泌尿系感染檢測(cè)應(yīng)用快速初篩鑒定培養(yǎng)基的臨床價(jià)值探討

張亞南+黃柳桓+曹碩+張國(guó)軍+康熙雄

[摘 要] 目的：為基層醫(yī)院和社區(qū)提供簡(jiǎn)單、快速細(xì)菌初篩鑒定方法。方法：采用麥康凱瓊脂、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基及常規(guī)尿培養(yǎng)方法，隨機(jī)檢驗(yàn)北京天壇醫(yī)院泌尿系感染患者的尿標(biāo)本。結(jié)果：隨機(jī)檢測(cè)尿培養(yǎng)標(biāo)本20份，“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基細(xì)菌初篩鑒定與微生物室細(xì)菌鑒定報(bào)告一致（Pearson c2=0.000，P=1.000）。該檢驗(yàn)方法比常規(guī)細(xì)菌檢驗(yàn)方法提前一天或兩天報(bào)告，加快了檢驗(yàn)周期。結(jié)論：“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基分離、鑒定同時(shí)進(jìn)行，具有快速、簡(jiǎn)單、易操作的優(yōu)點(diǎn)，是一種適合在基層醫(yī)院和社區(qū)開(kāi)展、推廣、普及應(yīng)用的細(xì)菌鑒定方法。

[關(guān)鍵詞] 培養(yǎng)基；細(xì)菌培養(yǎng)；泌尿系感染；檢驗(yàn)周期

中圖分類(lèi)號(hào)：R446 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： B 文章編號(hào)：2095-5200（2015）03-088-03

目前，我國(guó)三級(jí)醫(yī)院臨床微生物實(shí)驗(yàn)室普遍使用全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定儀，節(jié)省人力，顯著提速細(xì)菌標(biāo)本檢驗(yàn)周期。但是，仍有許多基層醫(yī)院依然使用傳統(tǒng)的手工操作進(jìn)行細(xì)菌鑒定工作。傳統(tǒng)手工操作鑒定繁瑣、速度緩慢、需要專(zhuān)業(yè)技術(shù)培養(yǎng)。如果基層醫(yī)院開(kāi)展細(xì)菌快速初篩鑒定培養(yǎng)，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)耐藥菌株、盡早隔離、早期合理選擇抗菌藥診治患者，減少醫(yī)院/社區(qū)感染，同時(shí)也可以緩解三級(jí)醫(yī)院患者就診量，提高患者生命質(zhì)量，減少衛(wèi)生醫(yī)療支出。依據(jù)我國(guó)尿培養(yǎng)細(xì)菌譜及耐藥特點(diǎn)，創(chuàng)新設(shè)計(jì)“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基，即麥康凱瓊脂、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基于一塊平皿，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)類(lèi)似報(bào)道。本研究探討“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基的實(shí)用性，為基層醫(yī)院和社區(qū)的提供簡(jiǎn)單、快速的細(xì)菌初篩鑒定方法。

1 對(duì)象與方法

1.1 一般資料

嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，收集2014年3月至4月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院尿路感染患者尿標(biāo)本20份。

1.2 方法和設(shè)備

“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基，即麥康凱瓊脂、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基。麥康凱瓊脂（BD公司）、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基（生物梅里埃）和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基（博賽科瑪嘉公司）配制參考《臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作》[1]、實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作（SOP）及試劑說(shuō)明書(shū)，澆注90mm平皿備用。取中段尿，用定量接種環(huán)取尿液10μL分別接種于各瓊脂平板上，5%～10%CO2、35℃培養(yǎng)18～24h，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，并進(jìn)行血瓊脂平板菌落計(jì)數(shù)。血瓊脂平板生長(zhǎng)菌落數(shù)乘以100即每毫升尿液的菌落數(shù)。根據(jù)菌落特征和涂片染色等報(bào)告結(jié)果。

