不同廠家歸脾丸（濃縮丸）中阿魏酸和甘草酸含量考察

趙群濤方永凱楊俊杰盚罡李丹（信陽市食品藥品檢驗所，河南 信陽 464000；信陽農(nóng)林學(xué)院生物技術(shù)系）

不同廠家歸脾丸（濃縮丸）中阿魏酸和甘草酸含量考察

趙群濤1方永凱1楊俊杰2盚罡1李丹1（1信陽市食品藥品檢驗所，河南 信陽 464000；2信陽農(nóng)林學(xué)院生物技術(shù)系）

目的：建立以高效液相色譜法同時測定歸脾丸（濃縮丸）中阿魏酸和甘草酸含量的方法，并考察不同廠家歸脾丸（濃縮丸）的質(zhì)量情況。方法：色譜柱為A gi l ent H C-C18（250 m m× 4.6 m m，5 μm）；以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相，梯度洗脫；檢測波長在320 nm和248 nm間切換；流速1.0 m L/m i n；柱溫30℃。結(jié)果：阿魏酸進(jìn)樣量在0.066～ 1.989 μg，甘草酸進(jìn)樣量在0.123～ 3.690 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回收率分別為98.8%和98.5%。結(jié)論：該方法靈敏、重復(fù)性好，可用于歸脾丸（濃縮丸）的質(zhì)量控制。測得的阿魏酸和甘草酸含量結(jié)果反映出不同廠家生產(chǎn)的歸脾丸（濃縮丸）質(zhì)量存在差異。

歸脾丸（濃縮丸）；阿魏酸；甘草酸；含量測定

歸脾丸（濃縮丸）由黨參、白術(shù)、黃芪、當(dāng)歸、遠(yuǎn)志、酸棗仁、甘草等13味中藥組成，現(xiàn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第七冊)》，有益氣健脾、養(yǎng)血安神的功效，用于心脾兩虛，失眠多夢，頭昏頭暈，崩漏便血等癥。原標(biāo)準(zhǔn)沒有含量測定項，近年來同時測定其中當(dāng)歸和甘草的文獻(xiàn)未見報道。該藥中當(dāng)歸是補(bǔ)血養(yǎng)血的主要藥物，甘草用于調(diào)和諸藥、糾正各藥的偏性，其主要有效成分分別是阿魏酸和甘草酸。目前當(dāng)歸和甘草野生資源枯竭，多為人工種植，不同地區(qū)藥材的質(zhì)量參差不齊，不同生產(chǎn)廠家采用的藥材產(chǎn)地不同會影響歸脾丸（濃縮丸）的質(zhì)量，該藥又是常用中成藥，有必要對市場上不同廠家歸脾丸（濃縮丸）的質(zhì)量情況進(jìn)行考察。

1 儀器與試藥

A gi l ent 1260系列高效液相色譜儀；Preci sa 92SM-D R電子天平，基因型 1850摩爾超純水機(jī)（重慶摩爾水處理設(shè)備有限公司）。阿魏酸（批號：110773-201012）購自中國食品藥品檢定研究院，甘草酸（批號：H Y 0037）購自上海華壹生物科技有限公司（純度大于 98%）；甲醇、乙腈購于 D i km a Technol ogi es.IN C公司，均為色譜純，水為I級超純水，其他試劑均為分析純。歸脾丸（濃縮丸）均為市售，見表 2。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

A gi l ent H C-C18色譜柱（250 m m × 4.6 m m，5 μm）；流動相A為0.1%磷酸溶液，B為乙腈，梯度洗脫 0～ 18 m i n為15% B，18～ 19 m i n為15%→35%B，19～40 m i n為35%B，40～42 m i n為15%B；檢測波長0～ 25 m i n為320 nm，25～40 m i n為248 nm；柱溫30℃；流速1.0 m L/m i n；進(jìn)樣量10 μL。

2.2 試液的制備

2.2.1 混合對照品溶液精密稱取兩種對照品適量，加甲醇-冰醋酸（95∶5）制成含阿魏酸66.3 μg/m L、甘草酸0.123 m g/m L的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液將本品研碎，取6.0 g置棕色量瓶中，精密稱定，精密加甲醇-冰醋酸（95∶5）25 m L，稱定質(zhì)量，超聲30分鐘，放冷，用甲醇-冰醋酸（95∶5）補(bǔ)足減失的質(zhì)量，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液根據(jù)歸脾丸（濃縮丸）的處方，制備不含當(dāng)歸和甘草的陰性樣品粉末，按上述方法操作制成陰性樣品溶液。

