“04710”殺滅釘螺的實(shí)驗(yàn)研究

陸 賓張 進(jìn)張正球陳 前吳 鋒.江蘇省儀征市疾病預(yù)防控制中心，江蘇儀征 400；.江蘇省儀征市真州衛(wèi)生院，江蘇儀征 400；3.江蘇省血吸蟲病防治研究所，江蘇無錫 4064

“04710”殺滅釘螺的實(shí)驗(yàn)研究

陸 賓1張 進(jìn)1張正球1陳 前2吳 鋒3▲
1.江蘇省儀征市疾病預(yù)防控制中心，江蘇儀征 211400；2.江蘇省儀征市真州衛(wèi)生院，江蘇儀征 211400；3.江蘇省血吸蟲病防治研究所，江蘇無錫 214064

[摘要]目的 探討和觀察“04710”在不同環(huán)境、不同濃度（劑量）下的殺螺效果。 方法 分別采用玻璃燒杯浸泡法、保濕泥盤噴灑法和保濕泥盤直接撒施法，并于施藥后24h、48h、72h和3d、7d、15d觀察檢查釘螺的死亡情況，同時(shí)設(shè)清水空白對照組。 結(jié)果 在室內(nèi)（25.0±2.0）℃常溫下，其浸泡釘螺24h、48h和72h的LC50分別為27.97mg/L、19.43mg/L和10.97mg/；噴灑3d、7d和15d的LD50為66.20g/m2、48.41g/m2和35.16g/m2；直接撒施3d、7d 和15d的LD50則為23.63g/m2、17.20g/m2和13.39g/m2。其95%的可信區(qū)間則分別為20.96～36.79mg/L、15.01～24.96mg/L和8.72～13.60mg/L；51.74～87.68g/m2、38.01～63.01g/m2和27.47～45.70g/m2；18.40～30.41g/m2、13.28～22.12g/m2和10.40～17.02g/m2。 結(jié)論 直接撒施法和浸泡法的殺螺率明顯高于噴灑法，但現(xiàn)場殺螺效果和對非靶生物的毒性有待進(jìn)一步研究探索。

[關(guān)鍵詞]“04710”；植物殺螺劑；浸泡法；噴灑法；直接撒施法；殺螺效果

▲通訊作者

釘螺是日本血吸蟲的惟一中間宿主，控制和消滅釘螺是防治血吸蟲病的重要關(guān)鍵措施之一[1-2]。目前國內(nèi)常用的滅螺劑主要為化學(xué)類藥物，但由于污染環(huán)境、對非靶生物有毒性，因而使用受到限制[3-4]。氯硝柳胺是WHO唯一推薦使用的化學(xué)殺螺藥，但在實(shí)際應(yīng)用中該藥易沉淀且有釘螺上爬（逃避）現(xiàn)象，同時(shí)存在價(jià)格貴、對非靶水生物（魚類）毒性大等缺陷[5]。所以，研制和開發(fā)天然植物類滅螺藥受到重視[6]?！?4710”是我們從許多篩選樣品中觀察到的具有殺螺作用的植物類樣品。因此，為進(jìn)一步觀察驗(yàn)證該樣品有無直接殺滅釘螺的作用和效果，我們于2014年10～11月在室內(nèi)進(jìn)行了不同方法和不同時(shí)間的滅螺實(shí)驗(yàn)觀察研究，結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1殺螺劑 “04710”為黃褐色塊狀（含17%茄呢醇），是生產(chǎn)生物制品中的下腳料，由江蘇某生物制品有限公司提供。

1.1.2釘螺 釘螺（Oncomelania hupensis），采自江蘇省儀征市江灘，經(jīng)室內(nèi)作適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后挑選活力強(qiáng)，7～8個螺旋的成螺。

1.1.3實(shí)驗(yàn)條件 實(shí)驗(yàn)室溫度控制在（25.0±2.0）℃，相對濕度為（55.0±10.0）%。

1.2方法

1.2.1藥液配制 在等盤天平秤上稱取“04710”原藥5kg，放入拈盤中稍加磨碎（細(xì)）后投入搪瓷桶中注水5000mL浸泡一周，經(jīng)20孔/25.4mm金屬銅篩過濾后作為實(shí)驗(yàn)藥液（浸泡液）。

1.2.2實(shí)驗(yàn)分組 將實(shí)驗(yàn)藥液（浸泡液）用倍比稀釋法配制為200.0、100.0、50.0、25.0、12.5、6.3、3.3mg/L （g/m2）7個實(shí)驗(yàn)觀察組，另設(shè)清水空白對照組。

