腎康靈干預(yù)小兒原發(fā)性腎病綜合征的CXCL16、解聚素金屬蛋白酶10變化

鄭健， 艾斯， 楊帆， 邱彩霞， 盧小露

臨床論著

腎康靈干預(yù)小兒原發(fā)性腎病綜合征的CXCL16、解聚素金屬蛋白酶10變化

鄭健， 艾斯， 楊帆， 邱彩霞， 盧小露

目的 通過觀察原發(fā)性腎病綜合征(PNS)患兒中藥腎康靈干預(yù)治療前后血清趨化因子CXCL16和解聚素金屬蛋白酶(ADAM10)水平的變化。方法 將60例PNS患兒隨機分為中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組各30例。另同期選取健康兒童30例作為正常對照組。西藥對照組予以單純西藥治療，中西醫(yī)結(jié)合組在西藥對照組治療基礎(chǔ)上加用中藥清解腎康靈煎劑，檢測兩組治療前后的血清CXCL16和ADAM10水平，同時檢測血清白蛋白、膽固醇和尿蛋白定量，觀察治療前后檢測指標(biāo)的變化。結(jié)果 (1)治療前中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組的CXCL16、ADAM10水平明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組的CXCL16、ADAM10水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療3個月后中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組的CXCL16、ADAM10水平高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；中西醫(yī)結(jié)合組的CXCL16、ADAM10水平明顯低于西藥對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組治療3個月后血清CXCL16、ADAM10水平均明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明兩組病情均有改善但未痊愈，中西醫(yī)結(jié)合組較西藥對照組改善更明顯。(2)與治療前比較，兩組血清膽固醇和尿蛋白定量均顯著降低，血清白蛋白明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與西藥對照組比較，中西醫(yī)結(jié)合組血清膽固醇明顯降低，血清白蛋白明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，24 h尿蛋白定量兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 CXCL16、ADAM10參與了小兒PNS的發(fā)病機制，中藥腎康靈干預(yù)治療能顯著降低血清PNS患兒的CXCL16、ADAM10水平，降低尿蛋白、血膽固醇，升高血白蛋白，從而改善患兒病情，這可能與清除吞噬ox-LDL的血清CXCL16而發(fā)揮整體作用有關(guān)。

原發(fā)性腎病綜合征； 趨化因子； 解聚素金屬蛋白酶； 腎康靈； 兒童

原發(fā)性腎病綜合征(primary nephrotic syndrome，PNS)是兒科常見的腎小球疾病，且病程中常表現(xiàn)為頻繁復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響患兒身心健康。筆者應(yīng)用益腎活血中藥腎康靈干預(yù)治療小兒PNS，從分子生物學(xué)水平闡明趨化因子CXCL16、解聚素金屬蛋白酶(ADAM10)與小兒PNS的相關(guān)性及中藥腎康靈干預(yù)治療的作用機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2011-01/2012-12福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院收治門診和住院的PNS患兒60例，按隨機數(shù)字表法分為中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組各30例。中西醫(yī)結(jié)合組中男19例，女11例；年齡2～13歲，平均(6.2±2.2)歲，其中2～5歲13例，6～9歲10例，10～13歲7例。西藥對照組中男18例，女12例；年齡2～13歲，平均(5.6±1.2)歲，其中2～5歲12例，6～9歲10例，10～13歲8例。同期在健康體檢中心選取健康兒童30例作為正常對照組，其中男16例，女14例；年齡2～13歲，平均(7.2±1.8)歲，其中2～5歲2例，6～9歲18例，10～13歲10例。3組患兒在年齡、性別方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 符合中華醫(yī)學(xué)會兒科分會腎病學(xué)組2009年制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。(1)大量蛋白尿：1周內(nèi)3次尿蛋白定性(+++)～(++++)，或隨機或晨尿尿蛋白/肌酐≥2.0；24 h尿蛋白定量≥50 mg/kg；(2)低蛋白血癥：血漿白蛋白<25 g/L；(3)高脂血癥：血漿膽固醇>5.7 mmol/L；(4)不同程度的水腫。以上4項中(1)和(2)為診斷的必要條件。

1.2.2 中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 符合“腎虛血瘀證”診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。以腰膝酸軟，腰脊刺痛、拒按，耳鳴，舌淡紫，脈細澀等為常見癥的證候。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)符合PNS診斷標(biāo)準(zhǔn)和腎虛血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡2～14歲；(3)經(jīng)家長或監(jiān)護人同意納入研究并簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)先天性腎病綜合征、遺傳性腎病綜合征者；(2)繼發(fā)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過敏性紫癜、乙肝或丙肝等繼發(fā)性腎病綜合征者；(3)合并有心血管、肝臟及造血系統(tǒng)嚴(yán)重疾病和精神病者；(4)未按規(guī)定用藥，或無法判斷療效，或臨床資料不全者。

