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    阿德呋啉-β-環(huán)糊精包合物的制備及其在雞體內(nèi)藥動學(xué)研究

    2015-07-02 01:43:00蘇婷婷阮祥春周飛亞曾明華
    關(guān)鍵詞:阿德包合物藥代

    蘇婷婷,阮祥春,周飛亞,晏 苒,曾明華

    (安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科技學(xué)院,安徽 合肥 230036)

    阿德呋啉-β-環(huán)糊精包合物的制備及其在雞體內(nèi)藥動學(xué)研究

    蘇婷婷,阮祥春,周飛亞,晏 苒,曾明華

    (安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科技學(xué)院,安徽 合肥 230036)

    【目的】 研制阿德呋啉-β-環(huán)糊精包合物(阿德呋啉-β-CD),探討其在雞體內(nèi)的藥動學(xué)特征。【方法】 以溶液攪拌法制備阿德呋啉-β-CD包合物;以β-CD與阿德呋啉物質(zhì)的量比、包合溫度、冰醋酸與水的體積比和攪拌時間為影響因素,以綜合評分(包合率和增溶倍數(shù)之和)為指標(biāo),通過正交試驗(yàn)優(yōu)化制備條件;采用紫外光譜、薄層色譜和相溶解度法對制備的包合物進(jìn)行驗(yàn)證。將10只試驗(yàn)雞均分為2組,分別單次口服8 mg/kg阿德呋啉和阿德呋啉-β-CD包合物,采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)方法檢測不同時間點(diǎn)的血藥質(zhì)量濃度,用3p97藥代計算程序進(jìn)行分析,計算主要藥代動力學(xué)參數(shù)。【結(jié)果】 阿德呋啉經(jīng)包合作用形成了新的物相,優(yōu)選的阿德呋啉-β-CD制備工藝為:β-CD與阿德呋啉物質(zhì)的量比為1.5∶1,攪拌時間為8 h,冰醋酸與水體積比為2∶8,包合溫度為65 ℃。阿德呋啉-β-CD包合物在雞體內(nèi)的藥動學(xué)特征符合口服吸收二室模型,其主要藥代動力學(xué)參數(shù)峰質(zhì)量濃度(Cmax)為(246.76±17.88) ng/mL,達(dá)峰時間(T(peak))為(0.312±0.004) h,曲線下面積(AUC)為(1 614.91±1.232) (ng·h)/mL,相對生物利用度(F)為146.4%?!窘Y(jié)論】 成功制備了阿德呋啉-β-CD包合物,其在雞體內(nèi)達(dá)峰時間縮短,峰質(zhì)量濃度提高,表明包合后阿德呋啉在雞體內(nèi)的吸收速度、程度和生物利用度均提高。

    阿德呋啉;β-環(huán)糊精;包合物;雞;HPLS-MS/MS;藥代動力學(xué)

    雞球蟲病(Coccidiosis of fowl)是由一種或幾種艾美爾屬球蟲寄生于雞腸道上皮細(xì)胞引起的原蟲病,在世界各地普遍發(fā)生,致病率和死亡率較高,嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)[1]。生產(chǎn)中人們常用抗球蟲藥物防治雞球蟲病,但由于對抗球蟲藥物的長期盲目選用及不合理使用,造成球蟲對多數(shù)藥物產(chǎn)生了耐藥性,最終導(dǎo)致防治失敗。所以開發(fā)高效低毒的新抗球蟲藥并合理使用這些藥物,是保證球蟲病防治效果的最佳途徑。阿德呋啉(Adprin)是一種新型抗球蟲藥物,由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)藥理實(shí)驗(yàn)室研制,其化學(xué)名為9-(2-氯-6-氟苯基)腺嘌呤, 主要干擾球蟲核酸腺嘌呤合成,抑制次黃嘌呤在球蟲體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn),干擾球蟲核酸的合成,阻止球蟲發(fā)育,效果與國外的阿普希特(Arprinocid)類似。本課題組前期研究已證實(shí),阿德呋啉為高效低毒的抗球蟲藥,且和其他藥物不產(chǎn)生交叉耐藥性[2]。該藥理化性質(zhì)穩(wěn)定,但水溶性差,在臨床應(yīng)用和雞體吸收方面存在困難。β-環(huán)糊精(β-CD)及其衍生物(β-CDD)是近些年發(fā)展較快的新型藥物包合材料,其對熱穩(wěn)定,且對腎無毒副作用[3],β-CD包被難溶性藥物可改善藥物的溶解度、溶出速率與生物利用度。本試驗(yàn)以β-CD為包合材料,研制阿德呋啉-β-CD包合物,并進(jìn)一步探究了包合物在雞體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征,旨在為新藥新劑型的開發(fā)和臨床制定合理給藥方案提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    1.1.1 藥物與試劑 阿德呋啉,含量98%(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理實(shí)驗(yàn)室精制);β-CD,批號QB1613-92(孟州市華興生物化工有限責(zé)任公司);甲醇為色譜純試劑,其余試劑均為分析純。

