• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同處理?xiàng)l件下絞股藍(lán)多糖含量的測(cè)定與比較

    2015-08-10 09:15:24李瑞娟史萬(wàn)玉
    中獸醫(yī)學(xué)雜志 2015年2期
    關(guān)鍵詞:粗品超微粉沉淀物

    習(xí) 南,康 佳,李瑞娟,史萬(wàn)玉

    (河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,保定071000)

    絞股藍(lán)(Gynostemma pentaphyllum),別名七葉膽、小苦藥、甘草蔓、福音草,屬葫蘆科多年草質(zhì)藤本植物[1],主要分布于長(zhǎng)江以南各省區(qū)?,F(xiàn)代藥理研究和臨床應(yīng)用證明,絞股藍(lán)在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、抗突變、抗腫瘤、抗氧化、調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)中樞神經(jīng)和心血管系統(tǒng)保護(hù)等多個(gè)方面具有較好的生物活性。而且有報(bào)導(dǎo)絞股藍(lán)多糖具有抗癌活性、顯著地免疫促進(jìn)作用、抗疲勞、抗氧化、抗衰老、降血糖作用等藥理活性[2]。隨著絞股藍(lán)多糖藥理活性的不斷發(fā)現(xiàn)和證實(shí),絞股藍(lán)多糖越來(lái)越受到人們的關(guān)注的同時(shí),其提取工藝也成為研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)不同方法提取絞股藍(lán)多糖,并對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定和比較,從而研得更為高效、經(jīng)濟(jì)的絞股藍(lán)處理方法以獲得絞股藍(lán)多糖得率的最大化,為絞股藍(lán)多糖的開(kāi)發(fā)利用提取依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 中藥 絞股藍(lán)飲片,絞股藍(lán)葉超微粉,絞股藍(lán)梗超微粉,4%絞股藍(lán)一次發(fā)酵液,4%絞股藍(lán)二次發(fā)酵液,由本院中獸醫(yī)試驗(yàn)室提供。

    1.1.2 主要試劑 葡萄糖對(duì)照品,購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所;蒽酮、無(wú)水乙醇、石油醚、濃硫酸,購(gòu)自保定市賽爾克試劑公司;蒸餾水,自制。

    1.1.3 主要儀器 UV1750紫外分光光度計(jì)(日本島津);冷凍干燥機(jī)(北京松源華興科技發(fā)展有限公司);101-3AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司);MP200A分析天平(雙圈牌)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 飲片中絞股藍(lán)多糖的提取方法

    (1) 水煎煮法 稱取絞股藍(lán)飲片50g,加600m l蒸餾水,煎煮2次,每次1h,過(guò)濾,合并濾液。將濾液濃縮到100ml,加入乙醇,使濾液中的乙醇含量達(dá)到70%,置4℃冰箱中放置24h,過(guò)濾。將過(guò)濾后的沉淀物加500ml蒸餾水溶解,加熱濃縮到50ml,再加入乙醇,使其乙醇含量達(dá)到80%,置4℃冰箱靜置24h,過(guò)濾。將沉淀物用無(wú)水乙醇洗滌2-3次,真空干燥,得絞股藍(lán)多糖粗品,并稱重備用[3]。

    (2)水提法稱取絞股藍(lán)飲片50g,加600ml蒸餾水,90℃回流提取2次,每次2h,過(guò)濾,合并濾液。將濾液濃縮到100ml,加入乙醇,使濾液中的乙醇含量達(dá)到70%,置4℃冰箱中放置24h,過(guò)濾。將過(guò)濾后的沉淀物加500ml蒸餾水溶解,加熱濃縮到50ml,再加入乙醇,使其乙醇含量達(dá)到80%,置4℃靜置24h,過(guò)濾。將沉淀物用無(wú)水乙醇洗滌2-3次,真空干燥,得絞股藍(lán)多糖粗品,并稱重備用[4]。

    (3)醇?jí)A提法 稱取絞股藍(lán)飲片50g,加600m l醇?jí)A提取液(5%乙醇用NaOH調(diào)pH至12),90℃回流提取2次,每次2h,過(guò)濾,合并濾液。將濾液濃縮到100ml,加入乙醇,使濾液中的乙醇含量達(dá)到70%,置4℃冰箱中放置24h,過(guò)濾。將過(guò)濾后的沉淀物加500ml蒸餾水溶解,加熱濃縮到50ml,再加入乙醇,使其乙醇含量達(dá)到80%,置4℃冰箱靜置24h,過(guò)濾。將沉淀物用無(wú)水乙醇洗滌2-3次,真空干燥,得絞股藍(lán)多糖粗品,并稱重備用[5]。

