熱療聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效觀察△

包秀芳

內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古通遼028000

熱療聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效觀察△

包秀芳

內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古通遼028000

目的探討熱療聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效。方法將79例卵巢癌伴惡性腹腔積液患者按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對(duì)照組（n=39）與觀察組（n=40），對(duì)照組僅采用順鉑進(jìn)行常規(guī)治療，觀察組在此基礎(chǔ)上聯(lián)合熱療進(jìn)行治療。比較兩組療效、治療48 h后SKOV3細(xì)胞凋亡情況、治療前后免疫功能相關(guān)指標(biāo)水平、生活質(zhì)量及不良反應(yīng)發(fā)生情況。結(jié)果①對(duì)照組臨床總緩解率為58.97%，低于觀察組的77.50%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；②觀察組治療48 h后SKOV3細(xì)胞凋亡率為72.5%，高于對(duì)照組的46.15%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；③觀察組治療后CD4及CD4/CD8水平均高于治療前及對(duì)照組治療后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），對(duì)照組治療前后各免疫功能指標(biāo)水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；④根據(jù)SF-12生活量表評(píng)分，觀察組患者生活量表相關(guān)維度（總體健康、情感職能、軀體疼痛及精神健康）評(píng)分均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；⑤對(duì)照組不良反應(yīng)發(fā)生率為38.46%，觀察組為35.00%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論熱療聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效顯著。

卵巢癌；熱療；順鉑；惡性腹腔積液；SF-12生活量表

Oncol Prog,2015,13(6)

惡性腹腔積液（malignant peritoneal ascites，MPE）指的是由卵巢癌、肝癌及其他惡性腫瘤累及腹膜而造成的腹腔內(nèi)液體的異常并發(fā)癥之一[1]，特別是以卵巢癌以及肝癌患者居多。腫瘤造成毛細(xì)血管通透性增大以及淋巴回流減少是MPE產(chǎn)生的重要原因。由于MPE生長(zhǎng)速度較快，可造成食欲降低、腹部疼痛、惡心、嘔吐、呼吸窘迫等不良癥狀，進(jìn)而導(dǎo)致惡液質(zhì)、心肺功能障礙等并發(fā)癥，對(duì)患者生活質(zhì)量造成嚴(yán)重的影響[2]。臨床上，25%～50%的卵巢癌患者晚期會(huì)出現(xiàn)不同程度的MPE。所以，對(duì)MPE進(jìn)行有效的控制，對(duì)改善卵巢癌患者生存質(zhì)量及延長(zhǎng)患者生存周期具有十分重要的臨床價(jià)值與意義。本研究采用熱療聯(lián)合順鉑方案對(duì)卵巢癌患者進(jìn)行治療，探討了該方案對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

入組2009年9月至2014年12月內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院的79例卵巢MPE住院患者。納入標(biāo)準(zhǔn)[3]：①患者均經(jīng)病理學(xué)診斷確診，且經(jīng)B超、CT或X線檢查證實(shí)為中等至大量腹腔積液；②患者均于1個(gè)月之內(nèi)未接受化療或放療治療，KPS評(píng)分在50分以上，均無(wú)化療禁忌癥者；③心電圖、肝腎功能以及血常規(guī)檢查等正常者；④所有患者均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)[4]：①合并嚴(yán)重的心臟疾病；②體溫≥38℃；③肌酐清除率＜60m l/m in；④WBC＜4×109/L，且PLT＜75.0×109/L；⑤腹腔灌注藥物史；⑥患者不知情。按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)將79例患者分為對(duì)照組（n=39）與觀察組（n=40），兩組患者基本特征見(jiàn)表1。由表1可知，兩組患者的基本特征差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 治療方法及療效評(píng)價(jià)

