PCV2與PPV共感染豬PBMCs對其白細(xì)胞介素轉(zhuǎn)錄時相影響

景亞星，張睿智，何瀟湘,蘭培英, 曹貝貝, 靳曉慧, 徐衛(wèi)松, 魏戰(zhàn)勇

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南 鄭州 450002；2.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院，河南 鄭州 450011；3.河南省動物性食品安全重點實驗室，河南 鄭州450002)

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PCV2與PPV共感染豬PBMCs對其白細(xì)胞介素轉(zhuǎn)錄時相影響

景亞星1，張睿智2，何瀟湘3,蘭培英3, 曹貝貝1, 靳曉慧3, 徐衛(wèi)松1, 魏戰(zhàn)勇1

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南 鄭州 450002；2.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院，河南 鄭州 450011；3.河南省動物性食品安全重點實驗室，河南 鄭州450002)

為分析PCV2 與 PPV 體外共感染對豬外周血單個核細(xì)胞( PBMC) 對其白細(xì)胞介素mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響，探討PCV2與PPV體外混合感染的致病機制。運用熒光定量PCR技術(shù)，測定和分析了PCV2和PPV感染PBMC后PCV2，PPV的病毒核酸含量及IL-1β，IL-6，IL-8，IL-12p35，IL-12p40，IL-13，IL-17，IL-18等的轉(zhuǎn)錄時相變化。結(jié)果表明，PCV2，PPV能夠感染PBMC細(xì)胞，PCV2/PPV共感染中PCV2，PPV的含量分別在24 h顯著最高(P<0.01)；PCV2，PPV單獨感染和PCV2與PPV共感染PBMC后引起IL-1β，IL-6，IL-8，IL-17轉(zhuǎn)錄水平上升，IL12p35，IL-12p40，IL-18轉(zhuǎn)錄水平明顯受到抑制。由PCV2,PPV共感染而引起的免疫反應(yīng)和免疫抑制比單獨感染更明顯。

豬細(xì)小病毒；豬圓環(huán)病毒；共感染；白細(xì)胞介素；外周血淋巴細(xì)胞

豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)，屬圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是最小、環(huán)狀、無折疊、無囊膜、單股的DNA病毒，是豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病(Porcine circovirus disease， PCVAD)的必須病原[1]。研究表明，該病毒是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)、豬皮炎與腎病綜合征(Porcine dermatitis and dephropathy syndrome，PDNS)等疾病的重要病原體，同時也與母豬繁殖障礙綜合征(SMEDC)、先天性震顫(CT)等有關(guān)[2-3]。其中，以PMWS是PCVAD的一種重要表現(xiàn)形式，該病可以導(dǎo)致斷奶后和育成期仔豬，尤其是5～12周齡的豬的進行性消瘦、呼吸困難和中樞神經(jīng)障礙等臨床癥狀，以及全身淋巴結(jié)炎癥等病理變化[4-6]。豬細(xì)小病毒(Porcineparvovirus, PPV)，屬細(xì)小病毒科，細(xì)小病毒屬，是圓形或六角形的、無囊膜的單股DNA病毒。該病毒主要引起母豬繁殖障礙，導(dǎo)致母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎、弱仔及母豬不育和新生仔豬大量死亡，同時還可引起仔豬的皮炎和腹瀉，尤其是在免疫程序不規(guī)范或存在免疫抑制病的豬群中。豬細(xì)小病毒在豬群中血清抗體陽性率達(dá)50%～80%，給畜牧業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。研究證明，PCV2或PPV單感染都不引起悉生豬發(fā)病，但是PCV2經(jīng)常同上述所說的病原呈現(xiàn)雙重或多重感染，引起豬的免疫抑制[7]。這2種病毒共同感染可引起豬群不同程度的消耗性疾病，如體重下降、衰竭、黃疸、貧血及實質(zhì)器官出現(xiàn)典型的肉芽腫性炎癥，還有肝炎、腸炎、腎炎等經(jīng)典的PMWS癥狀，然后引起相關(guān)疾病，給豬病的防治帶來新的挑戰(zhàn)。臨床發(fā)現(xiàn)PCV2和PPV時常伴有混合感染，PPV促進了PCV2在體內(nèi)的復(fù)制和分布，使得PCV2的抗原廣泛存在于病豬組織中的巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和多核巨細(xì)胞的胞漿中，這說明兩者有協(xié)同作用[8-9]。但是,關(guān)于這2種病毒協(xié)同致病的機制還不是很清楚。PCV2與PPV共同的靶細(xì)胞豬外周血單核細(xì)胞是機體重要的免疫細(xì)胞，它能分泌一些細(xì)胞因子，例如白細(xì)胞介素、干擾素和細(xì)胞集落刺激因子等。通過對PCV2和PPV體外感染PBMC后白細(xì)胞介素的研究可以推測這2種病毒在豬體內(nèi)感染及發(fā)展的特性，對于了解PCV2和PPV共感染的免疫致病機理及相關(guān)疾病的防控具有重要的意義。本試驗欲通過體外培養(yǎng)PBMC，在RNA水平上測定上述感染細(xì)胞中的白細(xì)胞介素的變化規(guī)律，以闡明PCV2和PPV共感染的發(fā)病機制，為有效預(yù)防和控制該病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病毒 PCV2病毒HN-ZZ株，由河南省動物源性食品安全重點實驗室分離并保存，病毒拷貝數(shù)為4×103.28拷貝·μL-1。PPV病毒7909標(biāo)準(zhǔn)毒株(PPV-7909)購自中國獸藥監(jiān)察所，經(jīng)河南省動物源性食品安全重點實驗室傳代保存，病毒滴度為106.1TCID50·mL-1。