    1.1.2 儀 器 主要儀器有:10 cm×20 cm硅膠GF254薄層板(上海工碩生物技術(shù)有限公司)、ZF-6紫外燈(上海楚柏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司)、HJ-5磁力攪拌器(常州國華電器有限公司)、UVmini-1240紫外分光光度計(日本島津有限公司)、API3000三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司,配Agilent 1100型高效液相色譜儀和電噴霧離子源)、MS3 Basic型漩渦混合器(德國IKA公司)、CR22G型高速冷凍離心機(jī)(日本日立公司)。

    1.1.3 試驗(yàn)動物 1日齡羅曼蛋雛雞購自安徽禽業(yè)有限公司,飼喂不含藥物的飼料,自由飲用溫水,飼養(yǎng)至60日齡。

    1.2 阿德呋啉-β-CD包合物的制備

    1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 以甲醇-水溶液(V(甲醇)∶V(水)=1∶1)為溶劑,將阿德呋啉配制成5,10,20,50和100 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,用紫外分光光度計于261 nm波長處測定其吸光度(OD261),以阿德呋啉標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫軸(x),以O(shè)D261為縱軸(y),利用Excel 2007繪制阿德呋啉紫外吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線,擬合回歸方程。

    1.2.2 阿德呋啉-β-CD包合物的制備方法 采用溶液攪拌法[4]制備阿德呋啉-β-CD包合物。稱取一定量阿德呋啉溶于少量冰醋酸,制成溶液Ⅰ;按投料比稱取適量β-CD于80~100 mL蒸餾水中,水浴加熱使其完全溶解,制成溶液Ⅱ。60 ℃恒溫攪拌條件下,緩緩將溶液Ⅱ滴加至溶液Ⅰ中。滴加完畢后,繼續(xù)60 ℃恒溫攪拌4~6 h,再于4 ℃冰箱靜置冷藏,析出藥物晶體后抽濾,用少量冰醋酸淋洗,去除游離的阿德呋啉,最后于70 ℃烘箱中烘干,過孔徑為 0.2 mm的篩,即得阿德呋啉β-CD包合物。

    1.2.3 最佳制備工藝的篩選 以綜合評分(增溶倍數(shù)與包合率之和)為考察指標(biāo),以β-CD與阿德呋啉物質(zhì)的量比(A)、包合溫度(B)、冰醋酸與水的體積比(C)和攪拌時間(D)為影響因子,按L9(34)正交設(shè)計進(jìn)行試驗(yàn),確定阿德呋啉-β-CD包合物的最佳制備工藝。試驗(yàn)因素及水平見表1。溶解度的測定方法為:分別取過量阿德呋啉和制得的包合物于50 mL容量瓶中,加蒸餾水定容,28 ℃條件下超聲處理(45 kHz,30 min),靜置,取上層液用0.45 nm微孔濾膜過濾,取1 mL濾液于100 mL容量瓶中,加甲醇-水溶液(V(甲醇)∶V(水)=1∶1)定容,用紫外分光光度計于261 nm處測定吸光值,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算溶解度。

    增溶倍數(shù)=包合物溶解度/阿德呋啉溶解度。

    包合率=包合物中阿德呋啉的量/阿德呋啉投入量×100%。

    表1 制備阿德呋啉-β-CD包合物正交試驗(yàn)的因素及水平Table 1 Factors and levels of orthogonal design for adprin-β-CD complex preparation

