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    基于DNA鏈置換的分子邏輯門(mén)計(jì)算模型

    2015-07-21 09:49:48張文逸殷志祥

    張文逸++殷志祥

    摘要:DNA計(jì)算是近年來(lái)的研究熱點(diǎn),分子邏輯門(mén)是DNA計(jì)算機(jī)體系結(jié)構(gòu)和運(yùn)算實(shí)現(xiàn)的重要基礎(chǔ)。將DNA自組裝與鏈置換技術(shù)和熒光標(biāo)記相結(jié)合,在現(xiàn)有的鏈置換邏輯計(jì)算模型的基礎(chǔ)上,構(gòu)造了非門(mén),與門(mén),與非門(mén),或門(mén)和或非門(mén)??稍谑覝叵逻M(jìn)行,減少了因復(fù)雜的生物操作步驟帶來(lái)的誤差。使用熒光檢測(cè)來(lái)判斷邏輯結(jié)果,操作簡(jiǎn)單,容易檢測(cè),且靈敏度高。

    關(guān)鍵詞:DNA計(jì)算;自組裝;鏈置換;熒光標(biāo)記;邏輯門(mén)

    中圖分類號(hào):TP301.6 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    文章編號(hào):1672-1098(2015)01-0007-04

    自從1946年科學(xué)家發(fā)明了第一臺(tái)電子計(jì)算機(jī)ENIAC,計(jì)算機(jī)迅猛發(fā)展并時(shí)刻影響著人類的生活。但隨著科技的進(jìn)步,傳統(tǒng)計(jì)算機(jī)已無(wú)法滿足呈指數(shù)增長(zhǎng)的大規(guī)模運(yùn)算需求,加之“Moore定律”導(dǎo)致的芯片研究成本和半導(dǎo)體物理極限,集成電路的時(shí)代不可能永遠(yuǎn)下去。美國(guó)物理學(xué)家Feynman于1959年首次提出了分子計(jì)算機(jī)的思想[1]。20世紀(jì)90年代,美國(guó)加州大學(xué)的Leonard Adleman于1994年第一次在試管中通過(guò)利用寡核苷酸鏈進(jìn)行實(shí)驗(yàn),解決了經(jīng)典的有向Hamilton路問(wèn)題[2],首次從實(shí)驗(yàn)上證明了分子計(jì)算機(jī)的可行性。

    分子邏輯門(mén)是實(shí)現(xiàn)分子計(jì)算機(jī)的基礎(chǔ)。文獻(xiàn)[3]首次提出布爾邏輯分子計(jì)算機(jī)模型,這是使用DNA分子模擬布爾電路終將實(shí)現(xiàn)以DNA為核心的分子計(jì)算機(jī)。文獻(xiàn)[4]構(gòu)建了DNA核酸分子邏輯非門(mén)、與門(mén)和異或門(mén),文獻(xiàn)[5]利用DNA核酶構(gòu)建了多種DNA邏輯運(yùn)算模型,文獻(xiàn)[6]構(gòu)建了半加器的復(fù)雜邏輯門(mén),文獻(xiàn)[7]首次構(gòu)建了邏輯與門(mén)、與非門(mén)和禁門(mén),文獻(xiàn)[8]構(gòu)建了一套完整的無(wú)酶邏輯電路,文獻(xiàn)[9]構(gòu)建了環(huán)狀DNA邏輯門(mén),文獻(xiàn)[10]使用多種DNA酶構(gòu)建邏輯運(yùn)算模型。

    近年來(lái),DNA計(jì)算發(fā)展迅速[11],融合了熒光標(biāo)記、鏈置換、自組裝和納米顆粒[12]等多種分子操作技術(shù)。其中,結(jié)合熒光標(biāo)記的DNA鏈置換技術(shù)更是因在Science和Nature等雜志[13-15]上發(fā)表的工作而具有廣泛的應(yīng)用前景。本文在文獻(xiàn)[16]的基礎(chǔ)上,結(jié)合熒光標(biāo)記技術(shù)[17-18],改進(jìn)并構(gòu)造了基本的邏輯門(mén)單元,以寡核苷酸鏈作為輸入信號(hào),熒光檢測(cè)作為輸出信號(hào),能在室溫下自發(fā)進(jìn)行,對(duì)結(jié)果有更好的可讀性。