1.1.2 試驗動物與細(xì)胞 試驗選用40日齡去勢公豬，體重為25～35 kg，該豬由河南省正陽諸美集團種豬場提供，經(jīng)RT-PCR/PCR和間接ELISA檢測PRRSV、PCV2、PPV、PRV、SIV、HCV及其特異性抗體均為陰性，抽取其前腔靜脈抗凝血，參照Histopaque?-1077說明書提取外周血單個核細(xì)胞，并于10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。

1.1.3 主要試劑 Protein K(Promega公司)；RPMI-1640培養(yǎng)基(GIBCOBR公司)；Trypsin(Invitrogen)；Histopaque?-1077(sigma)；胎牛血清培養(yǎng)液(Hyclone公司)；E.Z.N.A Total RNA Kit Ⅰ(OMEGA)；SYBR?Premix EX Taq TM Ⅱ(TaKaRa)，Primescript?RT reagent Kit With gDNA Erase (TaKaRa)，其他常規(guī)試劑均為分析純試劑。

1.1.4 主要儀器 CFX96 Real-Time PCR 儀(BioRad公司)；臺式高速低溫離心機(德國Sigma公司)；PTC-200型PCR儀(M J Research公司)；紫外凝膠成像系統(tǒng)(美國SIM公司)；小型臺式離心機(德國Sigma公司)。

1.2 病毒感染

試驗分4組，分別為PCV2,PPV,PCV2/PPV及空白細(xì)胞對照，取2 mL的PBMCs(經(jīng)細(xì)胞計數(shù)，細(xì)胞105個·mL-1)置于6孔板中。采取同步接毒方法，接種劑量分別為200 ,200,200 μL(PCV2和PPV各100 μL)及200 μL RPMI-1640，每個處理設(shè)2個重復(fù)，直接接種于含PBMCs的六孔板中，輕輕搖勻，放入37 ℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。吸附60 min(在此期間每隔15 min輕輕晃動1次)。用PBS洗去未吸附的病毒，然后用含體積分?jǐn)?shù) 2%胎牛血清的1640維持液(加入D-氨基葡萄糖使其終濃度為2 mmol·L-1)培養(yǎng)細(xì)胞。