1.5 治療方法 PNS患兒均用潑尼松1.5～2.0 mg/(kg·d)，用至尿蛋白轉(zhuǎn)陰后2周改為隔日頓服療法，即潑尼松2 mg/kg，繼用4周后開始逐漸減量，每2～4周減2.5～5.0 mg，療程達1年以上。潑尼松無效應(yīng)或部分效應(yīng)者，加用環(huán)磷酰胺8～12 mg/(kg·d)靜脈沖擊療法，每2周連用2 d，總劑量≤200 mg/kg，共6次；或用口服環(huán)孢素A 5 mg/(kg·d)，療程1年以上。中西醫(yī)結(jié)合組在治療開始即加用腎康靈煎劑(自擬方：黃芪、生地黃各15 g，山茱萸、山藥、茯苓、牡丹皮各10 g，三七5 g等)，水煎服，日一劑，用至潑尼松停藥后2個月為止。

1.6 指標(biāo)檢測方法 受試者均在初次就診時，于清晨8時空腹抽取肘靜脈血3 mL，常規(guī)離心(15 min，3 000 r/min)，分離上清凍存于-20 ℃低溫冰箱待測。兩組患兒均在不間斷治療3個月后再次抽血凍存待測(方法同上)。采用ELISA法檢測患兒血清中的CXCL16、ADAM10的分泌水平。同時采用全自動生化分析儀檢測受試者治療前及治療后3個月血清白蛋白、血膽固醇以及24 h尿蛋白定量的變化。收集受試者晨尿，采用領(lǐng)苯三酚紅-鉬酸鈉比色法測定尿蛋白定量。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后血清CXCL16、ADAM10的變化 見表1。

表1 各組血清CXCL16、ADAM10比較

注：與治療前比較，at=33.53，33.66，16.36，15.05，P<0.01。

表1結(jié)果表明，治療前CXCL16、ADAM10水平3組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，進一步進行兩兩比較，中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組的CXCL16、ADAM10水平明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組的CXCL16、ADAM10水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療3個月后CXCL16、ADAM10水平3組比較差異差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，進一步進行兩兩比較，中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組的CXCL16、ADAM10水平高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；中西醫(yī)結(jié)合組的CXCL16、ADAM10水平明顯低于西藥對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。中西醫(yī)結(jié)合組和西藥對照組治療3個月后血清CXCL16、ADAM10水平均明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明兩組病情均有改善但未痊愈，中西醫(yī)結(jié)合組較西藥對照組改善更明顯。

2.2 兩組治療前后血清白蛋白、膽固醇、尿蛋白定量比較 見表2。

表2 兩組治療前后血清白蛋白、膽固醇、尿蛋白定量比較±s，n=30)

注：與治療前比較，at=-2.27，2.06，P<0.05；bt=-6.05，4.45，5.50,4.02，P<0.01；與西藥對照組比較，ct=-2.70，P<0.05，dt=3.18，P<0.01。

表2結(jié)果表明，與治療前比較，兩組血清膽固醇和尿蛋白定量均顯著降低，血清白蛋白明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與西藥對照組比較，中西醫(yī)結(jié)合組血清膽固醇明顯降低，血清白蛋白明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，24 h尿蛋白定量兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

PNS屬于中醫(yī)學(xué)的“水腫”“水氣”“虛證”范疇，與血、氣、水三者的相互作用密切相關(guān)。水停氣阻，氣滯血瘀；氣不攝血，血溢脈外而成瘀；脾腎陽虛，失于溫煦，日久寒凝血滯；久病入絡(luò)，脈絡(luò)瘀阻；陰虛火旺，熱盛血耗，血液濃稠流行不暢而致瘀；因虛或長期應(yīng)用激素使衛(wèi)外不固，外邪入侵脈絡(luò)不通易于成瘀。中藥清解腎康靈是本院于多年治療腎病經(jīng)驗中所得出的自擬方，經(jīng)過多年研究，已認證了其在腎病方面輔助治療的有效性。筆者既往的臨床研究表明，在臨床中以腎康靈為主的中西醫(yī)結(jié)合治療小兒腎病綜合征有效率達88.89%，使其緩解率較二者單獨治療有明顯提高[3]。其主要成分為黃芪、生地、山茱萸、山藥、茯苓、牡丹皮、三七。方中黃芪補氣升陽、利水消腫、益氣行血，生地清熱涼血、益腎活血，二藥共為君藥，主益腎活血；山茱萸補益肝腎、收斂固澀，山藥益氣養(yǎng)陰、補脾腎、固腎精，茯苓利水滲濕，牡丹皮活血涼血，三七活血化瘀止血。全方共奏益腎氣、行氣血、化其瘀之功效。相關(guān)研究表明，中藥清解腎康靈能減輕免疫/炎癥硬化介質(zhì)對機體和腎臟的損害，糾正紊亂的免疫功能狀態(tài)，改善頻繁復(fù)發(fā)性腎病綜合征患兒高凝狀態(tài)，減少患兒復(fù)發(fā)率，提高激素的臨床療效[3]。