2.3 專屬性試驗

分別吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，按2.1色譜條件測定，見圖 1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取混合對照品儲備溶液 1，5，10，20，30 μL，按2.1色譜條件進(jìn)行測定，以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，得阿魏酸的線性方程為：

Y=1 622.0X＋ 9.588，

r=0.999 9，線性范圍0.066～ 1.989 μg；甘草酸的線性方程為：

Y=902.4X－42.99，

r=0.998 9，線性范圍0.123～ 3.690 μg。試驗結(jié)果表明阿魏酸和甘草酸在各自濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 對照品（A）、供試品（B）和陰性樣品（C）的HPLC色譜圖

2.5 精密度試驗

精密吸取樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積積分值為指標(biāo)計算RSD（n=6）。阿魏酸和甘草酸的RSD分別為0.7%，0.9%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品溶液，分別于0，1，3，6，9，12，24 h測定，記錄峰面積，阿魏酸和甘草酸的RSD分別為1.3%，1.5%，結(jié)果顯示樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批（140635）樣品按 2.2項方法平行制備6份，按2.1色譜條件測定阿魏酸和甘草酸的含量，計算RSD。測得阿魏酸的含量分別為0.089， 0.092，0.090，0.090，0.091，0.091 m g/g，RSD 為1.1%；甘草酸的含量分別為0.723，0.705，0.715，0.718，0.703，0.704 m g/g，RSD為1.2%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取兩種對照品適量制成含阿魏酸0.421 m g/m L、甘草酸1.660 m g/m L的混合對照品溶液。

取同一批（55140715）樣品6份，每份約6.0 g，精密稱定，精密加入上述混合對照品溶液2 m L，按2.2項方法制備，再按2.1色譜條件測定阿魏酸和甘草酸的含量并計算回收率。結(jié)果見表 1。

表1 加樣回收率測定結(jié)果

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 測定波長的選擇

用D A D檢測器在200～ 400 nm掃描對照品的紫外吸收圖譜，發(fā)現(xiàn)阿魏酸在230 nm和320 nm處有最大吸收，320 nm吸收值大于230 nm吸收值；甘草酸僅在248 nm有最大吸收。測試不同廠家的樣品發(fā)現(xiàn)阿魏酸的含量均較低，選擇230 nm 時樣品吸收值較低，測試不靈敏，選擇320 nm有較好的響應(yīng)，此時甘草酸沒有吸收，本文采用波長切換的方法使這兩種成分都得到較好檢測。

3.2 提取方法選擇

樣品處理比較了冷浸過夜、常溫超聲30分鐘和60分鐘、回流1小時和2小時，結(jié)果冷浸法提取的含量較低，超聲和回流不同時間提取液的阿魏酸和甘草酸含量相差不大，文獻(xiàn)報道回流的提取液不穩(wěn)定[1]，選擇超聲30分鐘即可滿足實驗要求。又比較了甲醇[2]、70%甲醇[3]、70%乙醇[4]、60%乙醇[4-5]、甲醇-冰醋酸（95∶5）[1]、甲醇-甲酸（95∶5）和甲醇-0.24 m ol/L N aH CO3[6]幾種溶劑均超聲30分鐘的提取效率，結(jié)果不加酸時60%乙醇提取液中阿魏酸和甘草酸的含量均略高；加酸后這兩種成分的含量都稍微增加，幾種加酸溶劑提取液中兩種成分的含量差別也不大，與文獻(xiàn)報道的不同溶劑提取甘草酸的結(jié)果一致[7]。綜合各種因素，再考慮到甲醇-冰醋酸（95∶5）更利于提取液的保存[1]，用甲醇-冰醋酸（95∶5）超聲30分鐘處理樣品比較好。

3.3 流動相的選擇

試驗中比較了不同比例的甲醇（乙腈）-水、甲醇（乙腈）-0.1%磷酸溶液[3]、甲醇-乙腈-0.1%磷酸和乙腈-0.1%磷酸溶液梯度系統(tǒng)，測試結(jié)果表明歸脾丸（濃縮丸）在幾種溶劑系統(tǒng)中成分峰都較多，阿魏酸和甘草酸出峰時間差別很大，本文選定的梯度系統(tǒng)分離效果好，分析用時少，含甲醇的系統(tǒng)樣品峰較寬不利于分析。試驗中還發(fā)現(xiàn)乙腈體積分?jǐn)?shù)的改變對甘草酸的出峰時間影響較大，提示分析過程中流動相比例不應(yīng)發(fā)生較大改變。