1.2.1治療方法經(jīng)B超定位之后常規(guī)腹腔置管，注藥前應(yīng)該盡量減少腹腔積液，將25mg/m2順鉑溶解于42℃的0.9%NaCl 2000 m l中，劑量為12.5mg，1次/周，連續(xù)三周為一個(gè)療程，將混合液灌入腹腔之中，然后腹腔內(nèi)注入5.0mg地塞米松、濃度為2%利多卡因2m l緩解腹膜粘連，灌注之后封管，囑患者多次進(jìn)行變換體位。觀察組應(yīng)用濃度為42%條件下微波熱療1 h，灌注1次/周，連續(xù)三周為一個(gè)療程，休息1周，連續(xù)使用兩個(gè)療程后對(duì)療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)照組僅采用順鉑進(jìn)行治療。

1.2.2臨床療效評(píng)價(jià)[5]①完全緩解（complete Rem ission,CR）：腹腔積液消失且持續(xù)時(shí)間≥4周；②部分緩解（partial rem ission,PR）：腹水減少50%以上且持續(xù)在4周以上；③穩(wěn)定（numerical control, NC）：腹水減少50%以下或者增加小于25%以上，且持續(xù)時(shí)間為4周；④無(wú)效（progressive disease, PD）：腹水增加20%，癥狀加劇。臨床總緩解率為完全緩解率與部分緩解率之和。

1.3 細(xì)胞學(xué)檢測(cè)

1.3.1細(xì)胞培養(yǎng) 人卵巢癌SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)于含有10m l/L小牛血清的RPM I-1640培養(yǎng)液中，置于37℃、濃度為5%的CO2的恒溫箱中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

表1 兩組患者基本特征比較

1.3.2噻唑藍(lán)檢測(cè)方法細(xì)胞增殖觀察內(nèi)容主要包括兩種設(shè)計(jì)：①固定熱療時(shí)間：溫度設(shè)置為42℃，加熱溫度為60 m in，觀察順鉑不同濃度時(shí)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率，順鉑濃度分別為0、1、10、20、40、80 ng/m l；②將固定熱療溫度設(shè)置為42℃，熱療時(shí)間依次設(shè)置為0、30、60、90、120m in，并注意對(duì)不同時(shí)間SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率進(jìn)行觀察。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SKOV3細(xì)胞，經(jīng)胰蛋白酶消化，計(jì)數(shù)儀7.0×104/m l的細(xì)胞濃度接種到96孔板中，每孔在100μl、37℃及濃度為5%的CO2恒溫條件下培養(yǎng)24h。順鉑給藥之后，共培養(yǎng)48 h，收集細(xì)胞，用噻唑藍(lán)法對(duì)兩組患者治療后SKOV3細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3流式細(xì)胞儀檢測(cè) 收集兩組經(jīng)過(guò)處理的細(xì)胞，離心之后棄去上清液，PBS沖洗2次。按照雙色細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒上的說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.4 免疫功能相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)方法

采集患者治療前后清晨外周靜脈血3m l，取一定量的新鮮肝素鈉作為抗凝劑備用，主要采用S-P法對(duì)T細(xì)胞亞群相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)分析，具體檢測(cè)方法完全按照試劑盒上的說(shuō)明書進(jìn)行操作。使用高倍鏡對(duì)經(jīng)染色的視野進(jìn)行仔細(xì)觀察，并在此視野下共計(jì)數(shù)200個(gè)單核細(xì)胞；若計(jì)數(shù)的200個(gè)單核細(xì)胞中，表面具有紅色標(biāo)記物則屬于陽(yáng)性細(xì)胞。

1.5 生活質(zhì)量評(píng)價(jià)

采用SF-12生活質(zhì)量評(píng)價(jià)量表，Cronbach’sα系數(shù)為0.88，重測(cè)信度為0.83，主要包括8個(gè)領(lǐng)域：軀體功能、軀體角色、軀體疼痛、總的健康狀況、活力、社會(huì)功能、情緒角色、心理衛(wèi)生，每項(xiàng)分值為1～5分，分值越高，則表明患者生存質(zhì)量越佳[6]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的臨床療效比較

對(duì)照組臨床總緩解率為58.97%，低于觀察組的77.50%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.032），見(jiàn)表2。

