針刺提插補瀉法對血虛證模型家兔血清鐵蛋白、總鐵結合力的影響*

王心怡，曾永欣，劉溫麗，周明亮，王健彤，劉冰云，睢明河

( 北京中醫(yī)藥大學，北京100029)

本實驗采用放血加限食的方法制備血虛證家兔模型［1-4］，通過科學方法研究針刺提插補瀉手法中操作時間、頻率、提插幅度等刺激量和補瀉效應［5-6］的作用，觀察血虛證家兔在不同刺激量下血清鐵蛋白( serum ferritin，SF) 和總鐵結合力( total iron binding capacity，TIBC) 的變化，探討提插補瀉的刺激量大小與效用的關系，為科學分析提插補瀉的相關因素提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

經(jīng)檢疫的健康日本大耳白兔60 只，月齡( 3 ±0.5) 個月，雌雄各半，體重( 2000 ±500) g。由北京興隆養(yǎng)殖場提供清潔級實驗動物，合格證號為： SCKX( 京)2006-0001。由北京中醫(yī)藥大學針灸機理研究室提供標準實驗室與動物房，動物房及實驗室室溫保持在22℃～24℃，濕度保持在40% ～50%。對動物的處置符合中華人民共和國科技部頒布的( 2006) 相關動物倫理學規(guī)定。

1.2 主要試劑及儀器

人血清鐵蛋白放免試劑盒、鐵試劑盒、總鐵結合力試劑盒( 上海泛柯生物科技有限公司) 。

毫針：直徑0.25 mm，長0.25 mm( 蘇州環(huán)球針灸醫(yī)療器械有限公司) ；自制針具：管針及細鐵絲改制成的特制針具，在針柄上纏繞鐵絲制成控制桿，將管針套管部分切除而成控制套，可控制進針時的最淺深度及針刺提插時的幅度，見圖1； 低溫離心機(5810R，德國Eppendorf 公司) ；超低溫冰箱( MDF-U50V，日本三洋公司) ； 電子天平( ER-182A，日本) ； P1000 微量可調移液器(100-1000ul，芬蘭DRGON) 。

1.3 分組與造模

購入大耳家兔后，動物房中先行適應性飼養(yǎng)1 周，再用隨機數(shù)字表法于造模前分為6 組： 空白組A 組、模型組B 組、針刺小刺激量組C、D 組、針刺大刺激量組E、F 組。

除空白組正常飼養(yǎng)外，其余5 組均采用放血加適當限食法制備血虛證模型：兔耳常規(guī)消毒，用乙醇反復擦拭使耳緣靜脈血管擴張，從家兔中央動、靜脈及耳緣靜脈抽血，隔日1 次，每次10 ml，共計5 次； 自造模之日起改變正常喂養(yǎng)規(guī)律，禁食與限量食交替給予。制成的血虛證模型家兔精神萎靡、拱背消瘦、唇色淡白、瞼結膜蒼白、食欲下降、體重減輕，外周血紅細胞計數(shù)及血紅蛋白含量顯著降低。

圖1 自制針具

1.4 取穴

足三里：家兔小腿背外側上1/5 折點處，約當膝骨頭下1.2 cm，脛骨嵴后1 cm。

1.5 各組處置方法

治療前剪去家兔腿上的毛發(fā)，將其裝入自制的布袋中固定，使治療穴位充分暴露。造模成功后第2 天開始治療，隔日1 次，共計10 次。

A 組( 空白組) ：正常同步喂養(yǎng)，不進行任何處理。

B 組( 模型組) ：僅造模，不進行任何治療，與各實驗針刺組同步捆綁固定，每次15 min。

C 組( 針刺小刺激量組) ： 造模后針雙側足三里并做補瀉手法，提插幅度2 mm，提插深度范圍6 ～8 mm，頻率15 次/ min，每做0.5 min 休息4.5 min，共3 次。

D 組( 針刺小刺激量組) ：造模后針雙側足三里并做補瀉手法，提插幅度4 mm，提插深度范圍5 ～9 mm，頻率30 次/min，每做1 min 休息4 min，共3 次。