PNS患兒存在著血清CXCL16、ADAM10異常升高的表現(xiàn)，CXCL16、ADAM10作為吞噬腎臟損傷關(guān)鍵因子ox-LDL的重要成分，能促進腎臟炎癥因子的黏附、聚集。趨化因子CXCL16對ox-LDL有較強的結(jié)合和內(nèi)吞攝取能力，CXCL16對T淋巴細胞執(zhí)行趨化激活作用，并與受體CXCR6一起參與樹突狀細胞與免疫T淋巴細胞間的相互作用。CXCL16既具有趨化因子的功能，又執(zhí)行清道夫受體功能，成為疾病治療中具有十分重要意義的靶分子，在免疫調(diào)節(jié)中可能具有雙重作用[4]。解聚素與ADAM10可直接或間接參與炎癥反應(yīng)中粒細胞和T細胞的聚集。本研究結(jié)果表明，PNS患兒存在著血清CXCL16、ADAM10異常升高的表現(xiàn)，這可能與CXCL16、ADAM10作為吞噬腎臟損傷關(guān)鍵因子ox-LDL的重要成分，通過調(diào)控的方式直接或間接參與炎癥反應(yīng)中粒細胞和T細胞的聚集，從而起到促進腎臟炎癥因子的黏附、聚集的作用，直接或間接參與了腎臟的損傷。益腎活血中藥腎康靈干預(yù)治療能顯著降低PNS患兒血清CXCL16、ADAM10的水平，降低異常升高的尿蛋白、血脂，升高血白蛋白，從而改善患兒病情，這可能與中藥腎康靈能清除吞噬ox-LDL的血清CXCL16而發(fā)揮整體作用有關(guān)。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會腎臟病學(xué)組.兒童常見腎臟疾病診治循證指南(一)：激素敏感、復(fù)發(fā)/依賴腎病綜合征診治循證指南(試行)[J].中華兒科雜志,2009,47(3):167-170.

[2] GB/T 16751.1-3-1997中醫(yī)臨床診療術(shù)語疾病部分[S].1997.

[3] 鄭健,褚克丹,林青,等.腎康靈治療小兒頻復(fù)發(fā)性腎病30例臨床研究[J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2009,19(2):1-3.

[4] McKimmie CS,Graham GJ.Astrocytes modulate the chemokine network in a pathogen-specific manner[J].Biochem Biophys Res Commun，2010,394(4):1006-1011.

(本文編輯：劉穎)

The changed of CXCL16 and ADAM10 in children with primary nephrotic syndrome interfered by Shenkangling decoction

ZHENGJian，AISi，YANGFan，etal.

FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122，China.

Objective To observe the levels of CXCL16,a disintegrin and metalloprotease 10(ADAM10) in children with primary nephrotic syndrome(PNS) before and after intervention of traditional Chinese medicine Shenkangling,and to clarify the mechanism of PNS and the action of Shenkangling by molecular biology.Methods PNS children were randomly divided into the Shenkangling + western medicine group(n=30) and the western medicine group(n=30),and healthy children as normal control group were selected in the examination center(n=30).Serum CXCL16,ADAM10 were detected by ELISA in children with PNS before and after treatment, and at the same time, serum albumin(ALB), cholesterol(CH) and 24-hour urinary protein excretion efficacy evaluation were detected.Results In PNS children urinary protein excretion was elevated, serum ALB reduced,CH increased,CXCL16 and ADAM10 content increased(P<0.01).Compared to western medicine group, in Shenkangling + western medicine group CH and serum CXCL16 and ADAM10 content was reduced, serum ALB increased more significantly(P<0.01 orP<0.05).Both in Shenkangling + western medicine group and in western medicine group urine protein was decreased, but there was no difference between them.Conclusion CXCL16 and ADAM10 are involved in the pathogenesis of PNS,and traditional Chinese medicine Shenkangling can significantly reduce the levels of serum CXCL16 and ADAM10,reduce the urine protein and CH and elevate ALB, thus improving symptoms in children, which may be related to removal of serum CXCL16 by clearing up ox-LDL.

primary nephrotic syndrome； CXCL16； disintegrin and metalloprotease； Shenkangling； children

福建省科技計劃項目資助(2008KJB-09)

350122 福州，福建中醫(yī)藥大學(xué)(鄭健)；福建中醫(yī)藥大學(xué)研究生院(楊帆，邱彩霞，盧小露)；350004 福州，福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院兒科(艾斯)；350004 福州，福建省中西醫(yī)結(jié)合腎臟病重點實驗室(鄭健，艾斯) 作者簡介：鄭健(1958-)，男，教授、主任醫(yī)師。研究方向：小兒腎病的診斷與治療，E-mail：13705056837@126.com。

10.3969/j.issn.1674-3865.2015.02.005

R692

A

1674-3865(2015)02-0112-04

2014-05-09)