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    水分脅迫對蘭花“曙光”生理生化指標(biāo)的影響研究

    2015-07-09 11:06:39徐銳仙劉忠貴
    安徽農(nóng)學(xué)通報(bào) 2015年12期
    關(guān)鍵詞:水分脅迫生理生化指標(biāo)曙光

    徐銳仙+劉忠貴

    摘 要:以蘭花“曙光”為材料,研究初花期水分脅迫對植株的葉綠素、可溶性糖、可溶性蛋白、淀粉和氨基酸含量的影響。結(jié)果表明:與對照處理(5d)澆水一次的處理對植株產(chǎn)生的效果相比,每隔15d澆水一次植株的葉綠素、可溶性糖、可溶性蛋白和游離氨基酸含量最高,每隔10d澆水一次和每隔15d澆水一次植株的淀粉都較高,且差異不顯著,同時(shí)每隔20d澆水一次時(shí),上述生理生化指標(biāo)含量均下降,表明隨水分脅迫強(qiáng)度的加劇,葉綠素、可溶性糖、可溶性蛋白和游離氨基酸積累下降。

    關(guān)鍵詞:蘭花“曙光”;水分脅迫;生理生化指標(biāo)

    中圖分類號(hào) S68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731(2015)12-32-04

    1 引言

    ‘曙光是由母本西藏虎頭蘭‘黃素花(Cymbidium tracyanum L.Castle)和父本大雪蘭(Cymbidium mastersii)雜交選育而成的蘭花新品種。四季常綠,葉帶狀,14~20枚;花葶高52~55cm,著花6~12朵,花朵自然水平展開9.6~13.2cm,有香味;萼片和花瓣均為金黃至卵黃色,切花瓣稍寬(1.4±0.2)cm,唇瓣左右裂片之間有2行金黃色毛,合蕊柱背和腹面為紅色;花期40~60d,瓶插期20~45d。適宜在亞熱帶或氣候相近的溫暖地區(qū)保護(hù)地栽培,并且該植物具有適應(yīng)范圍、溫度的廣泛性的特點(diǎn),為其推廣性的栽培及觀賞方面的應(yīng)用提供了可能性[1]。

    植物除因土層中缺水引起水分脅迫外,干旱、淹水、冰凍、高溫或鹽堿條件等不良環(huán)境作用于植物體時(shí),都可能引起水分脅迫。不同植物及品種對水分脅迫的敏感度不同,影響不一。如劉福建等[2]報(bào)道了水分脅迫對澳洲堅(jiān)果生理生化指標(biāo)的影響,表明在水分脅迫下,處理間的葉綠素、總糖和淀粉含量隨水分脅迫強(qiáng)度的加劇而下降。王丹等[3]報(bào)道了水分脅迫對草莓葉片生理特性的影響,表明隨著脅迫程度的增加和脅迫時(shí)間的延長,可溶性糖和脯氨酸的積累增加。王存綱等報(bào)道了水分脅迫對大巖桐生理生化指標(biāo)的影響[4],湯偉權(quán)等報(bào)道了水分脅迫對大葉鐵線蓮生理生化指標(biāo)的影響[5],李光等報(bào)道了[6]水分脅迫對金線蘭地上莖組培苗生理生化的影響。而對于水分脅迫下蘭花新品種“霞光”花期植株的生理特性指標(biāo)的研究目前尚未見報(bào)道。為此,本研究通過測定分析水分脅迫不同時(shí)間與對照處理下蘭花“霞光”的生理生化的變化規(guī)律,探索水分脅迫與蘭花“霞光”花期的關(guān)系,為蘭花的抗旱機(jī)理和栽培技術(shù)提供理論依據(jù)。

    2 材料與方法

    2.1 試驗(yàn)材料 供試材料為蘭花‘曙光植株,選擇外形、株高和葉片數(shù)大致相當(dāng)?shù)模?年復(fù)花的優(yōu)良植株,均為本課題組的自主培育的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的蘭株。