    1DNA自組裝和鏈置換

    11DNA自組裝

    DNA自組裝是指一些帶有輸入信息的DNA分子根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,在一定的溫度、濃度、酸堿度以及特定酶的作用下,自組裝生成帶有輸出信息的新的DNA分子的過(guò)程。自組裝計(jì)算模型是通過(guò)DNA分子間的相互作用形成特定的構(gòu)型來(lái)完成計(jì)算過(guò)程,是由Winfree等首次提出來(lái)的一種DNA計(jì)算模型[19-21]。文獻(xiàn)[22]首先使用復(fù)雜DNA自組裝結(jié)構(gòu)實(shí)現(xiàn)了簡(jiǎn)單的邏輯運(yùn)算。文獻(xiàn)[23]將自組裝DNA計(jì)算的基本思想用于求解布爾邏輯表達(dá)式并將其實(shí)現(xiàn)邏輯電路。該模型目前在生物計(jì)算中得到了良好的應(yīng)用。

    12鏈置換技術(shù)

    鏈置換技術(shù)是利用分子雜交系統(tǒng)趨向穩(wěn)定能級(jí)的特點(diǎn),通過(guò)加入不同長(zhǎng)度和序列的輸入鏈來(lái)誘導(dǎo)控制鏈置換反應(yīng),從而釋放另一條DNA鏈的過(guò)程。DNA鏈置換的基本原理如圖1所示。鏈A/B是由兩條部分互補(bǔ)的DNA鏈結(jié)合成的部分雙鏈,單鏈部分在反應(yīng)中被稱作立足點(diǎn),發(fā)生鏈置換反應(yīng)的可能性隨立足點(diǎn)的增長(zhǎng)而增大,鏈A*是序列與A完全互補(bǔ)的單鏈。單鏈A*先特異性識(shí)別結(jié)合立足點(diǎn),為達(dá)到最穩(wěn)態(tài)分支開(kāi)始遷移,A*與A的堿基對(duì)逐漸取代B與A的堿基對(duì),直至完全置換釋放出B鏈。該反應(yīng)過(guò)程具有自引發(fā)性,靈敏性和準(zhǔn)確性等特點(diǎn),近年來(lái)發(fā)展迅速,已成為分子計(jì)算領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

    圖1鏈置換反應(yīng)的基本過(guò)程

    2鏈置換邏輯門(mén)的計(jì)算模型

    21非門(mén)

    在反應(yīng)底物自組裝結(jié)構(gòu)的部分雙鏈中長(zhǎng)鏈A的5′端標(biāo)記熒光基團(tuán)FAM,與A鏈完全互補(bǔ)的單鏈DNA鏈A*的5′端標(biāo)記熒光猝滅基團(tuán)DABCYL, 當(dāng)無(wú)DNA鏈輸入(輸入值為0)時(shí), 有熒光產(chǎn)生(輸出值為1);當(dāng)加入互補(bǔ)鏈A*(輸入值為1)時(shí), 因A鏈與A*鏈完全互補(bǔ)結(jié)合, 熒光猝滅基團(tuán)將熒光基團(tuán)猝滅, 從而熒光消失, 無(wú)熒光產(chǎn)生(輸出值為0)。

    圖2非門(mén)的原理示意圖

    22與門(mén)

    反應(yīng)底物自組裝結(jié)構(gòu)由主鏈C和單側(cè)信號(hào)識(shí)別鏈ab、cd雜交而成,主鏈C長(zhǎng)20 bp,分為左右各長(zhǎng)10 bp的堿基片斷,信號(hào)識(shí)別鏈由長(zhǎng)10 bp的結(jié)構(gòu)區(qū)域b、c和長(zhǎng)約6~7 bp的特異性識(shí)別位點(diǎn)a、b組成,輸入鏈ab*和cd*為分別與ab和cd完全互補(bǔ)的信號(hào)鏈。對(duì)所需要的DNA序列進(jìn)行編碼后,在主鏈C的5′和3′端分別標(biāo)記熒光基團(tuán)FAM和ROX,在b的5′端和c的3′端分別標(biāo)記熒光猝滅基團(tuán)DABCYL。定義同時(shí)有兩種不同的熒光產(chǎn)生時(shí)為輸出1,否則為輸出0。