表2 兩組臨床療效比較（n，%）

2.2 兩組患者治療48 h后SKOV3細(xì)胞凋亡情況比較

觀察組治療48 h后SKOV3細(xì)胞凋亡率為72.5%，高于對(duì)照組的46.15%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.021），見(jiàn)表3。

表3 兩組患者治療48 h后SKOV3細(xì)胞凋亡情況比較（n，%）

2.3 兩組患者治療前后免疫功能相關(guān)指標(biāo)水平比較

觀察組治療后CD4（%）及CD4/CD8水平均高于治療前及對(duì)照組治療后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 兩組患者治療前后免疫功能相關(guān)指標(biāo)水平比較（±s）

表4 兩組患者治療前后免疫功能相關(guān)指標(biāo)水平比較（±s）

CD3（%）CD4（%）CD8（%）CD4/CD8組別對(duì)照組（n=39）治療前治療后觀察組（n=40）治療前治療后57.19±4.34 56.02±3.89 31.82±2.99 30.03±2.56 25.52±2.08 24.49±1.96 1.27±0.34 1.28±0.38 57.38±4.90 60.29±5.77 31.67±2.72 42.20±3.83 25.45±2.11 22.78±1.78 1.25±0.32 1.87±0.54

2.4 兩組患者治療后生活質(zhì)量對(duì)比

根據(jù)SF-12生活量表評(píng)分，觀察組患者治療后生活量表相關(guān)維度（總體健康、情感職能、軀體疼痛及精神健康）評(píng)分均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1。

2.5 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生率比較

觀察組患者治療過(guò)程中不良反應(yīng)發(fā)生率為35%，對(duì)照組為38.46%，觀察組較低于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表5。

3 討論

卵巢癌是老年女性患者最為常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，其腹腔轉(zhuǎn)移后很容易形成腹腔積液。順鉑腹腔熱灌注是卵巢癌較為常見(jiàn)且有效的臨床治療手段，可有效對(duì)腹腔積液的形成加以控制。順鉑為劑量依賴性藥物，但是大劑量的順鉑往往會(huì)造成嚴(yán)重的不良反應(yīng)，對(duì)順鉑殺傷惡性腫瘤的效果產(chǎn)生了極大的影響[7]。所以，增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑化療的敏感性成為當(dāng)前臨床治療卵巢癌的一個(gè)重要課題。

表5 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生率比較（n，%）

MPE是晚期惡性腫瘤較為常見(jiàn)的一種并發(fā)癥，患者中位生存周期一般為幾周到幾個(gè)月不均，一年生存率在10%以下?；颊咄鶗?huì)由于腹脹、雙下肢重度水腫以及呼吸急促而對(duì)患者的生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重的影響[8]。傳統(tǒng)單一性治療MPE的方法包括腹腔穿刺放液、腹腔內(nèi)局部應(yīng)用化療藥物以及生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑等，具有不良反應(yīng)重、耐受性差以及有效率低等方面的缺陷。由于腹腔提供了局部化療的條件，所以極易獲得水平較高的化療藥物，比全身給藥高數(shù)倍，且能夠在門靜脈以及肝臟內(nèi)形成持續(xù)、高水平的抗癌藥物環(huán)境[9]。同時(shí)，由于化療藥物主要經(jīng)門靜脈吸收，對(duì)門靜脈轉(zhuǎn)移入肝的癌栓以及癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的殺滅功能，而且還延長(zhǎng)了化療藥物與腫瘤的直接接觸時(shí)間，最大限度地發(fā)揮了抗癌效應(yīng)，而且可通過(guò)機(jī)械沖刷性功能，對(duì)腹腔中游離的癌細(xì)胞進(jìn)行清除作用。順鉑作為第一代鉑類抗腫瘤藥物，屬于細(xì)胞周期非特異性藥物，主要與DNA鏈上的堿基作用，從而對(duì)正常復(fù)制模板功能產(chǎn)生影響，導(dǎo)致DNA復(fù)制障礙，從而對(duì)腫瘤細(xì)胞分裂產(chǎn)生抑制性作用。順鉑進(jìn)入腹腔之后不易通過(guò)腹膜屏障，使其在腹腔中的水平比血漿水平高，能夠維持較長(zhǎng)時(shí)間的有效水平，具有廣譜、高滲等方面的特點(diǎn)，屬于一種較為理想的腹腔內(nèi)灌注抗癌類藥物。熱療能夠提供腫瘤內(nèi)化療藥物的濃度，增強(qiáng)藥物的抗癌效應(yīng)，同時(shí)在很大程度上降低了化療藥物對(duì)未加熱正常組織的毒性效果，且利于預(yù)防或者推遲耐藥性的產(chǎn)生，從而起到增效以及減毒等方面的效果。