E 組( 針刺大刺激量組) ： 造模后針雙側足三里并做補瀉手法，提插幅度6 mm，提插深度范圍4 ～10 mm，頻率45 次/min，每做1.5 min 休息3.5 min，共3 次。

F 組( 針刺大刺激量組) ： 造模后針雙側足三里并做補瀉手法，提插幅度8 mm，提插深度范圍3 ～11 mm，頻率60 次/min，每做2 min 休息3 min，共3 次。

針刺的提插幅度由改制成的特制針具控制，提插頻率由實驗進行前錄制的口令控制。

1.6 檢測指標

分別于造模前、造模后、針刺處理第3 次、第7 次、第10 次的后一日和針刺處理結束后的第12 日，檢測家兔血清中SF 及TIBC 含量。于家兔耳緣靜脈取血1 ～1.5 mL，用離心機以3500 r/min 離心15 min。取出上清液置于EP 管中，存于-20℃冰箱中待測，采用放免法檢測。

1.7 數(shù)據(jù)處理方法

使用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，采用均數(shù)±標準差(±s) 表示。自身前后比較采用t 檢驗，組間比較采用ANOVA 方差分析，以P ＜0.05 作為具有顯著性差異的標準。

2 結果

2.1 造模前后各組家兔SF、TIBC 比較

根據(jù)表1、2 可得知：造模前，各組家兔的血清鐵蛋白、總鐵結合力二項指標數(shù)值組間的比較為P ＞0.05，即各組數(shù)值造模前無顯著性差異。造模后，B、C、D、E、F 組與造模前數(shù)據(jù)相比，血清鐵蛋白數(shù)值明顯降低，總鐵結合力明顯升高，具有顯著差異( P ＜0.05) 。造模后各組血清鐵蛋白、總鐵結合力與同時間點空白組的數(shù)值相比亦具顯著性差異( P ＜0.05) ，說明血虛證家兔造模成功。

表1 造模前后各組家兔SF 值的比較 ( ±s，ng/mL)

表1 造模前后各組家兔SF 值的比較 ( ±s，ng/mL)

注：與造模前比較，▲P ＜0.05；與空白組比較，* P ＜0.05。

分組 n 造模前 造模后A( 空白組)10 143.32 ±10.67 142.50 ±12.44 B( 模型組) 9 149.05 ±4.86 132.97 ±11.15▲＊C( 小刺激量組) 10 148.83 ±3.99 136.90 ±8.79▲D( 小刺激量組) 9 140.87 ±11.13 126.72 ±11.27▲＊E( 大刺激量組) 9 140.83 ±12.47 125.85 ±10.30▲＊F( 大刺激量組) 10 142.07 ±15.27 127.52 ±15.32▲＊

表2 造模前后各組家兔TIBC 值的比較 ( ±s，umol/L)

表2 造模前后各組家兔TIBC 值的比較 ( ±s，umol/L)

注：與造模前比較，▲P ＜0.05；與空白組比較，* P ＜0.05。

分組 n 造模前 造模后A( 空白組)10 58.14 ±7.34 58.75 ±6.82 B( 模型組) 9 56.03 ±9.99 67.25 ±9.10▲＊C( 小刺激量組) 10 52.78 ±8.57 68.48 ±9.61▲＊D( 小刺激量組) 9 52.60 ±11 63.19 ±11.23▲＊E( 大刺激量組) 9 52.09 ±8.86 62.24 ±9.94▲F( 大刺激量組) 10 50.24 ±9.73 65.78 ±12.45▲＊

表3 治療前后各組家兔SF 值的比較 ( ±s，ng/mL)

表3 治療前后各組家兔SF 值的比較 ( ±s，ng/mL)

注：與針刺前比較，▲P ＜0.05；與空白組比較，* P ＜0.05；與模型組比較，◇P ＜0.05；與C 組比較，□P ＜0.05；與D 組比較，☆P ＜0.05。