3.4 不同廠家產(chǎn)品質(zhì)量分析

近年來測定歸脾丸（濃縮丸）中補(bǔ)血藥當(dāng)歸有效成分含量的文章還較少，藁本內(nèi)酯雖然在當(dāng)歸中含量較高但很不穩(wěn)定，對照品難以保存[6，8]，本文測定對照品穩(wěn)定的阿魏酸用以比較當(dāng)歸的質(zhì)量差異；目前對歸脾丸中甘草的控制主要是測定甘草酸形成的鹽間接測定甘草酸[2-3，8]，本文直接測定其含量。由于不能搜集盡可能多的不同廠家的藥品，僅測定一批藥顯然不能就武斷地說明某廠家藥品質(zhì)量的好壞，但用本文所建立的方法對不同廠家的藥品含量測定結(jié)果表明，不同廠家歸脾丸阿魏酸和甘草酸的含量差別大，提示市場上的歸脾丸（濃縮丸）存在一定的質(zhì)量差異，進(jìn)而反映出不同廠家在所用中藥材質(zhì)量、生產(chǎn)工藝參數(shù)、內(nèi)部質(zhì)量控制等方面存在一定的差異。

4 小結(jié)

本文采用高效液相色譜法同時測定阿魏酸和甘草酸的含量，方法靈敏、重復(fù)性好，可用于歸脾丸（濃縮丸）的控制質(zhì)量。

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Content Investigation of Ferulic Acid and Glycyrrhizin in Guipi Pills （Concentrated Pills）from Different Manufacturers

Zhao Q unt ao1，F(xiàn)ang Y ongkai1，Y ang Junj i e2，Q i u G ang1，Li D an1（1 X i nyang Inst i t ut e for Food and D rug Cont rol，H enan X i nyang 464000，Chi na；2 X i nyang Col l ege of A gri cul t ure and Forest ry）

Objective:To est abl i sh a m et hod for t he si m ul t aneous det erm i nat i on of t he cont ent s of ferul i c aci d and gl ycyrrhi zi n i n gui pi pi l l s （concent rat ed pi l l s）and i nvest i gat e t he qual i t y of gui pi pi l l s （concent rat ed pi l l s）produced by di fferent m anufact urers.Methods:RP-H PLC w as perform ed on A gi l ent H C-C18col um n（250 m m × 4.6 m m，5 μm）w i t h a m obi l e phase of acet oni t ri l e-0.1% phosphori c aci d aqueous sol ut i on，gradi ent el ut i on w as carri ed out，det ect i on w avel engt h w as sw i t ched at 320 nm and 248 nm，t he fl ow rat e w as 1.0 m L/m i n and t he col um n t em perat ure w as at 30℃.Results:A good l i near rel at i onshi p w as obt ai ned w i t hi n t he range of 0.066～1.989 μg and 0.123～ 3.690 μg for ferul i c aci d and gl ycyrrhi zi n，and t he recovery rat e w as 98.8% and 98.5% respect i vel y.Conclusion:The m et hod w as sensi t i ve and reproduci bl e for cont ent det erm i nat i on of ferul i c aci d and gl ycyrrhi zi n i n gui pi pi l l s（concent rat ed pi l l s）and i t can be used for t he qual i t y cont rol of gui pi pi l l s（concent rat ed pi l l s）.The resul t s of cont ent det erm i nat i on show ed t hat t he qual i t y of gui pi pi l l s （concent rat ed pi l l s）vari ed from di fferent m anufact urers.

G ui pi Pi l l s（Concent rat ed Pi l l s）；Ferul i c A ci d；G l ycyrrhi zi n；Cont ent D et erm i nat i on

10.3969/j.i ssn.1672-5433.2015.04.004

2015-01-12）

河南省科學(xué)技術(shù)廳河南省2013年科技發(fā)展計劃基金（132102310265）

趙群濤，男，主管中藥師。研究方向：藥物分析。E-m ai l：28843515@qq.com