    (4)醇處理水提方法 稱取絞股藍(lán)飲片50g,加500ml80%乙醇回流提取2次,每次1h,過(guò)濾,棄醇提液,再加600ml的蒸餾水90℃回流提取2次,每次2h,過(guò)濾,合并濾液。將濾液濃縮到100ml,并在其中加入乙醇,使濾液中的乙醇含量達(dá)到70%,置4℃冰箱中放置24h,過(guò)濾。將過(guò)濾后的沉淀物加500ml蒸餾水溶解,加熱濃縮到50ml,再加入乙醇,使其乙醇含量達(dá)到80%,置4℃冰箱靜置24h,過(guò)濾。將沉淀物用無(wú)水乙醇洗滌2-3次,真空干燥,得絞股藍(lán)多糖粗品,并稱重備用[6]。

    (5)石油醚醇處理水提法 稱取絞股藍(lán)飲片50g,先加500ml的石油醚,回流提取2次,每次1h。棄去提取液,再加500ml80%乙醇回流提取2次,每次1h。棄去提取液加600ml蒸餾水,90℃回流提取2次,每次2h,過(guò)濾,合并濾液。將濾液濃縮到100ml,并在其中加入乙醇,使濾液中的乙醇含量達(dá)到70%,置4℃冰箱中放置24h,過(guò)濾。將過(guò)濾后的沉淀物加500ml蒸餾水溶解,加熱濃縮到50m l,再加入乙醇,使其乙醇含量達(dá)到80%,置4℃靜置24h,過(guò)濾。將沉淀物用無(wú)水乙醇洗滌2-3次,真空干燥,得絞股藍(lán)多糖粗品,并稱重備用[7]。1.2.2 絞股藍(lán)多糖的含量測(cè)定 (1)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的配制精密稱取干燥至恒定質(zhì)量的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品200mg,定溶1000ml容量瓶中,即得葡萄糖標(biāo)液。

    (2)蒽酮硫酸溶液的配制 精密稱取蒽酮200mg,溶解于100ml濃硫酸中,即得0.2%的蒽酮硫酸溶液。

    (3)最大吸收波長(zhǎng)的選擇 采用蒽酮-濃硫酸比色法。精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液30ml,置于100ml容量瓶中定容。取稀釋后的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液1ml于試管中,再加入4ml的蒽酮硫酸溶液(冰水浴中進(jìn)行),各管加完后一起浸入沸水中,自水重新沸起準(zhǔn)確煮沸10min,立即冷卻到室溫。另以未加葡萄糖的溶液為參比,于紫外分光光度計(jì)上從400-700 nm范圍內(nèi)掃描。比較此范圍內(nèi)的吸光度大小,確定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的最大吸收波長(zhǎng)。

    (4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密移取葡萄糖標(biāo)液10、20、30、40、50m l置于100ml容量瓶中定容。按上述蒽酮-濃硫酸比色法操作,顯色后于紫外分光光度計(jì)上620nm處測(cè)定其吸光度A,以A為縱坐標(biāo),C(對(duì)照品的濃度)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計(jì)算回歸方程[8]。

    圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

    (5)樣品多糖含量測(cè)定分別精密稱取不同方法得到的干燥的多糖粗品20mg,于100m l容量瓶中定容得樣品溶液。按上述蒽酮-濃硫酸比色法操作,顯色后于紫外分光光度計(jì)上620nm處測(cè)定其吸光度。進(jìn)而計(jì)算出絞股藍(lán)全草中絞股藍(lán)多糖的含量,從而確定出最佳提取方案。

    1.2.3 絞股藍(lán)超微粉與發(fā)酵液中多糖的提取與含量測(cè)定 稱取絞股藍(lán)葉與梗的超微粉各50g分別按上述所得的最佳提取方法進(jìn)行試驗(yàn)操作,得絞股藍(lán)多糖粗品后按2.2.2(3)中蒽酮-濃硫酸比色法操作,顯色后于紫外分光光度計(jì)上620nm處測(cè)定其吸光度。然后分別計(jì)算出絞股藍(lán)梗、葉細(xì)粉中提取的絞股藍(lán)多糖粗品中絞股藍(lán)多糖的含量進(jìn)行比較。