1.3 細(xì)胞的收集

分別收集未感染的病毒的PBMCs(對照組，CK)及PCV2,PPV,PCV2/PPV感染后1 ,3 ,12 ,24 ,48 ,72 h的PBMCs細(xì)胞反復(fù)吹打后，用PBS洗滌2次，用2.5 g·L-1胰酶液消化細(xì)胞，1 000×g離心10 min，收集PBMCs，于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4 DNA及RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄

按實驗室的蛋白酶K法提取2種病毒的DNA，參照E.Z.N.A Total RNA Kit Ⅰ說明書提取細(xì)胞總RNA，具體方法和步驟參照文獻[10]進行，參照Primescript?RT reagent Kit With gDNA Erase說明書將提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。并將反轉(zhuǎn)錄合成后的cDNA及提取的DNA做為熒光定量PCR的模板。

1.5 引物的設(shè)計與合成

引物的設(shè)計使用Primer Premier 5.0 軟件，根據(jù)GenBank上收錄的國內(nèi)外的全基因序列，進行全基因序列分析，選擇各自保守區(qū)段設(shè)計引物。文中所需要的引物的基因名稱、參考序列、退火溫度及產(chǎn)物大小見表1。引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，引物的使用濃度為15μmol·L-1。

1.6 相對定量PCR

以β-action為看家基因進行相對定量PCR，反應(yīng)體系為20 μL，其中SYBR Premix Ex Taq 10 μL，上、下游引物各0.4 μL，cDNA 400 ng，加三蒸水補足20 μL。反應(yīng)條件為：95 ℃ 30 s；95 ℃ 10 s，表1中所指引物的退火溫度 15 s，72 ℃ 30 s，共進行40個循環(huán)；循環(huán)結(jié)束后升溫至95 ℃持續(xù)15 s，再降至60 ℃ 持續(xù)15 s，然后開始從60 ℃遞增至95 ℃ 保持20 min，采集熒光信號得出擴增產(chǎn)物的解鏈曲線，于95 ℃ 15 s結(jié)束反應(yīng)。

1.7 數(shù)據(jù)分析

在熒光定量PCR中，Ct值反映模板中目標(biāo)基因的含量，通過與看家基因β-action進行比較，結(jié)果采用2-△△Ct法[11]進行分析，能夠準(zhǔn)確反映出目標(biāo)基因的含量。試驗結(jié)果采用方差分析的Duncan 法進行統(tǒng)計學(xué)分析，P<0.05時表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCV2,PPV在PBMCs中的增殖規(guī)律

PCV2和PPV感染PBMCs后，在1 ,3 ,12 ,24 ,48 ,72 h分別收集細(xì)胞，提取這2種病毒的DNA，進行相對定量PCR，與β-action進行比較分析，將病毒感染1 h時的病毒DNA含量定義為1倍，得出不同時間病毒DNA在細(xì)胞的相對含量(圖1)。圖1中A顯示的是PCV2的相對含量，僅在12，48 h 時PCV2/PPV組高于PCV2單感染組且差異極顯著(P<0.01)，其他時間點均低于PCV2單感染組。圖1中B顯示PPV相對含量，在12 ，24 h時PCV2/PPV組PPV相對含量在高于單感染組，且12 h時差異極顯著(P<0.01)；其他時間點均低于PPV單感染組，其中在48,72 h時2組之間的差異極顯著(P<0.01)。試驗過程中，PCV2和 PPV單感染組的PBMCs中分別沒有檢測到PPV或PCV2， CK中沒有檢測到PCV2和PPV。

圖1 感染后不同時間 PBMCs中 PCV2(A)和(B)PPV核酸的相對含量

2.2 PCV2，PPV體外感染PBMCs對白細(xì)胞介素的影響

分別在PCV2，PPV，PCV2/PPV感染PBMC后，于1，3，12，24，48，72 h分別收集細(xì)胞，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，進行相對定量PCR，與β-action進行比較分析，并將病毒感染1 h時mRNA含量定義為1倍，可得出不同時間白細(xì)胞介素mRNA轉(zhuǎn)錄的水平。

