(yīng)癥狀，從而達(dá)到治療AR的目的。

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（編輯陳明偉）

中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2095-4441（2015）02-0001-03

收稿日期:2015-02-18

基金項(xiàng)目:廣西衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技專項(xiàng)課題（編號(hào):GZKZ10-037）

作者簡(jiǎn)介:陳衛(wèi)衛(wèi)（1969-），女，廣西北流人，教授，研究方向:新劑型、新制劑的研究

通信作者:李海濤，E-mail:lihaitao0003@sina.com

Study on the Mechanism of extracts in vine of Luffa on the Treatment of Allergic Rhinitis

CHEN Wei-wei1，2，LIANG Di1，LI Hai-tao2，LIANG Xiu-zhen1，LIU Hua-gang3，LI Yuan1
（1.Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning，Guangxi，530001；2.Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing，Jiangsu，210029；3.Guangxi Food and Drug Administration，Nanning，Guangxi，530001）

Abstract:［Objective］To investigate the curative effects and its mechanism of extracts in vine of Luffa on the treatment of allergic rhinitis.［Methods］The mice model of allergic rhinitis were induced by ovalbumin and Al（OH）3so as to observe the symptoms of the mice and pathological changes of nasal mucosal morphology and to detect the histamine content and eosinophils of the nasal mucosa in the serum after 10 days of drenching corresponding drugs.［Results］The extracts in vine of Luffa can effectively change pathological alteration of nasal mucosa in rhinitis mice and reduce histamine levels and eosinophils of the nasal mucosa in the serum so as to cure rhinitis.［Conclusion］The functional mechanism of vine of Luffa in treating rhinitis can be achieved through decreasing histamine and eosnophils.

Keywords:Vine of Luffa；Allergic Rhinitis；Ovalbumin；Functional Mechanism