    2.2 試驗(yàn)方法 試驗(yàn)于2013年7月在公司大棚內(nèi)進(jìn)行,將挑選出的12盆植株分為4組,每組3盆,對植株進(jìn)行編號(hào)。采用每隔5d、10d、15d、20d澆一次水的控水方法,待到植株開花的初期,于早晨8:00~9:00,選取開花植株的葉片,并洗凈待測。栽培環(huán)境:大棚內(nèi)布有20%的遮光網(wǎng),栽培基質(zhì)一律使用1/4樹皮+1/4泥炭+1/4椰糠+1/4陶粒的混合基質(zhì)[7],日溫(22±2℃),夜溫(12±2℃)。

    2.3 測定方法

    2.3.1 葉綠素的測定方法[8] 稱取新鮮葉片0.1g,剪碎,放入研缽中,加入少量石英砂、碳酸粉及2~3mL80%丙酮,研磨勻漿,再加入純丙酮10mL研成勻漿,暗處靜置約10min。將提取液過濾到25mL棕色容量瓶中,用丙酮反復(fù)沖洗研缽與研棒數(shù)次,并用少量丙酮反復(fù)沖洗濾紙和殘?jiān)?,直到無綠色為止,以便色素全部轉(zhuǎn)移入容量瓶,最后用純丙酮定容至25mL刻度線,搖勻,并保存于暗處備用檢測。在波長663nm和645nm下測定吸光度(A663和A645),依據(jù)公式(1)~(4),分別計(jì)算出葉綠素a和葉綠素b的濃度:

    Ca=12.72A663-2.59A645 (1)

    Cb=20.13A645-5.03A663 (2)

    葉綠素CT=Ca+Cb (3)

    式中:Ca和Cb分別為葉綠素a和葉綠素b的濃度(mg·g-1)。

    葉綠體色素含量(mg·g-1FM)=

    [C×提取液總體積(mL)×稀釋倍數(shù)FM(g)×1000] (4)

    式中:C:葉綠體色素的濃度(mg·g-1);FM:鮮重(g)。

    2.3.2 可溶性糖、淀粉含量的測定方法(蒽酮法)[8] 稱取蘭花葉片鮮樣0.5g,剪碎放入具塞試管中,然后加入蒸餾水10mL,在水浴鍋中沸水浴20min,冷卻后過濾,濾液收集在100mL容量瓶中,定容即為可溶性糖待測液。每組樣品重復(fù)3次。將提取可溶性糖以后剩余的殘?jiān)迫朐嚬苤?,添?0mL蒸餾水,沸水浴15min,加入9.2mol·L-1的高氯酸溶液2mL,提取15min冷卻后過濾,定容至100mL,即為淀粉待測液,每組樣品重復(fù)3次。待測液分別在620nm波長下測定吸光度。代入公式(5)、(6)計(jì)算結(jié)果:

    可溶性糖(mg·g-1)=[標(biāo)準(zhǔn)曲線所查出的值(μg)/103×提取液總體積(mL)×稀釋倍數(shù)樣品鮮重(g)×測量時(shí)加樣量(mL)×100] (5)

    淀粉含量(mg·g-1)=[標(biāo)準(zhǔn)曲線所查出的值(μg)/103×提取液總體積(mL)×0.9樣品鮮重(g)×測量時(shí)加樣量(mL)] (6)

    2.3.3 可溶性蛋白含量測定方法[8](考馬斯亮藍(lán)法) 稱取蘭花葉片鮮樣0.2g,剪碎加入少許的石英砂和蒸餾水研磨,之后轉(zhuǎn)入10mL的容量瓶(用蒸餾水沖洗研缽2~3次合并于容量瓶中),定容至10mL。搖勻之后,取3mL勻漿移入離心管中,5 000g,離心10min,上清液移入燒杯中即為待測溶液。在595nm處,測定吸光度,并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查的蛋白質(zhì)的含量。代入公式(7)計(jì)算結(jié)果:

    可溶性蛋白含量=[標(biāo)準(zhǔn)曲線所查出的值(μg)/103×提取液總體積(mL)×稀釋倍數(shù)樣品鮮重(g)×測量時(shí)加樣量(mL)] (7)

    2.3.4 游離氨基酸含量的測定方法(茚三酮法)[9] 取葉片0.5g,剪成0.5cm寬的碎段,放入20mL的刻度試管中,加10mL蒸餾水,沸水浴加熱提取20min,冷卻后備用。用7200分光光度計(jì)比色(610nm、1cm光徑的比色皿),讀出吸光度(A)查標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出樣品氨基態(tài)氮的含量。代入公式(8)計(jì)算結(jié)果:

    氨基酸含量=[標(biāo)準(zhǔn)曲線所查出的值(μg)/103×提取液總體積(mL)×稀釋倍數(shù)樣品鮮重(g)×測量時(shí)加樣量(mL)] (8)

    2.4 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用Excel 2003進(jìn)行繪制,處理;用統(tǒng)計(jì)分析軟件dps7.05進(jìn)行方差分析

    3 結(jié)果與分析

    3.1 水分脅迫對葉綠素含量的影響 從試驗(yàn)結(jié)果可以看出,隨著水分脅迫處理天數(shù)不同,蘭花“曙光”葉片中的葉綠素含量有明顯的差異(表1、表2)。由圖1可知,以對植株進(jìn)行5d澆水為對照,對植株進(jìn)行15d處理過的蘭花葉綠素含量顯著增加,增加幅度最大,葉綠素含量高于對照5d24.3%,10d16%,20d6.0%(P<0.01);對植株進(jìn)行10d的處理與對照相較,葉綠素含量上升不顯著,上升幅度不顯著,高于對照7.2%(P<0.01);而進(jìn)行隔20d澆水一次的處理蘭花葉片中的葉綠素含量上升量在10d處理和15d處理之間,分別高于10d處理9.3%,低于15d處理5.7%(P<0.01)。

    3.2 水分脅迫對可溶性糖含量的影響 從試驗(yàn)結(jié)果可以看出,水分脅迫對可溶性糖有明顯影響(表3、表4)。由圖2可知,以5d澆水一次的處理為對照,對植株15d澆水一次的處理中可溶性糖含量顯著增加,高出216.8%(P<0.01),其增加量為最高;對蘭花進(jìn)行15d澆水的組增加趨勢不明顯,上升趨勢最小,比5d澆水的高出47.6%(P<0.01);水分脅迫處理天數(shù)為20d的處理中可溶性糖含量增加幅度介于15d處理與10d處理之間,高于對照組189.3%,低于15d處理8.7%,高于10d處理95.7%(P<0.01)。

    3.3 水分脅迫對淀粉的影響 從試驗(yàn)結(jié)果可以看出,水分脅迫對葉片中淀粉含量有一定影響(表5、表6)。由圖3可知,以蘭花進(jìn)行5d澆水的水分脅迫處理組為對照,相隔10d澆水的組植株葉片中淀粉含量明顯增加,增加量最高,為47.6%(P<0.01),15d澆水一次的處理次之,為32.6%(P<0.01),每20d澆水一次的處理中淀粉含量增加幅度較之對照最不顯著,上升量最低,高于對照17.5%(P<0.01)。

    3.4 水分脅迫對可溶性蛋白的影響 從試驗(yàn)結(jié)果可以看出,受水分脅迫影響,可溶性蛋白含量有著明顯變化(表7、表8)。由圖4可知,每隔15d進(jìn)行澆水的組與每隔5d澆水的處理(對照)相比,葉片中的可溶性蛋白含量顯著增加,增加91.3%(P<0.01)。10d澆水一次的處理中的可溶性蛋白含量與對照組中的差異不顯著,高出48.3%(P<0.01)。20d澆水的處理有上升趨勢,比5d澆水的對照高76.9%,高出變化趨勢低于15d處理14.9%但高于10d處理10.7%(P<0.01)。