由圖2可以看出，IL-1β mRNA在3個病毒感染組中的表達(dá)量均較高，且3，12，24，48 h IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平均高于對照組，當(dāng)2種病毒共感染時在3 h和48 h顯著高于2種病毒的單感染組。IL-6 mRNA2種病毒共感染的轉(zhuǎn)錄水平比單獨感染的轉(zhuǎn)錄水平在1，3，24，48 h顯著上調(diào)(P<0.05)，在12 h時顯著下調(diào)(P<0.05)，在72 h變化不顯著。結(jié)果說明，共感組比PPV，PCV2單感染組更能刺激細(xì)胞內(nèi)IL-6的表達(dá)，更能抵抗病毒的進一步感染。而IL-8 mRNA在3個病毒感染組中的表達(dá)量均較高，共感染組在3 h和72 h 時的IL-8 mRNA轉(zhuǎn)錄水平高于PPV，PCV2單感染組。3個病毒感染組中IL-12p35 mRNA和IL-12p40 mRNA的變化量不高。IL-12p35 mRNA僅PPV在1，72 h與對照組相比mRNA上調(diào)顯著，其他2組與對照組相比均在低于或變化不顯著。而IL-12p40的共感染組的轉(zhuǎn)錄水平與單感染組相比，只有在24h的時候顯著上調(diào)(P<0.05)。3個病毒感染組中的IL-13 mRNA在感染后3 h均高于對照組，且PCV2，PCV2/ PPV感染組分別在48 h和72h高于對照組，可知IL-13只有在病毒感染早期處于激活狀態(tài)。PCV2/ PPV共感染組IL-17 mRNA轉(zhuǎn)錄水平在病毒感染后24，48 h顯著上調(diào)(P<0.05)。IL-18 mRNA在3個病毒感染組中的表達(dá)量均較低，只有在PCV2/ PPV共感染后的1 h和3 h的時候顯著上調(diào)(P<0.05)，隨著時間的推移3組中IL-18的mRNA轉(zhuǎn)錄水平都逐步下調(diào)，以PCV2/PPV共感染組下調(diào)明顯(圖2)。

以上試驗結(jié)果表明，IL-12p35，IL-12p40，IL-18細(xì)胞因子在病毒感染后其轉(zhuǎn)錄水平均較低或受到抑制，并且PPV與PCV2共感染在感染后期比PPV或PCV2單感染組受到的抑制更加嚴(yán)重。IL-1β，IL-6，IL-8，IL-13，IL-17細(xì)胞因子在病毒感染后其轉(zhuǎn)錄水平均較高，并且PPV與PCV2共感染比PPV或PCV2單感染組高，說明病毒感染后啟動了白細(xì)胞介素因子的表達(dá)，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。

3 結(jié)論與討論

PCV2和PPV共同感染可以引起豬體重下降、衰竭、黃疸、貧血 以及全身淋巴結(jié)炎癥、肝炎、腸炎、腎炎或肺炎等 PMWS 的典型特征[12-14]。KRAKOWKA等[15]認(rèn)為,在悉生豬體內(nèi)復(fù)制PMWS需要PCV2和PPV等其他病原參與。本研究表明，病毒感染初期3組中未見病毒的大量增殖。PCV2/PPV組中PPV的相對含量在12 ,24 h時高于PPV單感染組，其余時間點均低于PPV單感染組。而PCV2/PPV組中PCV2相對含量僅在48 h時高于PCV2單感染組，其余時間點均低于PCV2單感染組。由此推測，在PPV與PCV2共感染后期促進PCV2的增殖，而PCV2/PPV共感染早期促進，后期抑制PPV的增殖。