熱療近年來(lái)逐漸成為繼放化療、生物治療之后的又一腫瘤治療手段，腹腔熱灌注治療成為腹腔腫瘤控制的有效方法，不良反應(yīng)相對(duì)較少，安全性好。有研究證實(shí)，溫?zé)釋?duì)腫瘤細(xì)胞有直接的殺傷作用。熱療聯(lián)合化療可以提高抗腫瘤作用，順鉑是最早被發(fā)現(xiàn)與熱療有協(xié)同作用的化療藥物，腹腔熱灌注順鉑可有效控制腹腔積液生成。熱療可以增加腫瘤細(xì)胞膜的通透性，提供細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度，促進(jìn)DNA與鉑類藥物結(jié)合，抑制DNA的修復(fù)，從而提高化療藥物的殺傷作用，還有助于逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥的發(fā)生。本研究通過(guò)體外研究證實(shí)，熱療能顯著增強(qiáng)順鉑對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞的毒性作用，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，這為卵巢癌熱化療的臨床應(yīng)用提供了理論參考依據(jù)。在臨床實(shí)踐的過(guò)程中，60m in也是患者能夠耐受且不良反應(yīng)小的常用時(shí)間期限。過(guò)度延長(zhǎng)熱療時(shí)間可能帶來(lái)其他不良反應(yīng)且使患者不易耐受。

熱療聯(lián)合順鉑治療卵巢癌的機(jī)制為[3]：①高溫改變了毛細(xì)血管血流，從而改變了化療藥物在組織中的分布情況，通過(guò)對(duì)腫瘤內(nèi)部血管產(chǎn)生的擴(kuò)張性作用，加速了血液循環(huán)，增加了腫瘤組織內(nèi)部化療藥物水平；②高溫狀態(tài)能夠改變化療藥物在機(jī)體中的代謝，熱療可影響藥物在肝臟與腫瘤線粒體中代謝為活性基團(tuán)，從而提高臨床治療效果；③高溫可使得惡性腫瘤細(xì)胞的通透性改變，使得藥物極易進(jìn)入腫瘤細(xì)胞之中，使得藥物在細(xì)胞中保持較高水平；④高溫改變了藥物的細(xì)胞毒性作用，使得原來(lái)在37℃時(shí)無(wú)細(xì)胞毒性的藥物，在高溫條件下會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用；⑤加熱時(shí)瘤體內(nèi)的溫度是不均勻的，腫瘤中心溫度比周邊要高，腫瘤中心增生弱的部分比周圍部分對(duì)熱的敏感度更大。基于上述基礎(chǔ)理論，本研究結(jié)果顯示：觀察組療效優(yōu)于對(duì)照組，且觀察組治療48 h后SKOV3細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組，觀察組患者免疫功能改善優(yōu)于對(duì)照組。此結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相符[10]。但是本研究也存在一定的局限性，如選擇的樣本量較少，不能很好地反映療效問(wèn)題。在今后的研究中，筆者認(rèn)為，應(yīng)該加大研究的樣本量，以增強(qiáng)臨床數(shù)據(jù)的有效性。

綜上所述，熱療聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的毒性增效作用及治療卵巢癌惡性腹腔積液的療效顯著，應(yīng)加以推廣。

［1］曲紅光,高磊,賀丹,等.靈芝多糖對(duì)順鉑誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞耐藥株的逆轉(zhuǎn)[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2011,31 (5):831-833.