1.2.3實(shí)驗(yàn)方法 （1）浸泡法：取100mL玻璃燒杯，每杯放入活螺各30只，上蓋塑料紗網(wǎng)以防止釘螺爬出，然后將制成的試驗(yàn)藥液分別灌入燒杯內(nèi)，觀察其24h、48h和72h的釘螺死亡情況。（2）噴灑法：采用“室內(nèi)噴灑殺螺保濕試驗(yàn)盤（28cm×33cm）”[7]，內(nèi)鋪經(jīng)40孔/25.4mm金屬銅篩篩過的泥土600g刮平并加水使泥土保持一定的潮濕度（盤中泥土含水量控制在35%左右），實(shí)驗(yàn)前每盤投入釘螺30只，讓其自由爬動15min，然后用小型澆花壺將各組試驗(yàn)藥液均勻地噴灑于盤中泥土表面并蓋上紗蓋，以防止釘螺逃出，于噴后3d、7d和15d分別檢出盤中釘螺，觀察其釘螺死亡情況。（3）直接撒施法：實(shí)驗(yàn)環(huán)境同噴灑法，但施藥方法不同于噴灑法，它是直接將磨碎（細(xì)）的藥粉按實(shí)驗(yàn)各組所需藥量直接均勻地撒入盤內(nèi)，于3d、7d和15d后取出釘螺觀察死亡情況。

1.3釘螺死活鑒定

將實(shí)驗(yàn)后取出的各組釘螺分別在清水籠頭上洗凈體表藥液，置于平皿中并加入少許清水，讓其自由爬動2h，爬動的以活螺計(jì)并檢出，而對于不開厴活動的釘螺將其移至草紙上復(fù)蘇24h后再用敲擊法鑒定釘螺死活[8]。

1.4釘螺死亡率的計(jì)算

各組鑒定為死亡的釘螺為X，每組觀察釘螺總數(shù)為Y，將X/Y乘以100。同時(shí)采用Probit模塊（概率單位回歸），計(jì)算釘螺施藥后不同時(shí)間的半數(shù)致死濃度（LC50）、半數(shù)致死劑量（LD50）及其95%可信區(qū)間[9-10]。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分別計(jì)算各組釘螺死亡率，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1浸泡殺螺效果

試驗(yàn)各組的浸泡殺螺率見表1。其中濃度在25.0mg/L以上各組浸泡24h與48h的釘螺死亡率分別為43.3%～96.7%，56.7%～100.0%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=1.067、0.693和0.577，P＞0.05），與浸泡72h的釘螺死亡率83.3%～100.0%相比較，除200mg/L組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其他三組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=10.335、7.954、和5.454，（P＜0.05），清水空白對照組釘螺死亡率為0。

表1　“04710”室內(nèi)浸泡殺螺效果

2.2噴灑殺螺效果

釘螺接觸噴灑藥液20min后可見其活動明顯減弱，其中用50.0g/m2以上各組噴灑3d、7d 和15d的釘螺死亡率分別為43.3%～83.3%、50.0%～93.3%和53.3%～100.0%，經(jīng)檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.268、0.067和0.060，P＞0.05），清水空白對照組釘螺死亡率為0～3.3%，見表2。

表2　“04710”室內(nèi)噴灑殺螺效果

2.3直接撒施殺螺效果

當(dāng)釘螺接觸藥物即見其活動減弱或停止爬動。在25.0g/m2以上各組撒施3d、7d和15d的殺螺率分別為43.3%～100.0%、46.7%～100.0%和60.0%～100.0%，三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=1.669、3.750和3.158，P＞0.05），清水空白對照組釘螺死亡率為0.0%，見表3。

表3　“04710”室內(nèi)直接撒施殺螺效果

上述結(jié)果顯示，濃度12.5mg/L以上浸泡釘螺和劑量12.5g/m2以上各組噴灑殺螺比較，浸泡效果好于噴灑殺螺效果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=7.177、15.429、12.273和6.667，P＜0.05）；而在相同劑量（12.5g/m2）以上各組的噴灑和撒施法中，其殺螺效果直接撒施法明顯高于噴灑法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=4.800、4.286、9.932和6.667，P＜0.05）。

3 討論

血吸蟲病是一種嚴(yán)重危害我國人民健康和影響社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展的疾病，消滅釘螺是防治血吸蟲病的一項(xiàng)重要措施，其中藥物滅螺是當(dāng)前的主要滅螺措施。國內(nèi)常用的殺螺藥物，如五氯酚鈉等，因?qū)θ?、畜毒性大，有“三致”作用，且污染環(huán)境，已被國家禁止使用。氯硝柳胺是WHO 唯一推薦使用的化學(xué)殺螺藥，但在實(shí)際應(yīng)用中該藥易沉淀且有釘螺上爬（逃避）現(xiàn)象，同時(shí)存在價(jià)格貴、對非靶水生物（魚類）毒性大等缺陷[11]。因此，尋求一種資源豐富、能就地取材，并且對環(huán)境無污染和使用方便的天然植物殺螺劑，已是我國當(dāng)務(wù)之急。