圖2 細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄時相

IL-1β生物學(xué)活性表現(xiàn)在促進T細(xì)胞的活化、增殖和分化，誘導(dǎo)CTL的產(chǎn)生，增強NK細(xì)胞的殺傷活性，刺激單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性介質(zhì)[16]。IL-6可以促進B細(xì)胞分化和誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成急性期反應(yīng)蛋白來啟動抗病毒及抗腫瘤作用[17-18]。IL-6還能在體外有效地在體外刺激豬淋巴細(xì)胞的增殖，與ConA對豬外周血淋巴細(xì)胞的增殖能力相當(dāng)[19]。IL-8是一種重要的趨化性細(xì)胞因子，趨化和激活中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞及T細(xì)胞進入感染部位。中性粒細(xì)胞是一種參與先天免疫重要的免疫效應(yīng)細(xì)胞，在炎癥反應(yīng)中迅速到達(dá)感染或損傷部位，同時釋放大量效應(yīng)分子如NO、溶菌酶等，發(fā)揮吞噬功能，清除病原微生物[20-21]。IL-l7主要是由活化的記憶性CD4 T淋巴細(xì)胞分泌，能誘導(dǎo)產(chǎn)生多種細(xì)胞因子如IL-6,TNF-α等，參與炎癥反應(yīng)主要通過募集中性粒細(xì)胞、誘導(dǎo)粒細(xì)胞生成等來完成[22-24]。施開創(chuàng)等[25]在研究PRRSV和PCV2共感染組促炎細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄水平變化時發(fā)現(xiàn)，共感染組總體上均比單感染下降，處于明顯的抑制狀態(tài)，在IL-1β,IL-6,IL-8尤為明顯，說明病毒感染后，PRRSV和PCV2共感染的炎癥反應(yīng)比單感染受到更大程度的抑制，PRRSV和PCV2對機體的先天性免疫的抑制具有加重作用。郭東輝等[8]研究發(fā)現(xiàn)，PPV和PCV2病毒感染的中后期中，PPV優(yōu)先在PBMC中增殖，引起細(xì)胞抗凋亡因子Bcl-2的分泌，延緩了細(xì)胞凋亡，為PCV2增殖創(chuàng)造了條件。我們研究發(fā)現(xiàn)，IL-1β，IL-6，IL-8，IL-17細(xì)胞因子在病毒感染后其轉(zhuǎn)錄水平均較高，并且PPV與PCV2共感染比PPV或PCV2單感染組高，說明病毒感染后，經(jīng)過一段病毒與細(xì)胞的適應(yīng)后，PCV2/PPV共感染比單感染刺激細(xì)胞釋放更多的IL-1β，IL-6，IL-8，IL-17，來趨化淋巴細(xì)胞分化，進一步抵抗病毒入侵。IL-6在3,24,48 h時PCV2/PPV共感染組高于PPV,PCV2單感染組，刺激了PBMCs中淋巴細(xì)胞的增殖，是病毒進一步感染新的細(xì)胞，與PCV2/PPV共感染組中PCV2在病毒感染后期出現(xiàn)1個高峰。

IL-12 是細(xì)胞毒性T 細(xì)胞(CTL)和自然殺傷細(xì)胞(NK)活性刺激因子，誘導(dǎo)T 細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α，有利于宿主清除病毒。IL-12由p35和p40 2個獨立的亞基組成的異源二聚體，p35決定IL-12的種屬特異性，p40在IL-12與受體結(jié)合時起關(guān)鍵作用[26-27]。IL-18 主要生物學(xué)功能包括誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和激活NK細(xì)胞；刺激T細(xì)胞增殖，增強淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。IL-12的生物學(xué)功能與IL-18 相同相似，在抗病毒感染上具有協(xié)同效應(yīng)[28-29]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，3組引起IL-12p35，IL-12p40 mRNA的變化量不大，僅PPV在1，72 h與對照組相比IL-12p35 mRNA上調(diào)顯著，其他2組與對照組相比均在低于或變化不顯著；IL-18 mRNA在3組中的表達(dá)量均較低，且隨時間的推移逐步下調(diào)，以PCV2/PPV共感染組下調(diào)明顯。結(jié)果說明：病毒感染后，IL-12p35 和IL-12p40處于低活力或抑制狀態(tài)。IL12p35,IL-12p40，IL-18細(xì)胞因子在病毒感染后其轉(zhuǎn)錄水平均較低或受到抑制，尤其是PCV2/PPV共感染，這可能是PCV2、PPV感染引起機體免疫抑制的機制之一。