    當(dāng)無(wú)信號(hào)輸入(0,0)時(shí),自組裝結(jié)構(gòu)無(wú)變化,無(wú)熒光產(chǎn)生(輸出值為0);當(dāng)輸入信號(hào)1(1,0)時(shí),ab*將ab完全置換,產(chǎn)生FAM熒光,但無(wú)ROX熒光(輸出值為0);當(dāng)輸入信號(hào)2(0,1)時(shí),cd*將cd完全置換,產(chǎn)生ROX熒光,但無(wú)FAM熒光(輸出值為0);當(dāng)同時(shí)輸入信號(hào)1和2(1,1)時(shí),ab*將ab完全置換,產(chǎn)生FAM熒光,cd*將cd完全置換,產(chǎn)生ROX熒光(輸出值為1)。

    23與非門(mén)

    自組裝結(jié)構(gòu)同與門(mén)相同(見(jiàn)圖3),對(duì)所需要的DNA序列進(jìn)行編碼后,在主鏈C的5′和3′端分別標(biāo)記熒光基團(tuán)FAM和ROX,在輸入鏈ab*中b*的5′端和cd*中c*的3′端分別標(biāo)記熒光猝滅基團(tuán)DABCYL。有熒光產(chǎn)生時(shí)為輸出1,無(wú)熒光則為0(見(jiàn)表1)。

    圖3與門(mén)的原理示意圖

    當(dāng)無(wú)信號(hào)輸入(0,0)時(shí),自組裝結(jié)構(gòu)無(wú)變化,有熒光FAM和ROX產(chǎn)生(輸出值為1);當(dāng)輸入信號(hào)1(1,0)時(shí),ab*將ab完全置換,熒光猝滅基團(tuán)將熒光FAM基團(tuán)猝滅,F(xiàn)AM熒光消失,但有ROX熒光(輸出值為1);當(dāng)輸入信號(hào)2(0,1)時(shí),cd*將cd完全置換,熒光猝滅基團(tuán)將熒光ROX基團(tuán)猝滅,ROX熒光消失,但有FAM熒光(輸出值為1);當(dāng)同時(shí)輸入信號(hào)1和2(1,1)時(shí),ab*將ab完全置換, FAM熒光消失,cd*將cd完全置換,ROX熒光消失,無(wú)熒光(輸出值為0)。endprint

    表1與非門(mén)的真值表

    輸入X輸入Y輸出

    001

    101011110

    24或門(mén)

    反應(yīng)底物自組裝結(jié)構(gòu)由主鏈D和多信號(hào)識(shí)別區(qū)域(e,f,g,h)組成。單種輸入為混合輸入信號(hào),信號(hào)3為輸入鏈(ef*,gh*),信號(hào)4為輸入鏈(fh*,gh*)。對(duì)所需要的DNA序列進(jìn)行編碼后,在主鏈B的中間部位和3′端分別標(biāo)記熒光基團(tuán)FAM和ROX,在efh中f和gh中g(shù)的3′端分別標(biāo)記熒光猝滅基團(tuán)DABCYL。定義同時(shí)有兩種不同的熒光產(chǎn)生時(shí)為輸出1,無(wú)熒光為輸出0。

    當(dāng)無(wú)信號(hào)輸入(0,0)時(shí),自組裝結(jié)構(gòu)無(wú)變化,無(wú)熒光產(chǎn)生(輸出值為0);當(dāng)輸入信號(hào)3(1,0)時(shí),ef*將efh置換成部分雙鏈,產(chǎn)生FAM熒光,gh*將gh完全置換,產(chǎn)生ROX熒光(輸出值為1);當(dāng)輸入信號(hào)4(0,1)時(shí),fh*將efh置換成部分雙鏈,產(chǎn)生FAM熒光,gh*將gh完全置換,產(chǎn)生ROX熒光(輸出值為1);當(dāng)同時(shí)輸入信號(hào)3和4(1,1)時(shí),ef*和fh*將efh置換成部分雙鏈,產(chǎn)生FAM熒光,gh*將gh完全置換,產(chǎn)生ROX熒光(輸出值為1)。