    1.2.4 包合物的驗(yàn)證 (1) 紫外光譜分析。按照包合物制備工藝中β-CD與阿德呋啉物質(zhì)的量比,稱取β-CD和阿德呋啉于廣口瓶中,搖晃使之混合均勻,得到物理混合物。分別取阿德呋啉、β-CD、阿德呋啉與β-CD物理混合物和阿德呋啉-β-CD包合物的甲醇-水溶液(V(甲醇)∶V(水)=1∶1),在200~500 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描。

    (2) 薄層色譜分析[5]。將阿德呋啉、β-CD、阿德呋啉與β-CD的物理混合物和阿德呋啉-β-CD包合物分別加甲醇制成2 mg/mL的溶液,備用。分別吸取以上4種溶液各5 μL于同一硅膠GF254薄層板[6]上點(diǎn)樣,以氯仿-甲醇-異丙醇-濃氨水-水混合物(體積比為25∶9∶4∶1∶1)為展開劑展開(展開距離為12.5 cm),取出,晾干,在紫外燈254 nm波長下觀察,比較4種被檢物質(zhì)的雜質(zhì)斑點(diǎn)。

    (3) 相溶解度分析[7-8]。配制0,0.005,0.01,0.015,0.02,0.03和0.04 mol/L β-CD水溶液,分別加入過量阿德呋啉,28 ℃條件下超聲(45 kHz,2 h)處理后用0.45 nm微孔濾膜過濾,用甲醇-水溶液(V(甲醇)∶V(水)=1∶1)稀釋100倍后,于261 nm處測定吸光值,根據(jù)吸光值和稀釋倍數(shù)計算各溶液中阿德呋啉的溶解度。以β-CD濃度為橫坐標(biāo)(x),阿德呋啉溶解度為縱坐標(biāo)(y)做圖,得相溶解度曲線和線性方程。

    1.3 阿德呋啉-β-CD包合物在雞體內(nèi)的藥動學(xué)

    1.3.1 雞血漿中阿德呋啉質(zhì)量濃度測定方法 采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)法測定雞血漿中阿德呋啉質(zhì)量濃度[9]。

    (1)HPLC-MS/MS條件。色譜柱Luna C18(2)柱(5 μm,150 mm×2.00 mm);柱溫38 ℃;流速200 μL/min;流動相A為體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸-甲醇溶液,流動相B為體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸水溶液;等度洗脫程序:以流動相A與流動相B混合液(體積比為75∶25)洗脫10 min。多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式;離子化模式:ESI(+);霧化氣流速:N250.0 L/min;噴霧電壓:5 500 V;輔助氣流速:N250.0 L/min;氣簾氣流速:N225.0 L/min;碰撞氣流速:N210 L/min。

    (2)血漿中阿德呋啉標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。取飼養(yǎng)至60日齡的非試驗(yàn)雞的血液,2 500 r/min離心15 min后留上層血漿作為空白血漿,-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩O蚩瞻籽獫{中加入不同質(zhì)量濃度阿德呋啉標(biāo)準(zhǔn)工作液,得到1,10,20,50,100,200,400和600 ng/mL的系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液,進(jìn)行HPLC-MS/MS分析,以阿德呋啉質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x),色譜峰面積為縱坐標(biāo)(y),利用Excel 2007繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,擬合標(biāo)準(zhǔn)方程。

    (3) HPLC-MS/MS的回收率及日內(nèi)、日間精密度試驗(yàn)。用空白血漿配制0.25,0.5,1,2 ng/mL阿德呋啉樣品。取2.0 mL樣品,向其中加1 mL甲醇超聲(45 kHz,5 min)提取,取提取液過SPE柱,流速為1 mL/min,用10 mL甲醇-水溶液(V(甲醇)∶V(水)=1∶1)淋洗SPE柱,負(fù)壓抽干,用5 mL洗脫液洗脫,于40 ℃下用N2吹干[10]。用甲醇2 mL溶解SPE柱中的殘余物,過0.22 μm的纖維素濾膜后進(jìn)行HPLC-MS/MS分析。依據(jù)特征離子質(zhì)量色譜峰信噪比(S/N,S為信號強(qiáng)度,N為背景噪聲強(qiáng)度)>3得到檢出限,S/N>10得到定量限。用雞的空白血漿配制50,200和400 ng/mL阿德呋啉標(biāo)準(zhǔn)液,每個質(zhì)量濃度做5個平行樣,按上述方法處理樣品后進(jìn)樣測定,計算回收率。一天內(nèi)重復(fù)做3次,計算日內(nèi)精密度;連續(xù)做3 d ,計算日間精密度。