植物滅螺系指對于某些含有殺螺有效成分的植物資源，運(yùn)用一定的分離手段提取其根、莖、葉、花、果和籽中的有效成分來殺滅釘螺。所以，植物滅螺藥物具有價(jià)廉、低毒和易降解等優(yōu)點(diǎn)而日益受到重視。目前，國內(nèi)報(bào)道有一定殺螺作用的植物約有50多種[12]。富貴草浸出液浸泡釘螺24、72h的LC50分別為 42.28、7.20mg/L[13]；赤桉樹葉乙醇提取物浸泡釘螺48h和72h后的LC50分別為19.4mg/L和15.5mg/L[14]；10g/L楓楊和土大黃及1g/L夾竹桃浸泡5d的殺螺率為80%～85%[15]；本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組殺螺率均隨著藥物劑量的增大和施藥時(shí)間延長而增加，其中用“04710”浸泡釘螺48h、72h的LC50分別為19.43mg/L和10.97mg/L，其95%可信區(qū)間為15.01～24.96mg/L和8.72～13.60mg/L，與富貴草和赤桉樹葉乙醇提取物浸泡殺螺相似且優(yōu)于其滅螺效果。而噴灑3d、7d和15d的LD50為 66.20g/m2、48.41g/m2和35.16g/m2，95%可信區(qū)間分別為51.74～87.68g/m2、38.01～63.01g/m2和27.47～45.70g/m2；直接撒施殺螺3d、7d和15d 的LD50為23.61g/m2、17.20g/m2和13.39g/m2，95%可信區(qū)間為18.39～30.41g/m2、13.28～22.12g/m2和10.40～17.02g/m2，明顯優(yōu)于目前現(xiàn)埸應(yīng)用的殺螺藥—4%氯硝柳胺乙醇胺鹽粉劑50.0g/m2的殺螺效果。

“04710”是一種具有藥用功能的草本植物，在我國資源豐富。它是工廠在提取生物有效成份后所產(chǎn)生的廢料（下腳料），通常認(rèn)為沒有任何商業(yè)價(jià)值而被當(dāng)?shù)剞r(nóng)民用來當(dāng)作有機(jī)肥料，以改善農(nóng)田土壤結(jié)構(gòu)。目前國外已用來直接殺滅魚塘等水產(chǎn)養(yǎng)殖場所的水生螺類，因?yàn)樗a(chǎn)養(yǎng)殖者發(fā)現(xiàn)在殺螺方面比市場上出售的滅螺劑更有效。本次實(shí)驗(yàn)觀察表明，“04710”無論在浸泡、噴灑和直接撒施試驗(yàn)中均顯示了一定的滅螺效果，尤其直接撒施法的殺螺率要明顯高于浸泡和噴灑法的殺螺效果。可見，現(xiàn)場試驗(yàn)時(shí)宜采用直接撒施法。

實(shí)驗(yàn)中還觀察到在直接撒施藥物2d后可見實(shí)驗(yàn)盤內(nèi)泥土表層呈現(xiàn)霉變現(xiàn)象，自然形成一層白色霉變物和霉斑，是否有促進(jìn)或加速釘螺死亡的因素，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探索和觀察；實(shí)驗(yàn)過程中未見在不同殺螺方法和環(huán)境中有明顯的釘螺上爬或逃跑現(xiàn)象。

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[中圖分類號]R184.38

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]2095-0616（2015）23-39-04

收稿日期：（2015-09-02）

Study on “04710” for molluscicidal experiment

LU Bin1ZHANG Jin1ZHANG Zhengqiu1CHEN Qian1WU Feng3
1.Jiangsu Yizheng Center for Disease Control and Prevention,Yizheng 211400,China;2.Jiangsu Yizheng Zhenzhou Hospital,Yizheng 211400,China;3.Jiangsu Institute of Schistosomiasis Control,Wuxi 214064,China

[Abstract]Objective To investigate and explore the molluscicidal efficacy of “04710”at the different concentration and application condition. Methods The dead rate of snail was checked after treatment with drug at 24,48,72 hours and 3,7,15 days with the methods of immersion in glass beaker,spraying and dusting in wet plate,Respectively.Blank control group was set with fresh water. Results At (25.0±2.0)℃ room temperature,the LC50of snail immersion in “04710” were 27.97mg/L,19.43mg/L and 10.97mg/L after 24 h,48 h and 72h,the LD50of spray were 66.20g/m2,48.41g/m2and 35.16g/m2after 3d,7d and 15d,whereas the LD50of direct dusting were 23.63g/m2,17.20g/m2and 13.39g/m2after 3d,7d and 15d.The 95% creditable range of the three methods in killing snail test were 20.96-36.79mg/L,15.01-24.96mg/L and 8.72-13.60mg/L,51.74-87.68g/m2,38.01-63.01g/m2and 27.47-45.70g/m2,18.40-30.41g/m2,13.28-22.12g/m2and 10.40-17.02g/m2. Conclusion The molluscicidal rate with direct dusting and inmersion showed a significant higher than spraying.However,the effect of snail killing in the field and the toxicity on non-target organisms need to be studied.

[Key words]“04710”;Plant molluscicidal agent;Immersion method;Spraying method;Dusting method;Molluscicidal effect