組別 針刺處理前 針刺處理過程中 針刺處理結束后第3 次 第7 次 第2 天 第12 天A 組 142.50 ±12.44 143.84 ±8.08 139.26 ±12.92 140.07 ±12.33 139.16 ±6.50 B 組 132.97 ±11.15 140.80 ±13.26 136.99 ±13.23 130.78 ±15.09 146.78 ±8.22▲C 組 136.90 ±8.79 144.13 ±11.25 142.74 ±16.03 146.56 ±9.94▲◇ 146.34 ±9.76▲＊D 組 126.72 ±11.27* 138.59 ±16.79 139.28 ±12.22▲ 48.97 ±8.34▲◇ 144.84 ±8.56▲E 組 125.85 ±10.30* 138.07 ±16.28□ 138.76 ±17.54 135.18 ±17.56 140.71 ±14.91＊□F 組 127.52 ±15.32* 131.42 ±17.46＊◇□☆ 133.67 ±14.28 134.94 ±15.41□☆ 132.61 ±14.89□☆◇

表4 治療前后各組家兔TIBC 值的比較 ( ±s，umol/L)

表4 治療前后各組家兔TIBC 值的比較 ( ±s，umol/L)

注：與針刺前比較，▲P ＜0.05；與空白組比較，* P ＜0.05；與模型組比較，◇P ＜0.05。

組別 針刺處理前 針刺處理過程中 針刺處理結束后第3 次 第7 次 第2 天 第12 天A 組 58.75 ±6.82 57.62 ±7.54 64.65 ±8.47 63.77 ±8.3158.69 ±6.73 B 組 67.25 ±9.10* 64.79 ±12.74 66.19 ±9.05 65.87 ±10.93 62.94 ±11.93 C 組 68.48 ±9.61* 69.98 ±7.26* 66.53 ±8.49 67.94 ±13.45 58.84 ±6.61▲D 組 63.19 ±11.23* 63.60 ±10.61* 64.36 ±8.82 61.38 ±5.41 51.34 ±8.82▲◇E 組 62.24 ±9.94* 71.92 ±9.61* 63.36 ±10.07 56.58 ±7.03 51.96 ±10.58▲◇F 組 65.78 ±12.45 71.94 ±5.9*59.85 ±8.07 59.24 ±9.45 59.05 ±12.07

2.2 治療前后各組家兔SF、TIBC 的分析比較

SF：根據(jù)表3 可知，與模型組比較，針刺處理結束后第2 天，C、D 組的SF 值明顯增高( P ＜0.05) ； 針刺處理第3 次和針刺處理結束后第12 天，F(xiàn) 組的SF 值明顯降低( P ＜0.05) 。與C 組比較，針刺處理第3 次和針刺處理結束后第12 天，E、F 組的SF 值有顯著性差異( P ＜0.05) ； 針刺處理結束后第2 天，F(xiàn) 組的SF值有顯著性差異( P ＜0.05) 。與D 組比較： 針刺處理第3 次，針刺處理結束后第2 天、第12 天，F(xiàn) 組有顯著性差異( P ＜0.05) 。

TIBC：根據(jù)表4 可知，與模型組比較，針刺處理結束后第12 天，D、E 組的TIBC 值明顯降低( P ＜0.05) ；在各時間點，C、D、E、F 之間的TIBC 值均無顯著性差異( P ＞0.05) 。

3 討論

3.1 指標選取

SF 是血液去鐵蛋白和鐵核心Fe3+形成的復合物，是檢查體內鐵缺乏的最靈敏的指標；TIBC 是指血清中轉鐵蛋白與鐵結合的總量，反映了轉鐵蛋白與鐵結合的能力。在失血的情況下，體內血細胞和鐵大量丟失，SF 降低；當體內貯存鐵減少到不足以補償功能狀態(tài)鐵時，鐵蛋白、血清鐵和轉鐵蛋白飽和度減低，此時TIBC升高。本實驗采用放血加適當限食的方法來制備血虛證模型，可引起體內貯存鐵缺乏［7-9］，導致SF 值降低，TIBC 值代償性升高［10-11］。