    1.3.2 給藥方案與血樣采集 將飼養(yǎng)至60日齡的10只試驗(yàn)雞隨機(jī)分為2組,即試驗(yàn)組和對照組,給藥前禁食12 h,不禁水。試驗(yàn)組飼喂阿德呋啉-β-CD包合物,對照組飼喂阿德呋啉原藥,均為一次性口服給藥,給藥劑量為8 mg/kg。分別于給藥前0 h以及給藥后0.25,0.5,1,2,4,6,8,10,12,24和48 h,于雞的前翅靜脈定點(diǎn)采血3 mL,置于添加了肝素鈉的離心管中,2 500 r/min離心15 min,留取上層血漿作為血漿樣品,-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.3 方法適用性試驗(yàn) 取空白血漿、灌服阿德呋啉標(biāo)準(zhǔn)品后血漿樣品、灌服阿德呋啉后的血漿樣品、灌服阿德呋啉-β-CD包合物后的血漿樣品,分別按1.3.1(3)中的方法處理后,進(jìn)行HPLC-MS/MS分析。

    1.3.4 藥代動力學(xué)參數(shù)的測定 將給藥后采得的血漿樣品按1.3.1(3)中的方法處理后進(jìn)行HPLC-MS/MS儀分析,得到不同時間點(diǎn)的血藥濃度。藥時數(shù)據(jù)采用3p97藥代計算程序進(jìn)行房室模型擬合,得出雞一次性口服阿德呋啉及包合物后的藥時曲線圖,并比較2組數(shù)據(jù)的主要藥代動力學(xué)參數(shù)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 阿德呋啉紫外吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

    以阿德呋啉標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫軸(x),以O(shè)D261為縱軸(y),利用Excel 2007繪制的阿德呋啉紫外吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1,擬合得到的線性回歸方程為:y=0.006 03x+0.024 7,r2=0.999 9。說明5~100 μg/mL阿德呋啉與OD261線性關(guān)系良好。

    2.2 阿德呋啉-β-CD包合物最佳制備工藝的確定

    由表2可知,4個因素對包合結(jié)果(表2)的影響是A>D>C>B,優(yōu)選制備工藝為:A2D3C2B1,即 β-CD 與阿德呋啉物質(zhì)的量比為1.5∶1,攪拌時間為8 h,冰醋酸與水體積比為2∶8,包合溫度為65 ℃。最佳工藝制備的阿德呋啉-β-CD包合物的增溶倍數(shù)為17.7倍,包合率為71.4%。

    圖1 阿德呋啉的紫外吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard UV absorption curve of adprin

    表2 阿德呋啉-β-CD包合物制備工藝篩選的L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of L9(34) orthogonal experiment for selecting the best preparation conditions of adprin-β-CD

    2.3 阿德呋啉-β-CD包合物的驗(yàn)證

    2.3.1 紫外光譜分析 結(jié)果顯示,β-CD在波長200~500 nm的紫外區(qū)無吸收,說明輔料β-CD不干擾阿德呋啉的測定。阿德呋啉、阿德呋啉與β-CD的物理混合物以及阿德呋啉-β-CD包合物的紫外光譜圖一致(圖2),均在261 nm處有一個最大吸收峰,證明包合物中的主藥阿德呋啉未發(fā)生化學(xué)變化,該包合物是通過物理包合作用形成的。

    2.3.2 薄層色譜分析 薄層圖譜結(jié)果(圖3)顯示,在展開劑相同的條件下,阿德呋啉及其與β-CD物理混合物的甲醇溶液都有相同的雜質(zhì)斑點(diǎn),而包合物和β-CD的甲醇溶液則無雜質(zhì)斑點(diǎn)。表明阿德呋啉已被β-CD包合而不能顯示雜質(zhì)斑點(diǎn)。

    2.3.3 相溶解度分析 繪制相溶解度曲線(圖4),按照Higuchi分類法[11]可知該相溶解度曲線為典型的AL型,阿德呋啉溶解度隨β-CD濃度的增加呈線性增大,線性方程為y=0.040 3x+0.000 5,r2=0.976 8,其中x為β-CD濃度,y為阿德呋啉溶解度。由公式K=斜率/[截距(1-斜率)],計算出40 ℃下包合物的表觀穩(wěn)定常數(shù)K為83.98。說明在該濃度范圍內(nèi),原藥阿德呋啉與β-CD可形成包合物。

