RP-HPLC 法測定那如八味丸中沒食子酸的含量分析

賈福群

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑部，呼和浩特市 010059)

那如八味丸(那如-8)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》蒙藥分冊(cè)［1］。由訶子、制草烏、蓽茇、芒果核、蓮子、白豆蔻、苦石蓮、石決明組方。訶子為方中君藥。該藥主要具祛寒功效，臨床上用于治療胃寒食積、消化不良、腎虛、腎寒、腰腿酸痛。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［2］，訶子主要含揮發(fā)油、多烯炔衍生物類、黃酮類、萜類化合物、香豆精類、生物堿類等化學(xué)成分，沒食子酸為其主要活性成分。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無內(nèi)在質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)，我們參照《中國藥典》2005年版一部［3］相關(guān)品種項(xiàng)下的方法與條件進(jìn)行了含量測定的分析研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：美國Alltech 高效液相色譜儀，M626 輸液泵，UVIS-201 型檢測器;美國Alltech 高效液相色譜儀;Alltech UVIS 200 Detector 檢測器;Alltech 426 HPLC Pump 泵;Alltech Chromstation 色譜工作站;島津UV-250 型紫外可見分光光度儀;KQ3200DB 型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 試劑：甲醇為色譜純?cè)噭?，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

1.3 對(duì)照品：沒食子酸為中國藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)：953 -200611)。

1.4 樣品：批號(hào)：080611、080620、080625 內(nèi)蒙古庫倫蒙藥廠。

1.5 色譜條件：Alltech RP - C18 色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5m)，ODS 預(yù)柱;檢測波長273nm;流動(dòng)相：甲醇-0.2磷酸溶液(15∶ 85);流速：1.0mL/min;柱溫∶ 30℃;進(jìn)樣量：10μL。

1.6 檢測波長的選擇：參照《中國藥典》2005年版一部"五倍子"項(xiàng)下方法，制備沒食子酸對(duì)照品溶液，在240 ～320nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，沒食子酸在273nm 有最大吸收，故確定檢測波長為273nm。

1.7 對(duì)照品溶液的制備：取沒食子酸對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1mL 含50μg 的溶液，即得。

1.8 供試品溶液的制備：取重量差異項(xiàng)下本品3g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入4mol/L 鹽酸溶液甲醇100mL，稱定重量，加熱回流4h，放冷，濾過，精密量取續(xù)濾液25mL，置100mL 量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2 方法學(xué)考察

2.1 線性關(guān)系考察：精密稱取沒食子酸對(duì)照品3.0452mg，置25mL 量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL 置10mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，以10μL 進(jìn)樣，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以沒食子酸進(jìn)樣量(μg)對(duì)峰面積積分值(A)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果沒食子酸在μg 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系?；貧w方程：Y=92030X+36125，r=0.9998(Y 為峰面積積分值，X 為對(duì)照品進(jìn)樣量)，結(jié)果見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

2.2 精密度試驗(yàn)：取供試品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6 次，測得供試品中沒食子酸的峰面積積分值，RSD ＜2%。試驗(yàn)表明，精密度良好，結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12h 進(jìn)樣10μL，供試品中沒食子酸的峰面積積分值基本不變，RSD ＜2%。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品在12h 內(nèi)穩(wěn)定性良好，結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品(批號(hào)：080611)按上述供試品溶液制備方法平行制備5 份，每份進(jìn)樣2 針，測得峰面積積分值，含量平均值的RSD ＜2%，結(jié)果見表4。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 加樣回收試驗(yàn)：取已知沒食子酸含量的樣品5 份，每份1.5g，精密稱定，分別精密加入1mL 對(duì)照品溶液(9.25mg/mL)，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.35%，RSD ＜2%。試驗(yàn)結(jié)果表明，加樣回收良好，結(jié)果見表5。

表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 樣品含量測定

分別取3 批樣品，按上述擬定的含量測定方法制備供試品溶液測定，結(jié)果見表6。

表6 樣品中沒食子酸含量測定結(jié)果

3 結(jié)果

3.1 試驗(yàn)結(jié)果表明，組方中其他藥材所含成分對(duì)沒食子酸無干擾，樣品峰形良好，平均回收率為99.78%，前處理較簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性良好。見圖1。

圖1 A 陰性 B 標(biāo)準(zhǔn)品沒食子酸 C 樣品

3.2 該含量測定方法具有分離效果理想、靈敏度高、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好特點(diǎn)，可以作為訶子的含量測定方法。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)［S］.1998：97.

［2］四川醫(yī)學(xué)院.中草藥學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，367.

［3］國家藥典委員會(huì).中國藥典［S］.一部.化學(xué)工業(yè)出版社，2005：45.