［2］馬焱,瞿全新,張秀艷,等.腹腔熱化療中卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性影響的體外研究[J].中國(guó)腫瘤臨床,2010,37(20):1153-1156.

［3］任春振,曹軍麗,胡宗蘭,等.腹腔熱灌注聯(lián)合靜脈化療治療晚期卵巢癌的臨床觀察[J].中國(guó)腫瘤臨床,2010,37(24):1459-1461.

［4］巴明臣,崔書中,駱福添,等.腹腔熱灌注化療治療進(jìn)展期結(jié)直腸癌臨床療效及安全性的Meta分析[J].中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2010,17(7):725-730.

［5］Keen A,Fitzgerald D,Bryant A,et a1.Management of drainage for malignant ascites in gynaeeological cancer [J]. Cochrane Database Syst Rev, 2010, 20(1): CD007794.

［6］WHO.The development of the WHO quality of life assessment instrument[S].Geneva:WHO,1993.

［7］周林靜,張桂芳,慕竹青,等.香菇多糖聯(lián)合順鉑治療惡性胸腹腔積液的臨床觀察[J].腫瘤基礎(chǔ)與臨床,2010,23(1):56-57．

［8］詹敏娟.深靜脈導(dǎo)管在腹腔積液穿刺引流中的應(yīng)用及護(hù)理[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2008,17(15):2381-2382．

［9］李燦宇,張自森,薛長(zhǎng)年,等.熱灌注順鉑治療晚期卵巢癌惡性腹腔積液的臨床療效[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2012,32(17):3656-3658.

［10］劉志敏,康琳,劉義冰,等.腹腔熱灌注順鉑治療惡性腹水的臨床觀察[J].腫瘤,2007,27(6):508,510．

Synergistic toxicity of hypertherm ia combined w ith cisplatin on human ovarian cancer cellsand efficacy of the treatmentonmalignantascites in ovarian cancer

BAO Xiu-fang
Departmentof Obstetricsand Gynecology,Affiliated Hospitalof InnerMongolia University for the Nationalities, Tongliao 028000,InnerMongolia,China

ObjectiveTo investigate the synergistic toxicity of hypertherm ia combined w ith cisplatin on human ovarian cancer cells and the efficacy of the treatment on malignant ascites in ovarian cancer patients.Method79 cases of ovarian cancer patients were randomized into either control group(n=39)or experimental group(n=40)according to random number table.The control group was given conventional cisplatin-based therapy,and cisplatin plus hypertherm ia was adm inistered in the experimental group.The efficacy,apoptosis of SKOV3 cells in 48h after treatment,the level of immune function related factors before and after treatment,quality of life(QoL)and adverse reactions of both groups were compared.Result1)The clinical overall response rate(ORR)was 58.97%in control group,which was significantly lower than that in the experimental group(77.50%)(P＜0.05);2)The SKOV3 apoptosis rate in 48 h after treatmentwas 72.5%in the experimental group,and was significantly higher than the 46.15%of the control group(P＜0.05);3)The CD4 and CD4/CD8 levels after treatment were significantly higher than those before treatment in the experimental group and those after treatment in the control group(P＜0.05),while those measures maintained stable after treatment in the control group(P＞0.05);4)According to SF-12 QoL scale results,the relevant dimensions of QoL(general health,emotional function,bodily pain and mental health)scores were significantly higher in the experimental group compared w ith the control group(P＜0.05);5)The incidence of adverse reactionswas 38.46%in the control group,and was 35.00%in the experimental group,w ith no significant differences observed(P＞0.05).ConclusionHypertherm ia combined w ith cisplatin is of significant synergistic toxicity on human ovarian cancer cells and is effective in the treatment ofmalignant ascites in ovarian cancer.

ovarian cancer;hyperthermia;malignant ascites;cisplatin;SF-12 life scale

R737.3

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2015.13.06.18

2015-05-25）