    圖2 β-CD、阿德呋啉及其二者物理混合物和包合物的紫外掃描結(jié)果A.β-CD; B.阿德呋啉;C.阿德呋啉與β-CD的物理混合物;D.阿德呋啉-β-CD包合物Fig.2 UV scanning spectrum of β-CD,adprin,physical mixture and inclusion complexA.β-CD;B.Adprin;C.Physical mixture;D.Inclusion complex

    圖3 阿德呋啉、β-CD及其二者物理混合物和包合物的薄層色譜圖A.阿德呋啉;B.β-CD;C.阿德呋啉與β-CD的物理混合物;D.阿德呋啉-β-CD包合物Fig.3 Thin layer chromatogram of adprin,β-CD,physical mixture of adprin and β-CD,and inclusion complexA.Adprin;B.β-CD;C.Physical mixture;D.Inclusion complex

    2.4 阿德呋啉-β-CD包合物在雞體內(nèi)的藥動學(xué)研究

    2.4.1 血漿中阿德呋啉標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 以阿德呋啉質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x),色譜峰面積為縱坐標(biāo)(y),利用Excel 2007繪制的血漿中阿德呋啉紫外吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖5,擬合得線性回歸方程為y=0.394 5x+0.763 2,r2=0.999 7(>0.999),表明峰面積與阿德呋啉質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。

    圖5 雞血漿中阿德呋啉的紫外吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Standard UV absorption curve of adprin in chicken plasma

    2.4.2 HPLC-MS/MS的回收率以及日內(nèi)、日間精密度試驗(yàn)結(jié)果 計算得到的最低檢測限(S/N=3)為0.7 ng/mL,最低定量限(S/N=10)為2.3 ng/mL。HPLC-MS/MS方法對血漿中50,200和400 ng/mL 阿德呋啉的回收率分別為(96.28±0.24)%,(92.86±0.17)%和(89.77±0.69)%;日內(nèi)精密度分別為3.16%,5.87%和3.47%;日間精密度分別為4.68%,5.23%和6.14%(表3)。證明該方法回收率良好,靈敏度高,可用于灌服阿德呋啉-β-CD包合物后雞血漿中阿德呋啉質(zhì)量濃度的測定。

    表3 阿德呋啉在雞血漿中的回收率和精密度(n=3)Table 3 Recovery and precision test of adprin in chicken plasma (n=3) %

    2.4.3 HPLC-MS/MS的適用性 由圖6可知,在設(shè)定的色譜、質(zhì)譜條件下,空白血漿對藥物測定無干擾,藥物分離良好。表明該方法適合雞血漿中阿德呋啉的檢測。

    圖6 空白及灌服阿德呋啉和包合物后雞血漿樣品的色譜圖
    A.空白血漿;B.灌服阿德呋啉標(biāo)準(zhǔn)品后血漿樣品;C.灌服阿德呋啉后血漿樣品;D.灌服阿德呋啉-β-CD包合物后血漿樣品
    Fig.6 Chromatograms of blank plasma and plasma samples of chickens in oral dosing adprin group
    A.Blank plasma;B.Plasma sample of standard adprin;C.Plasma sample of oral adprin;D.Plasma sample of oral inclusion

    2.4.4 主要藥動學(xué)參數(shù)測定 根據(jù)雞一次性口服阿德呋啉及阿德呋啉-β-CD包合物后不同時間的血藥質(zhì)量濃度(C)繪制藥時曲線(圖7),藥時數(shù)據(jù)經(jīng)3p97藥代計算程序處理,二者的結(jié)果均符合口服給藥二室模型(權(quán)重=1/C/C),模擬方程分別為C=2 682.293e-0.538t+18.851e-0.042t-2 701.144e-0.634t和C=231.738e-0.379t+27.054e-0.038t-258.792×e-42.167t。

    利用各時間點(diǎn)平均血藥濃度計算主要藥動學(xué)參數(shù),結(jié)果見表4。表4顯示,阿德呋啉包合前后T(peak)分別為(1.777±0.063)和(0.312±0.004) h,Cmax為(156.878±13.69)和(246.763±17.88) ng/mL。以阿德呋啉原料為參比,計算包合物的相對生物利用度F(AUC包合物/AUC原藥×100%)為146.4%。

