PKC-a、K-Ras蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義

王 燕 趙月霞 (寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，寧夏 銀川 750004)

腫瘤形成的原因是由于原癌基因激發(fā)活性與抑癌基因失去活性聯(lián)合作用而形成〔1〕。蛋白激酶 C(PKC)主要是參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、對(duì)細(xì)胞增殖進(jìn)行調(diào)控、促進(jìn)腫瘤發(fā)生〔2〕。PKC-a屬于PKC的亞型，主要作用于胞質(zhì)到胞核的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，發(fā)揮著關(guān)鍵作用〔3〕。Ras基因存在于機(jī)體大部分細(xì)胞中，臨床研究顯示，K-Ras屬于最常被激活的原癌基因，在結(jié)直腸癌患者中顯示，K-Ras基因突變率達(dá)到14%～42%〔4〕。通過探討PKC-a、K-Ras蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其意義，取得了良好效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院病理科收集的結(jié)直腸組織石蠟包埋標(biāo)本，其中結(jié)直腸腺癌組織70例(腺癌組)，男32例，女38例;年齡35～82〔平均(67.2±14.9)〕歲，按照病理類型進(jìn)行劃分:高分化腺腫瘤24例，中分化腺腫瘤31例，低分化腺腫瘤15例，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者37例;按照Dukes進(jìn)行分期:其中A期12例，B期20例，C+D期38例?；颊呓?jīng)術(shù)后病理診斷均符合直腸癌斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕。另選取結(jié)直腸腺瘤組織12例(腺瘤組)及正常結(jié)直腸黏膜8例(正常組)。

1.2 方法 主要實(shí)驗(yàn)試劑:PKC-a、K-Ras試劑盒，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒，由博士德生物公司提供。檸檬酸抗原修復(fù)液(0.01 mol/L，pH 6.0)、磷酸鹽緩沖液(PBS)(0.01 mol/L，pH7.2～7.4)。免疫組織化學(xué)法:采用石蠟切片機(jī)對(duì)蠟塊進(jìn)行切片處理，厚度為4 μm。采用PV-9000法對(duì) PKC-a、K-Ras蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。PKC-a、K-Ras的稀釋度分別為 1∶100、1∶200，給予檸檬酸抗原修復(fù)，DAB試劑進(jìn)行顯色;使用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，使用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) ①PKC-a蛋白〔6，7〕:PKC-a蛋白表達(dá)結(jié)果評(píng)估根據(jù)染色強(qiáng)度以及陽(yáng)性細(xì)胞所占比例。染色強(qiáng)度:未染色表示細(xì)胞0分，淺黃色表示1分，棕黃色表示2分，棕褐色表示3分。陽(yáng)性細(xì)胞所占比例:0分表示陰性，1分表示陽(yáng)性細(xì)胞≤10% ，2分表示陽(yáng)性細(xì)胞11%～50% ，3分表示陽(yáng)性細(xì)胞51%～75% ，4分表示陽(yáng)性細(xì)胞≥75% ，染色強(qiáng)度×陽(yáng)性細(xì)胞所占比例≥2分評(píng)估為陽(yáng)性。②K-Ras蛋白〔8〕:無著色細(xì)胞表示“－”，著色細(xì)胞在10%～30%之間表示“+”，著色細(xì)胞在30%～50% 之間表示“”，著色細(xì)胞在 ＞50% 表示“”?！埃薄ⅰ?”評(píng)估為陰性表達(dá)，“”、“”評(píng)估為陽(yáng)性表達(dá)。分析PKC-a、K-Ras蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理相關(guān)性及PKC-a與K-Ras表達(dá)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化結(jié)果 PKC-a蛋白表達(dá):免疫陽(yáng)性物質(zhì)多聚集于細(xì)胞質(zhì)與部分細(xì)胞膜位置，主要表現(xiàn)為棕黃色顆粒沉著。腺癌組PKC-a蛋白陽(yáng)性表達(dá)率31.42%(22/70)、腺瘤組50.00%(6/12)、正常組25.00%(2/8)，腺癌組明顯低于腺瘤組與正常組(P＜0.05)。K-Ras蛋白表達(dá):免疫陽(yáng)性物質(zhì)多聚集于細(xì)胞質(zhì)。腺癌組K-Ras蛋白陽(yáng)性表達(dá)率52.85%(37/70)、腺瘤組58.33%(7/12)，正常組為25.00%(2/8);腺癌組及腺瘤組明顯高于正常組(P＜0.05)。

2.2 PKC-a、K-Ras蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理相關(guān)性分析PKC-a蛋白陽(yáng)性率與組織病理學(xué)分級(jí)、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性(P＜0.05);K-Ras蛋白陽(yáng)性率與組織病理學(xué)分級(jí)存在相關(guān)性(P＜0.05)。K-Ras蛋白表達(dá)與PKC-a蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(r= －0.734，P=0.00)。見表1。

表1 PKC-a、K-Ras蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理相關(guān)性分析〔n(%)〕

3 討論

腫瘤的形成發(fā)展過程是多種因素共同作用的結(jié)果，其中包括先天遺傳的變更、后天基因的改變以及基因轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行等〔9〕。機(jī)體正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤細(xì)胞的過程中會(huì)失去細(xì)胞本身具有的性質(zhì)，同時(shí)得到了腫瘤細(xì)胞具有的性質(zhì)，在整個(gè)過程中包含了腫瘤基因的活化以及多個(gè)抑制腫瘤基因的失活。

研究〔10〕表明，PKC的主要作用是促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及激素的分泌、基因表達(dá)等。PKC-a是PKC的重要亞型之一，也是人體細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中的重要分子，其作用對(duì)胞質(zhì)到胞核的信號(hào)進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)。臨床研究〔11〕顯示，PKC-a在不同類型的腫瘤中，其表達(dá)也是存在差異的。PKC-a在肝細(xì)胞腫瘤、惡性膠質(zhì)腫瘤、肺部腫瘤等腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，且可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，同時(shí)抑制腫瘤細(xì)胞凋亡及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的進(jìn)一步分化。但在大腸腫瘤中卻呈現(xiàn)出低表達(dá)〔12〕。

K-ras是機(jī)體內(nèi)最易被激活的原腫瘤基因，基因突變?cè)诮Y(jié)腸腫瘤、胰腺腫瘤以及肺部腫瘤的發(fā)生率比較高。本研究表明，PKC-a蛋白在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著抑制癌基因作用，K-Ras發(fā)揮著原腫瘤基因的作用。

綜上所述，在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，PKC-a、K-Ras蛋白發(fā)揮著重要的作用，兩者的平衡紊亂會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞癌變。

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