20份標(biāo)本分別采用“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基菌株鑒定及常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)、BD PhoenixTM細(xì)菌鑒定藥敏儀檢測(cè)兩種方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基通過(guò)血平板判定患者有無(wú)細(xì)菌感染。具體為何種細(xì)菌感染根據(jù)培養(yǎng)基表面的菌落形態(tài)及顏色等進(jìn)行判定。培養(yǎng)48h血平板無(wú)菌落生長(zhǎng)報(bào)告“無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”；血平板生長(zhǎng)、麥康凱瓊脂不生長(zhǎng)、革蘭染色報(bào)告革蘭陽(yáng)性細(xì)菌，菌落數(shù)XX CFU/mL；血平板生長(zhǎng)、麥康凱瓊脂生長(zhǎng)，科瑪嘉ESBL顯色培養(yǎng)基生長(zhǎng)直接鑒定報(bào)告：大腸桿菌呈紅色；克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬、檸檬酸菌屬呈金屬藍(lán)；其他革蘭陰性菌有褐色暈環(huán)；血平板生長(zhǎng)、科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基生長(zhǎng)直接鑒定報(bào)告：白色念珠菌菌落呈綠色、翠綠色；熱帶念珠菌呈藍(lán)灰色、鐵藍(lán)色；克柔假絲酵母菌呈現(xiàn)粉紅色、模糊有微毛、菌落較大；光滑念珠菌呈現(xiàn)紫色；其他念珠菌呈現(xiàn)白色。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察并對(duì)比兩種培養(yǎng)方法的報(bào)告生成時(shí)間及診斷符合率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)使用百分比（%）進(jìn)行表示，計(jì)數(shù)資料采用c2檢驗(yàn)。P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鑒定結(jié)果比較

“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基檢測(cè)尿培養(yǎng)細(xì)菌初篩鑒定結(jié)果與常規(guī)細(xì)菌報(bào)告結(jié)果一致（表1）?；颊?、2、4和5尿標(biāo)本分離菌株均為產(chǎn)超光譜β-內(nèi)酰胺酶的耐藥株。兩種方法比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pearson c2=0.000，P=1.000），說(shuō)明“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基與常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)鑒定方法具有相同準(zhǔn)確度。

2.2 兩種方法檢驗(yàn)周期比較

“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基方法比常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)方法提前一天或兩天報(bào)告結(jié)果（表2）。

3 討論

泌尿系感染（urinary tract infection，UTI）是臨床常見(jiàn)感染性疾病之一。美國(guó)每年有700萬(wàn)人因泌尿系感染就診，100萬(wàn)就診急診，10萬(wàn)人住院治療[3-4]。住院患者泌尿系感染占35%[5]。約25%～50%健康女性曾患單純性泌尿系感染[6]。泌尿系感染也是小兒常見(jiàn)病[7]，且臨床表現(xiàn)不典型，美國(guó)每年新確診的泌尿系感染患兒占兒童總數(shù)2.4%～2.8%[8]。泌尿系感染已成為常見(jiàn)病、多發(fā)病，且發(fā)病率高、發(fā)病人群廣。

我國(guó)泌尿系感染病原菌以腸桿菌科細(xì)菌為主，占38.1%～77.3%，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、糞腸球菌是感染的主要病原菌[9-14]。尿培養(yǎng)是診斷泌尿系感染的金標(biāo)準(zhǔn)[15]，但是耗時(shí)長(zhǎng)（初次分離菌株需18～24h，再次鑒定需18～24h），縮短菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)時(shí)間是研究關(guān)注重點(diǎn)之一。

2012年，衛(wèi)生部實(shí)施《抗菌藥物臨床應(yīng)用管理辦法》（衛(wèi)生部令第84號(hào)），加強(qiáng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)抗菌藥物臨床應(yīng)用管理，規(guī)范抗菌藥物臨床應(yīng)用行為，促進(jìn)臨床合理應(yīng)用抗菌藥物，控制細(xì)菌耐藥，保障醫(yī)療質(zhì)量和醫(yī)療安全。該條例指出二級(jí)以上醫(yī)院應(yīng)當(dāng)根據(jù)實(shí)際需要，建立符合實(shí)驗(yàn)室生物安全要求的臨床微生物室，開(kāi)展微生物培養(yǎng)、分離、鑒定和藥敏試驗(yàn)等工作，提供病原學(xué)診斷和細(xì)菌耐藥技術(shù)支持，參與抗菌藥物臨床應(yīng)用管理[16]。因技術(shù)水平、經(jīng)濟(jì)條件和人力資源限制，基層單位自動(dòng)化檢測(cè)儀器和快速檢測(cè)鑒定系統(tǒng)應(yīng)用受到限制。因此，細(xì)菌實(shí)驗(yàn)診斷方法發(fā)展應(yīng)該強(qiáng)調(diào)應(yīng)用和滿(mǎn)足患者需求，本研究“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基涵蓋大部分細(xì)菌和真菌，分離和鑒定同時(shí)檢驗(yàn)，18～24h可早期篩查耐藥菌株，提高檢驗(yàn)報(bào)告周期。

本研究設(shè)計(jì)“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基，即麥康凱瓊脂、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基，是一種適合在基層醫(yī)院和社區(qū)開(kāi)展、推廣、普及應(yīng)用的方法，具有快速、簡(jiǎn)單、易操作優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基也可用于痰、無(wú)菌體液等標(biāo)本的快速初篩鑒定。

參 考 文 獻(xiàn)

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