    圖7 雞單劑量(8 mg/kg)灌服阿德呋啉及包合物后的藥時曲線
    Fig.7 Concentration-time curve of adprin and inclusion in chickens at a dose of 8 mg/kg

    表4 雞單劑量(8 mg/kg)灌服阿德呋啉及包合物后的藥代動力學(xué)參數(shù)表(n=5)Table 4 Pharmacokinetics parameters of adprin and inlusion complex after a dose of 8 mg/kg (n=5)

    注:A.分布相質(zhì)量濃度;Alpha.分布速度常數(shù);B.消除相質(zhì)量濃度;Beta.消除速度常數(shù);Ka.吸收速率常數(shù);V/F(c).表觀分布體積;T1/2α.分布半衰期;t1/2β.清除半衰期;t1/2ka.吸收半衰期;k21.由周邊室向中央室轉(zhuǎn)運(yùn)的一級速率常數(shù);k10.由中央室消除的一級速率常數(shù);k12.由中央室向周邊室轉(zhuǎn)運(yùn)的一級速率常數(shù);AUC.藥時曲線下面積;CL(s).清除率;T(peak).達(dá)峰時間;Cmax.峰質(zhì)量濃度;F.相對生物利用度。**表示阿德呋啉與包合物的T(peak)差異極顯著(P<0.01);*表示阿德呋啉與包合物的Cmax和AUC差異顯著 (P<0.05)。

    Note:A.Distribution phase content;Alpha.Distribution rate constant;B.Elimination phase content;Beta.Elimination rate constant;Ka.Absorption rate constant;V/F(c).Apparent volume of distribution;T1/2α.Distribution half-life;t1/2β.Elimination half-life;t1/2ka.Absorption half-life;k21.The primary rate constant of the transport of the central compartment by the peripheral chamber;k10.The primary rate constant of the central chamber elimination;k12.The primary rate constant of the transport of the peripheral chamber by the central compartment;AUC.Area under curve;CL(s).Total body clearance;T(peak).Peak time;Cmax.Peak quality concentration;F.Relative bioavailability.** indicates very significant difference onT(peak)between adprin and inclusion atP<0.01;* indicates significant difference onCmaxandAUCbetween adprin and inclusion atP<0.05.

    3 討論與結(jié)論

    3.1 包合物的篩選制備與鑒定

    β-CD分子是外表面親水而內(nèi)表面疏水的空腔,一定大小的難溶性藥物分子經(jīng)其包合后,可以不同程度地提高藥物的水溶性和生物利用度[12]。本研究通過正交試驗(yàn),以綜合評價(增溶倍數(shù)與包合率之和)為考察指標(biāo),篩選出了制備阿德呋啉-β-CD包合物的最佳工藝條件:β-CD與阿德呋啉物質(zhì)的量比為1.5∶1,攪拌時間為8 h,冰醋酸與水的體積比為 2∶8,包合溫度為65 ℃。制備的包合物在水中溶解度比阿德呋啉增大了17.7倍,包合率達(dá)71.4%。本試驗(yàn)采用紫外分光光度法、薄層色譜法[13]和相溶解度法對所制備的阿德呋啉-β-CD包合物進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果證實(shí)包合物制備成功。其中關(guān)于阿德呋啉的薄層色譜鑒別方法目前尚無相關(guān)報道,筆者經(jīng)過反復(fù)預(yù)試驗(yàn)建立了鑒定阿德呋啉的薄層色譜法,該方法簡單易行,分離效果良好,適用于阿德呋啉的初步鑒定。

