回凍法在林麝解剖中的應(yīng)用

鄭程莉　王建明　馮達(dá)勇等

摘 要：對(duì)林麝開(kāi)展深層次解剖研究，可進(jìn)一步了解其形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理機(jī)能。本文在未改變林麝材料各器官自然形態(tài)結(jié)構(gòu)下，采用回凍法對(duì)林麝各器官的形態(tài)、構(gòu)造、位置關(guān)系進(jìn)行解剖研究，充分保留了各臟器的原有色澤和形狀，有效的緩解了林麝尸體腐爛速度，提高了林麝材料的利用效率，有利于收集各組織器官的細(xì)微解剖數(shù)據(jù)，為林麝的解剖學(xué)研究提供了一種切實(shí)可行的方法。

關(guān)鍵詞：林麝；解剖；回凍法

中圖分類(lèi)號(hào)：S865.41 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20150932002

林麝為國(guó)家一級(jí)保護(hù)瀕危動(dòng)物，由于數(shù)量稀少，人們對(duì)這種動(dòng)物還不甚了解。開(kāi)展深層次解剖研究，揭示林麝體內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)，對(duì)于林麝的形態(tài)學(xué)研究、生理學(xué)研究、病理學(xué)研究以及發(fā)育生物學(xué)研究等都具有重要意義。在解剖過(guò)程中，我們最常用的解剖方法就是液體填充管道法、化學(xué)物質(zhì)固定鑄型法、X射線造影法、神經(jīng)潰變法等。采用這些方法之后，很難恢復(fù)材料的原貌，并不能對(duì)其進(jìn)行二次利用。要獲得林麝原材料很不容易，一旦獲得，若處置不當(dāng)或沒(méi)有很好地保存，便會(huì)造成資源的浪費(fèi)。在動(dòng)物解剖過(guò)程中，冷凍技術(shù)可解決標(biāo)本表面的結(jié)締組織毛修凈和肌肉斷頭切齊問(wèn)題[1]。根據(jù)這個(gè)原理，本文在未改變林麝材料各器官的自然形態(tài)結(jié)構(gòu)下，通過(guò)冷凍方法對(duì)其進(jìn)行固定，采用回凍法對(duì)林麝各器官的形態(tài)位置、構(gòu)造、位置關(guān)系進(jìn)行解剖研究，分析林麝材料的變化，為后續(xù)的解剖工作提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物來(lái)源及樣本

不同年齡及不同性別林麝共10只，其中，6只來(lái)自四川養(yǎng)麝研究所馬爾康養(yǎng)獐場(chǎng)，4只來(lái)自四川養(yǎng)麝研究所都江堰養(yǎng)麝場(chǎng)，均為自然死亡。

1.2 林麝材料冷凍固定方法

林麝自然死亡后，在支架和布帶的輔助作用下，根據(jù)林麝活體時(shí)的站姿，在不影響器官位置、形態(tài)、大小的情況下，將其保定后，放入-20℃冰柜冷凍定型。

1.3 解剖方法

采用徒手拔毛法，除去林麝外皮毛發(fā)，對(duì)林麝材料進(jìn)行大體解剖，分析不同解剖方法對(duì)林麝材料各組織的影響，并對(duì)林麝材料進(jìn)行局部分析，觀測(cè)回凍法在局部解剖中的作用程度（注：回凍法：對(duì)冷凍后的林麝材料進(jìn)行解剖，在解剖研究過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)組織出現(xiàn)解凍軟化現(xiàn)象，立刻又將其放回-20℃低溫冰箱進(jìn)行冷藏，經(jīng)過(guò)1～2h后，發(fā)現(xiàn)組織出現(xiàn)硬化狀態(tài)，此刻便可再次取出材料對(duì)其進(jìn)行解剖分析）。

1.4 資料整理和分析

所有圖片均采用Canon 5DⅡ相機(jī)進(jìn)行拍攝。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同解剖方法對(duì)林麝材料的影響

取3只自然死亡的林麝材料直接進(jìn)行解剖，另取7只經(jīng)過(guò)冷凍的林麝材料進(jìn)行回凍解剖。隨著解剖時(shí)間的增加，觀察兩種解剖方法對(duì)林麝材料肌肉的影響（圖1-4）。發(fā)現(xiàn)在解剖第1天，常溫下解剖肉色呈現(xiàn)紅潤(rùn)狀態(tài)，冷凍后的肉色也呈現(xiàn)相同的狀態(tài)；在解剖第3天，常溫下的肌肉組織呈現(xiàn)黑褐色，出現(xiàn)腐敗跡象，回凍后的肌肉組織依然保持原樣，呈現(xiàn)出櫻桃紅色，并且層次分明，易于剝離。

