實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)偶聯(lián)高特異性核酸侵入反應(yīng)檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性

鄭夢(mèng)琳等

摘 要 建立了實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）偶聯(lián)高特性核酸侵入反應(yīng)檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性（SNP）的方法。優(yōu)化了體系中flap核酸內(nèi)切酶1（FEN1酶）和野生型檢測(cè)探針等用量，確定了最佳反應(yīng)條件，即FEN1酶用量為1.5 U，野生型檢測(cè)探針用量為0.125 μmol/L，0.5 μmol/L Invader突變型檢測(cè)探針，各0.25 μmol/L通用野生型（VIC）和突變型（FAM）熒光共振轉(zhuǎn)移發(fā)卡探針，顯著降低了野生型樣本和突變型樣本背景信號(hào)，避免了背景信號(hào)對(duì)檢測(cè)結(jié)果分型的干擾。采用本方法對(duì)編碼乙醛脫氫酶2（ALDH2）基因ALDH2*2位點(diǎn)21例樣本、細(xì)胞色素P450 2C19基因CYP2C19*2和CYP2C19*3位點(diǎn)各19例樣本進(jìn)行分型檢測(cè)，結(jié)果表明， ALDH2*2位點(diǎn)GG純合10例，GA雜合8例，AA純合3例；CYP2C19*2位點(diǎn)GG純合9例，GA雜合8例，AA純合2例；CYP2C19*3位點(diǎn)GG純合18例，GA雜合1例。使用焦磷酸測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證，兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致。本方法特異性好、操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短、成本低，可實(shí)現(xiàn)對(duì)SNP單管閉管無(wú)污染的分型檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 實(shí)時(shí)熒光PCR； 核酸侵入反應(yīng)； 單核苷酸多態(tài)性； 乙醛脫氫酶2基因； 細(xì)胞色素P450 2C19基因