3.2 針刺補瀉效應

與模型組比較，針刺處理結束后第2 天，C、D 組的SF 值明顯增高( P ＜0.05) ，說明小刺激量提插法的SF值恢復較好，呈現(xiàn)補的效應，但未必是提插補法的效應，因為針刺足三里穴本身就有補的作用。與模型組比較，針刺處理第3 次和針刺處理結束后第12 天，F(xiàn)組的SF 值明顯降低( P ＜0.05) 。說明大刺激量提插法的SF 值恢復較差，呈現(xiàn)瀉的效應。

與C 組比較，針刺處理第3 次和針刺處理結束后第12 天，E、F 組的SF 值明顯較低( P ＜0.05) ；針刺處理結束后第2 天，F(xiàn) 組的SF 值明顯較低( P ＜0.05) ，說明大刺激量提插法的SF 值恢復明顯不如小刺激量提插法，二者有顯著差別。

與D 組比較，針刺處理第3 次，針刺處理結束后第2 天、第12 天，F(xiàn) 組的SF 值明顯較低( P ＜0.05) 。說明大刺激量提插法的SF 值恢復明顯不如小刺激量提插法，二者有顯著差別。

與模型組比較，針刺處理結束后第12 天，D、E 組的TIBC 值明顯降低( P ＜0.05) ，說明D、E 組的TIBC值恢復較好，這也說明大刺激量提插法E 組未必一定呈現(xiàn)瀉的效應，有時也可能是補，刺激量的大小也是相對的。

3.3 結論

對血虛證家兔的血清鐵蛋白的影響方面，以提插幅度、頻率、時間決定的小刺激量組和大刺激量組之間具有不同效應，小刺激量組恢復速度較快。針刺提插補瀉法的刺激量大小與補瀉效應有一定相關性，提插幅度小、頻率低、操作時間短的小刺激量手法呈現(xiàn)補法效應；提插幅度大、頻率高、操作時間長的大刺激量手法呈現(xiàn)瀉法效應。

［1］ 歐敏，陳如泉.血虛家兔模型紅細胞變形性與SOD、LPO 變化的實驗研究［J］.遼寧中醫(yī)雜志，1996，23(3) ：139-140

［2］ 梁毅，魯新華.血虛證免疫功能變化規(guī)律的臨床及實驗研究［J］.實用中西醫(yī)結合雜志，1998，11(11) ：961-962

［3］ 梁毅，方碧琴，魯新華，等.血虛證小鼠模型的制作及評價［J］. 湖北中醫(yī)雜志，2001，23(9) ：3-5

［4］ 史旭芹，唐于平，李偉霞，等. 大鼠慢性失血性血虛模型造模方法的研究與評價［J］.中國藥理學通報，2013，29(3) ：437-441

［5］ 陳靜子，劉陽陽，郭義.針刺基本手法量效作用關系研究進展［J］.針灸臨床雜志，2013，29(8) ：71-75

［6］ 李孟漢，郭茂娟，湯德安，等. 針刺手法對家兔穴區(qū)組織損傷的形態(tài)學觀察［J］.天津中醫(yī)藥，2012，29(6) ：548-551

［7］ 彭渝.血清鐵蛋白在急性失血患者中的臨床意義［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2003，19(1) ：12-13

［8］ 陳志敏.在貧血性疾病的診斷中骨髓鐵染色、血清鐵蛋白相關性研究的意義［J］.醫(yī)學研究雜志，2013，42(4) ：166-170

［9］ 彭碧，曾白華，陳小紅.鐵代謝相關血清學指標在貧血診斷中的應用價值［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2014，35(5) ：552-556

［10］ 何玉紅，封彩云.SI SF TIBC 與Stfr 4 項鐵指標檢測對缺鐵性貧血與慢性疾病性貧血診斷價值的探討［J］. 延安大學學報，2010，8(2) ：56-57

［11］ 石林階，陳昌華，陳國林，等. 肝血虛證輔助實驗診斷指標的初步研究［J］.湖南中醫(yī)學院學報，1999，19(12) ：30-32