    3.5 水分脅迫對游離氨基酸含量的影響 從試驗(yàn)結(jié)果可以看出,隨著對土壤中水分含量的改變,蘭花葉片中游離氨基酸的含量有明顯差異(表9、表10)。由圖5可知,對蘭花進(jìn)行15d澆水處理的組,其葉片中的游離氨基酸含量明顯高于5d澆水的處理164.7%(P<0.01),澆水10d的處理與對照5d為為澆水相比,蘭花葉片中的氨基酸含量,沒有變化,間隔最長(20d)的組中游離氨基酸含量明顯下降,顯著低于對照27.3%,低于氨基酸含量最高的15d處理62.2%(P<0.01)。

    4 討論

    葉綠素是植物光合色素中最重要的一類色素,其含量可受多種逆境的脅迫而改變。葉綠素含量的多少在一定程度上反映了植物光合作用強(qiáng)度的高低,從而影響植物生長。在水分脅迫環(huán)境中,植物為了減緩由脅迫造成的生理代謝不平衡,細(xì)胞大量積累一些小分子有機(jī)化合物,如脯氨酸、甜菜堿等,以通過滲透調(diào)節(jié)來降低水勢,維持較高的滲透壓,保證細(xì)胞的正常生理功能。植物中的可溶性糖是水分脅迫誘導(dǎo)的小分子溶質(zhì)之一,可溶性糖類參與滲透調(diào)節(jié),并可能在維持植物蛋白質(zhì)穩(wěn)定方面起到重要作用[10]。水分虧缺時(shí)細(xì)胞合成過程減弱而水解過程加強(qiáng),淀粉水解為糖,蛋白質(zhì)水解形成氨基酸,水解產(chǎn)物又在呼吸中消耗;水分虧缺初期由于細(xì)胞內(nèi)淀粉、蛋白質(zhì)等水解產(chǎn)物增亥,吸呼底物增加,促進(jìn)了呼吸,時(shí)間稍長,呼吸底物減少,呼吸速度即降低,導(dǎo)致正常代謝進(jìn)程紊亂,代謝失調(diào)。在水分脅迫下,植物內(nèi)的正常蛋白質(zhì)合成會(huì)受到抑制。可溶性蛋白與調(diào)節(jié)植物的滲透勢有關(guān),高含量的可溶性蛋白可以維持植物細(xì)胞較低的滲透勢,抵抗干旱帶來的迫害[11]。氨基酸是一類帶有氨基(-NH2)或亞氨基(-NH)的有機(jī)酸的總稱,是細(xì)胞的重要組成部分,在植物生命活動(dòng)中擔(dān)負(fù)著各種生理作用[12]。水分脅迫使植物中游離氨基酸增高,這些游離氨基酸的增加,對維持植物水勢起到滲透調(diào)節(jié)作用,同時(shí)也是脅迫下植物貯存物質(zhì)和能量的一種形式,以免造成過多的損害消耗并緩解分解產(chǎn)物引起的毒害[13]。由本次研究結(jié)果表明,每隔15d澆水一次的水分脅迫處理的植株葉綠素、可溶性糖、可溶性蛋白和游離氨基酸含量最高,每隔10d澆水一次和每隔15d澆水一次植株的淀粉都較高,且差異不顯著,而每隔20d澆水一次時(shí),上述生理生化指標(biāo)含量均下降,說明每隔20d澆水一次時(shí),已對蘭花植株產(chǎn)生了毒害。本研究的結(jié)論與上述相關(guān)研究結(jié)論一致。

    5 結(jié)論

    對蘭花“曙光”植株開花前和花期進(jìn)行每間隔15d一次的澆水的水分脅迫處理,促進(jìn)了葉綠素、可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白和游離氨基酸的合成;每隔20d澆水一次時(shí),上述生理生化指標(biāo)含量均下降,說明隨著水分脅迫強(qiáng)度的加劇,葉綠素、可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白和游離氨基酸積累均在下降。因此,在栽培基質(zhì)通透性較好的情況下,建議蘭花‘曙光不超過15d澆一次水為宜。

    參考文獻(xiàn)

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