    25或非門(mén)

    自組裝結(jié)構(gòu)同或門(mén)相同(見(jiàn)圖4),對(duì)所需要的DNA序列進(jìn)行編碼后,在主鏈D的中間部位和3′端分別標(biāo)記熒光基團(tuán)FAM和ROX,在ef*的5′端、fh*中f和gh*中g(shù)的3′端分別標(biāo)記熒光猝滅基團(tuán)DABCYL。定義同時(shí)有兩種不同的熒光產(chǎn)生時(shí)為輸出1,否則為輸出0(見(jiàn)表2)。

    圖4或門(mén)的原理示意圖

    當(dāng)無(wú)信號(hào)輸入(0,0)時(shí),自組裝結(jié)構(gòu)無(wú)變化,有熒光FAM和ROX(輸出值為1);當(dāng)輸入信號(hào)3(1,0)時(shí),ef*將efh置換成部分雙鏈,熒光猝滅基團(tuán)將熒光FAM基團(tuán)猝滅,F(xiàn)AM熒光消失,gh*將gh完全置換,熒光猝滅基團(tuán)將熒光ROX基團(tuán)猝滅,ROX熒光消失(輸出值為0);當(dāng)輸入信號(hào)4(0,1)時(shí),fh*將efh置換成部分雙鏈,熒光猝滅基團(tuán)將熒光FAM基團(tuán)猝滅,F(xiàn)AM熒光消失,gh*將gh完全置換,熒光猝滅基團(tuán)將熒光ROX基團(tuán)猝滅,ROX熒光消失(輸出值為0);當(dāng)同時(shí)輸入信號(hào)3和4(1,1)時(shí),ef*和fh*將efh置換成部分雙鏈,熒光猝滅基團(tuán)將熒光FAM基團(tuán)猝滅,F(xiàn)AM熒光消失,gh*將gh完全置換,熒光猝滅基團(tuán)將熒光ROX基團(tuán)猝滅,ROX熒光消失(輸出值為0)(見(jiàn)表3)。

    表2或非門(mén)的真值表

    輸入X輸入Y輸出

    001

    101011000

    表3DNA的編碼序列

    名稱序列(5′~3′)名稱序列(5′~3′)

    Cabab*cdcd*ACTGACACTATGATCGTAGC

    AGCTAGCTGACTGTGATTCGATCGACTGACACTA

    ACTAGCATCGTAGATCGTGATCGTAGCATCTAGCDefhef*fh*ghgh*

    GCTACTGACTGACTCATGCACTGATCACGATGACTGA

    GACTAGTGCTACTGACTGCTACTGACTATGTCAG

    CTGAGTACGTTACGTCAGACTCATGCAATGCAGT

    3結(jié)論

    本文以現(xiàn)有的鏈置換邏輯計(jì)算模型為基礎(chǔ),結(jié)合熒光標(biāo)記技術(shù),用熒光檢測(cè)作為輸出信號(hào),并對(duì)輸入信號(hào)進(jìn)行相應(yīng)的標(biāo)記,實(shí)現(xiàn)了非門(mén),與門(mén),與非門(mén),或門(mén)和或非門(mén)的邏輯門(mén)操作。該邏輯門(mén)可在室溫下自發(fā)反應(yīng),減小了實(shí)驗(yàn)誤差。在讀取邏輯結(jié)果時(shí),通過(guò)熒光的出現(xiàn)情況來(lái)判斷邏輯真值,操作簡(jiǎn)單,容易檢測(cè),且靈敏度高。但是對(duì)于不同的邏輯門(mén),需要對(duì)自組裝結(jié)構(gòu)進(jìn)行不同的設(shè)計(jì),且在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,復(fù)雜體系的DNA序列設(shè)計(jì)難度增加,可能會(huì)出現(xiàn)堿基錯(cuò)配的現(xiàn)象,需要進(jìn)一步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證和改進(jìn)。

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