    絞股藍(lán)發(fā)酵液采用直接醇沉處理提取絞股藍(lán)多糖。量取4%絞股藍(lán)一次發(fā)酵液與4%絞股藍(lán)二次發(fā)酵液各1000ml,濾除殘?jiān)髮V液濃縮至100ml,并在其中加入乙醇,使濾液中的乙醇含量達(dá)到70%,置4℃冰箱中放置24h,過(guò)濾。將過(guò)濾后的沉淀物加500ml蒸餾水溶解,加熱濃縮到50ml,再加入乙醇,使其乙醇含量達(dá)到80%,置4℃靜置24h,過(guò)濾。將沉淀物用無(wú)水乙醇洗滌2-3次,真空干燥,得多糖粗品,稱重。然后按2.2.2(3)中蒽酮-濃硫酸比色法操作,顯色后于紫外分光光度計(jì)上620nm處測(cè)定其吸光度,進(jìn)而計(jì)算出發(fā)酵液中絞股藍(lán)多糖含量。

    2 結(jié)果

    2.1 最大吸收波長(zhǎng)的選擇結(jié)果 經(jīng)紫外分光光度計(jì)在400-700nm范圍內(nèi)測(cè)定吸光度,得知葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大吸收波長(zhǎng)為620nm。

    2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 經(jīng)紫外分光光度計(jì)在620nm處測(cè)定不同濃度對(duì)照品吸光度A,以A為縱坐標(biāo),C(對(duì)照品的濃度)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1,得回歸方程:A=7.4261C+0.0937,R2=0.9943。

    2.3 不同方法提取的絞股藍(lán)飲片中多糖粗品的含量 經(jīng)紫外分光光度計(jì)測(cè)定吸光度后,計(jì)算得知不同方法提取的絞股藍(lán)飲片中絞股藍(lán)多糖粗品的含量,如表1所示,醇?jí)A提法測(cè)定的絞股藍(lán)多糖粗品的含量最高為49.1400mg/g。

    2.4 不同部位的絞股藍(lán)粗多糖的含量 由表1和表2可以看出,絞股藍(lán)發(fā)酵液含量最高,超微粉次之,飲片中含量最低。并且絞股藍(lán)葉超微粉中多糖粗品含量明顯高于梗超微粉,二次發(fā)酵液絞股藍(lán)多糖粗品含量顯著高于一次發(fā)酵液。

    2.5 不同方法提取的絞股藍(lán)飲片多糖粗品中絞股藍(lán)多糖的含量 通過(guò)計(jì)算得知絞股藍(lán)飲片粗多糖中絞股藍(lán)多糖的含量,如表3所示,醇?jí)A提法測(cè)定的多糖純度最高。比較絞股藍(lán)飲片、超微粉、發(fā)酵液中絞股藍(lán)多糖純度,如表4所示,以絞股藍(lán)發(fā)酵液含量最高,超微粉次之,飲片中含量最低。并且絞股藍(lán)葉超微粉中多糖粗品含量明顯高于梗超微粉,二次發(fā)酵液絞股藍(lán)多糖粗品含量顯著高于一次發(fā)酵液。

    表1 絞股藍(lán)飲片中絞股藍(lán)粗多糖含量(mg/g)

    表2 超微粉/發(fā)酵液中絞股藍(lán)粗多糖含量(mg/g)

    表3 不同提取方法絞股藍(lán)粗多糖中絞股藍(lán)多糖含量(g/g)

    表4 絞股藍(lán)多糖粗品中絞股藍(lán)多糖的含量(g/g)

    3 討論與小結(jié)

    在本實(shí)驗(yàn)中,比較五種提取方法所得的絞股藍(lán)多糖的含量發(fā)現(xiàn),醇?jí)A提法是最佳的提取方法。這可能是是由于堿溶液對(duì)植物細(xì)胞起到破壁作用,醇溶液滲透作用較強(qiáng),在堿與醇的共同作用下,增加了多糖滲透率,降低多糖殘留量,達(dá)到提高提取率的目的[9];多糖粗品的多糖含量最高有可能是醇?jí)A液中的乙醇可以溶解掉多糖中的單糖的緣故。水煎煮得到的絞股藍(lán)多糖稍少可能是因?yàn)榻g股藍(lán)多糖隨水蒸汽蒸發(fā)到了環(huán)境中。醇處理,石油醚醇處理方法得到的絞股藍(lán)多糖含量低于其他方法,也許是乙醇可以充分溶解絞股藍(lán)中的葡萄糖。