    3.2 包合物的藥代動力學(xué)特征分析

    本試驗(yàn)采用HPLC-MS/MS測定雞血漿中藥物質(zhì)量濃度,優(yōu)化了吳麗君等[14]對阿德呋啉在雞體內(nèi)藥動學(xué)研究中的血漿處理方法,該方法更加方便、安全、高效,結(jié)果分離良好,峰形理想,靈敏度、回收率和精密度提高,適用于對阿德呋啉-β-CD包合物在雞體內(nèi)藥動學(xué)的研究。藥時數(shù)據(jù)經(jīng)3p97藥代計算程序處理后,得出阿德呋啉和阿德呋啉-β-CD包合物在雞體內(nèi)都屬于口服吸收二室模型,與吳麗君等[14]研究結(jié)果基本一致。從本研究的藥代參數(shù)來看,阿德呋啉-β-CD包合物達(dá)峰時間T(peak)縮短,由原藥的(1.777±0.063) h減少至(0.312±0.004) h,且峰質(zhì)量濃度Cmax由(156.878±13.69) ng/mL提高到(246.763±17.88) ng/mL。證明阿德呋啉經(jīng)β-CD包合后,在雞體內(nèi)的吸收速度和程度都有所提高,而消除速度常數(shù)(Beta)并沒有明顯差異,阿德呋啉-β-CD包合物可以維持較長時間的有效血藥濃度,這可能是因?yàn)榘衔飺碛懈玫娜芙庑?,從而改善了藥物在體內(nèi)的溶出和吸收[15]。以阿德呋啉為參比,阿德呋啉-β-CD包合物的相對生物利用度(F)為146.4%,證實(shí)阿德呋啉-β-CD包合物的藥物生物利用度提高,而二者的清除速率CL(s)相當(dāng),也驗(yàn)證了阿德呋啉-β-CD包合物是通過物理包合形成的,并未改變藥物在體內(nèi)的消除過程[16]。

    本試驗(yàn)通過對阿德呋啉-β-CD包合物的研制及其在雞體內(nèi)藥動學(xué)研究,成功制得阿德呋啉-β-CD包合物,提高了阿德呋啉的水溶性和生物利用度。為新藥新劑型的開發(fā)提供了參考,也為提高臨床治療效果及制定合理臨床給藥方案打開了思路。

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    Preparation of adprin-β-cyclodextrin inclusion complex and its pharmacokinetics in chicken

    SU Ting-ting,RUAN Xiang-chun,ZHOU Fei-ya,YAN Ran,ZENG Ming-hua

    (CollegeofAnimalScienceandTechnology,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei,Anhui230036,China)

    【Objective】 The aim of this study was to prepare the inclusion complex of adprin-β-cyclodextrin and evaluate its pharmacokinetic behavior in chicken.【Method】 Adprin-β-cyclodextrin inclusion complex was prepared using solution-stirring method.The influence factors were ratio of the amount of substance,temperature,volume ratio of acetic acid to water,and mixing time.The best preparation method was determined by orthogonal test using comprehensive score (sum of inclusion rate and solubilization ratio) as index.The identification of the inclusion complex was carried out by ultraviolet spectra,thin layer chromatography,and phase solubility method.The blood samples from 10 chickens fed with a single dose of either adprin or adprin-β-CD inclusion complex solusion were collected to measure adprin concentrations in plasma by HPLC-MS/MS.The pharmacokinetic parameters were analyzed with 3p97 software.【Result】 The inclusion complex was successfully prepared.The optimum preparation conditions were:molar ratio of β-cyclodextrin to adprin 1.5∶1,ratio of glacial acetic acid to water 2∶8,inclusion temperature 65 ℃,and time 8 h.The major pharmacokinetic parameters of adprin-β-cyclodextrin were:Cmax(246.76±17.88) ng/mL,T(peak)(0.312±0.004) h,andAUC(1 614.91±1.232) (ng·h)/mL,and relative bioavailability of adprin-β-cyclodextrin 146.4%.【Conclusion】 Adprin-β-CD inclusion complex was prepared successfully,and it could significantly improve the solubility bioavailability of adprin in chicken.

    adprin;β-cyclodextrin;inclusion complex;chicken;HPLS-MS/MS;pharmacokinetics

    2014-01-25

    安徽省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目“高效低毒抗球蟲新獸藥的研發(fā)”(KJ2012A115)

    蘇婷婷(1990-),女,安徽宣城人,在讀碩士,主要從事獸醫(yī)藥理學(xué)研究。E-mail:1015432812@qq.com

    曾明華(1957-),男,安徽合肥人,副教授,主要從事基礎(chǔ)獸醫(yī)藥理、藥劑學(xué)與動物毒理學(xué)研究。 E-mail:zmhzmh@ahau.edu.cn

    時間:2015-06-30 13:47

    10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.08.032

    S858.31;S859.79+5

    A

    1671-9387(2015)08-0063-08

    網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20150630.1347.032.html

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