2.2 回凍法解剖效果觀察

對(duì)6只林麝材料進(jìn)行局部解剖，觀測(cè)林麝材料內(nèi)臟組織的變化情況（圖5-7）。對(duì)比發(fā)現(xiàn)6只林麝內(nèi)臟組織在3次解凍后所呈現(xiàn)的色彩基本相同，均為鮮紅色。

2.3 完全解凍后各組織狀態(tài)

取1只林麝進(jìn)行完全解凍，發(fā)現(xiàn)各器官保存良好，富有彈性，呈自然色澤，界限分明，能夠清晰分辨出肌肉系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)臟系統(tǒng)。圖8-10分別顯示了林麝被皮血管分布情況、內(nèi)臟系統(tǒng)的在體固定位置、腹腔網(wǎng)膜覆蓋情況。

3 討論與分析

3.1 不同解剖方法對(duì)林麝材料的影響

在常溫下對(duì)林麝材料進(jìn)行解剖研究，雖然能很好的呈現(xiàn)林麝的自然色彩和結(jié)構(gòu)，但由于材料主要由蛋白質(zhì)構(gòu)成，很容易發(fā)生腐爛現(xiàn)象，并不能維持長(zhǎng)時(shí)間的解剖研究和拍攝照相。本文采用的回凍法對(duì)林麝進(jìn)行解剖學(xué)研究，隨著解剖時(shí)間的增加，反復(fù)回凍能夠降低林麝材料的自溶進(jìn)程，減緩材料腐爛速度。采用化學(xué)固定法進(jìn)行解剖，雖然能很好的呈現(xiàn)各組織的在體結(jié)構(gòu)關(guān)系，但會(huì)引起林麝材料各組織產(chǎn)生化學(xué)變化，容易使各組織變形失水，失去原本色彩，并會(huì)引起解剖測(cè)量的誤差。采用回凍法對(duì)林麝進(jìn)行解剖，能夠很好的呈現(xiàn)材料的原本色彩，并充分能鎖住組織水分，使組織保持原來(lái)的形狀和大小，大大提高了解剖測(cè)量的精確性。

3.2 徒手拔毛對(duì)解剖的影響

本研究針對(duì)已固化的林麝材料，采用徒手法對(duì)林麝進(jìn)行拔毛，可清晰分離出需要解剖的組織樣本，盡可能避免了在解剖過(guò)程中因毛發(fā)過(guò)多而造成解剖組織被污染的情況。待皮毛拔除到一定程度時(shí)對(duì)林麝尸體進(jìn)行解剖，這樣可保證有毛包圍的組織始終處于緩慢解凍的狀態(tài)，而已分離的組織能夠即可呈現(xiàn)自然狀態(tài)。對(duì)林麝內(nèi)臟組織進(jìn)行進(jìn)一步解剖，能夠清晰分辨出肌肉系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)臟系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)均處于半解凍狀態(tài)，很好的呈現(xiàn)了各組織的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)，也為各組織的顏色描述提供了一定的事實(shí)依據(jù)。

3.3 回凍法對(duì)局部組織材料的影響

采用冷凍法對(duì)研究的局部組織進(jìn)行反復(fù)回凍，在解剖時(shí)，局部組織呈現(xiàn)緩慢溶解狀態(tài)，對(duì)解剖塑型起到了很好的輔助作用，也對(duì)各組織的在體解剖研究提供了一種可行的工作思路。待組織完全解凍后，各器官組織基本保持原有的狀態(tài)，血管走向和神經(jīng)分布清晰，能夠充分展現(xiàn)材料的細(xì)微結(jié)構(gòu)，有利于林麝材料各組織的精細(xì)研究。

綜上所述，回凍法可運(yùn)用到林麝的解剖中，不僅能有效的緩解林麝尸體腐爛速度，直觀地觀察到各臟器的自然形態(tài)，還能提高林麝標(biāo)本的利用效率，也能在解剖過(guò)程中得到各組織在體的詳細(xì)的解剖數(shù)據(jù)，為充分利用林麝材料提供了一種切實(shí)可行的解剖方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳旺， 馬貴驤， 張川平等. 冷凍在解剖技術(shù)中的應(yīng)用[J]. 解剖學(xué)雜志，1989（03）：199.

作者簡(jiǎn)介：鄭程莉（1986-），女，四川成都人，研究實(shí)習(xí)員，四川養(yǎng)麝研究所，主要從事動(dòng)物遺傳育種與繁殖工作。