    絞股藍(lán)超微粉中絞股藍(lán)多糖的含量明顯多于絞股藍(lán)飲片。超微粉碎技術(shù)能在一定程度上破壞絞股藍(lán)細(xì)胞壁,從而減少有效成分由內(nèi)向外傳遞的的阻力,增加了植物細(xì)胞的比表面積,使絞股藍(lán)粉體有效成分溶出更迅速,徹底[10]。

    絞股藍(lán)葉與梗中的絞股藍(lán)多糖含量的比較證明,常常被人們棄之不用的絞股藍(lán)梗莖中仍然還有較高量的絞股藍(lán)有效成分,具有一定的藥用價(jià)值,我們應(yīng)該合理利用絞股藍(lán)梗莖,可以大大降低用藥成本,也可以降低用藥緊張的矛盾。

    絞股藍(lán)液體發(fā)酵時(shí),除菌絲體的大量繁殖外,同時(shí)還向液體培養(yǎng)基分泌了大量的胞外多糖,故而絞股藍(lán)發(fā)酵液提取的絞股藍(lán)多糖尤為多,并且二次發(fā)酵比之一次發(fā)酵提取的多糖更多[11]。

    [1]蔡金騰,丁筑紅,雷方俊,等.高VC復(fù)合絞股藍(lán)袋泡茶的研制[J].食品科學(xué),1996,6(2):37-40.

    [2]李艷茹.絞股藍(lán)多糖對(duì)疲勞運(yùn)動(dòng)小鼠免疫能力的影響[J].食品科學(xué),2008,29(8):584-586.

    [3]倪艷,蘇強(qiáng).黃芪多糖水煎提取工藝的優(yōu)化試驗(yàn)研究[J].中國(guó)中藥雜志,1998,23(5):284-286.

    [4]田洛.醇?jí)A提取法提取黃芪多糖的優(yōu)化試驗(yàn)研究[J].中國(guó)中藥雜志,2000,23(5):22-24.

    [5]吳永平,曹園,曹正中.黃芪活性成分最佳提取工藝探討[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2001,12(10):876-877.

    [6]張洪波,任春曉.黃芪葉提取及黃芪多糖測(cè)定方法研究[J].黑龍江醫(yī)藥,2005,18(1):6-8.

    [7]王昶,邢志華,王青.黃芪地上部分中多糖含量的研究[J].黑龍江醫(yī)藥,2006,19(5):343-344.

    [8]王青豪,潘虹,楊宇飛,等.從絞股藍(lán)中聯(lián)合提取皂苷、黃酮和多糖工藝優(yōu)化[J].食品科學(xué),2012,33(22):63-66.

    [9]張先海,史麗巖,史景明.不同方法提取黃芪中黃芪多糖的比較[J].海峽藥學(xué),2010,22(10):79-80.

    [10]鄧美琳,吳天祥.超微粉碎對(duì)絞股藍(lán)總皂苷提取工藝的影響[T].食品工業(yè),2009,2:34-36.

    [11]田瑤,王玉華.茯苓發(fā)酵液中多糖的提取分離[T].科技,2012:10.

    猜你喜歡
    粗品超微粉沉淀物
    復(fù)合雜糧超微粉微膠囊化工藝的研究
    高濃度硫酸體系中鈾與鐵的HDEHP萃取分離
    濕法冶金(2018年6期)2018-12-13 09:19:58
    抗氧化紫球藻胞外多糖酶解物制備工藝優(yōu)化
    廣藿香超微粉表面包覆技術(shù)工藝的優(yōu)化
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:35
    胸腔積液沉淀物在惡性胸腔積液診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值
    浙貝母超微粉、粗粉和飲片中3 種生物堿體外溶出度的比較
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    沉淀物對(duì)安塞油田原油計(jì)量的影響及應(yīng)對(duì)措施
    蒙藏醫(yī)傳統(tǒng)藥浴超微粉中槲皮素的定性與定量研究
    橡膠硫化促進(jìn)劑TBBS制備方法
    針對(duì)乙酰吉他霉素的工藝研究
    北海市| 上饶市| 灵台县| 寿宁县| 金秀| 平谷区| 英吉沙县| 蚌埠市| 萨迦县| 西峡县| 苏州市| 承德县| 徐闻县| 民权县| 咸宁市| 永宁县| 报价| 长春市| 乌兰察布市| 溧水县| 普宁市| 当涂县| 奉贤区| 同德县| 密山市| 石门县| 卓尼县| 海阳市| 吉木萨尔县| 三台县| 新蔡县| 南乐县| 寿光市| 青海省| 勃利县| 商南县| 益阳市| 那曲县| 绥化市| 麟游县| 奉新县|