IL-13是重要的免疫調(diào)節(jié)因子，具有復(fù)雜的生物活性，對炎癥性細(xì)胞因子具有普遍的抑制作用[30-31]。本研究發(fā)現(xiàn)，在感染后3 h，各組的IL-13轉(zhuǎn)錄水平均顯著增加，提示在病毒感染早期，IL-13的表達(dá)抑制了其他因子的轉(zhuǎn)錄，致使IL-12p35，IL-12p40，IL-18整體表達(dá)量不高。在48 h PCV2/PPV共感染組高于PPV，PCV2單感染組，提示PCV2/PPV共感染后期引起的抑制作用，為病毒的持續(xù)感染提供給了條件。

本試驗采用Real-time PCR技術(shù)對PPV,PCV2單感染與PCV2/PPV共感染豬PBMCs后1，3，12，24，48，72 h中PPV，PCV2的DNA含量及白細(xì)胞介素(IL-1β，IL-6，IL-8，IL-12p35，IL-12p40，IL-13，IL-17，IL-18)mRNA轉(zhuǎn)錄水平進行了檢測。結(jié)果顯示，IL-1β，IL-6，IL-13，IL-8 和IL-17細(xì)胞因子在病毒感染后其轉(zhuǎn)錄水平均較高，并且共感染比PPV，PCV2單感染組高，而IL12p35，IL-12p40和IL-18細(xì)胞因子在病毒感染后其轉(zhuǎn)錄水平均較低或受到抑制。由此表明,PCV2/PPV共感染組比PPV，PCV2單感染組更能刺激炎癥的發(fā)生，同時共感染對細(xì)胞的免疫抑制具有加重作用。

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(責(zé)任編輯：蔣國良)

Study on influence of PCV2 and PPV co-infection of porcine PBMCs on transcriptional profiels of IL cytokines

JING Yaxing1, ZHANG Ruizhi2, HE Xiaoxiang3, LAN Peiying3, CAO Beibei1,JIN Xiaohui3, XU Weisong1, WEI Zhanyong1

(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China; 2.Henan University of Animal Husbandry and Economy, Zhengzhou 450011, China;3.Key Laboratory for Animal-derived Food Safety of Henan Province, Zhengzhou 450002, China)

In order to investigate the influence of inflammatory cytokines in porcine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) on the mRNA expression level following the co-infection with pathogenesis of porcine circovirus type 2(PCV2) and porcine parvovirus(PPV),the viral titre and the transcript level of IL-1β, IL-6, IL-8, IL-12p35, IL-12p40, IL-13, IL-17 and IL-18 were measured and andyzed by real-time PCR. The results showed that PCV2,PPV could infect the PBMC in vitro, the mRNA levels of interleukin cytokines, IL-1β, IL-6, IL-13, IL-8 and IL-17 cytokines were significantly increased respectively in co-infected group compared to those of single -infected group on 24 h (P<0.01) ; the depression of IL12p35, IL-12p40 and IL-18 was extremely obvious. The transcript level of IL-1β, IL-6, IL-8, IL-17 increased in the PCV2, PPV and PCV2/PPV co-infection groups, while the transcript level of IL12p35, IL-12p40, IL-18 were suppressed. These results indicated that the inflammatory response and immune-suppression induced by PPV and PCV2 co-infection was more obvious than that of single-infection in the stage of infection.

PPV; PCV2; co-infected; IL; PBMC

2015-06-11

國家自然科學(xué)基金項目(U1404326)；河南省高?？萍紕?chuàng)新人才科技創(chuàng)新人才支持計劃(15HASTIT028)

景亞星(1989-)，女，河南平頂山人, 碩士研究生, 主要從事動物分子免疫學(xué)研究。

魏戰(zhàn)勇(1975-), 男, 河南安陽人, 副教授。

1000-2340(2015)05-0646-07

S855.3

A