新疆維吾爾族急性缺血性腦卒中短期預(yù)后與5-脂氧合酶激活蛋白SG13S32位點(diǎn)及危險因素的相關(guān)性研究

劉 夢 殷立新 馬建華 張小寧

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新疆維吾爾族急性缺血性腦卒中短期預(yù)后與5-脂氧合酶激活蛋白SG13S32位點(diǎn)及危險因素的相關(guān)性研究

劉 夢 殷立新 馬建華 張小寧

目的 探討新疆維吾爾族人群急性缺血性腦卒中短期預(yù)后與5-脂氧合酶激活蛋白(5-lipoxygenase-activating，ALOX5AP)基因SG13S32位點(diǎn)、年齡、性別、就診時間等危險因素的相關(guān)性。方法 選取194例新疆地區(qū)急性缺血性腦卒中經(jīng)相同藥物治療后的維吾爾族患者,應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)檢測ALOX5AP基因SG13S32位點(diǎn)多態(tài)性，采用隊列研究的統(tǒng)計分析方法比較不同基因型人群的短期預(yù)后改善情況,并經(jīng)Logistic逐步回歸分析，得出預(yù)后相關(guān)獨(dú)立因素。結(jié)果 5-脂氧合酶激活蛋白基因SG13S32位點(diǎn)不同基因型間維吾爾族急性缺血性腦卒中短期預(yù)后改善差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.336，P=0.562)。經(jīng)Logistic逐步回歸分析，年齡、就診時間及纖維蛋白原為影響維吾爾族急性缺血性腦卒中患者短期預(yù)后的獨(dú)立因素。結(jié)論 5-脂氧合酶激活蛋白基因SG13S32位點(diǎn)不同基因型之間急性缺血性腦卒中短期預(yù)后改善沒有明顯差異，且不是影響維吾爾族急性缺血性腦卒中短期預(yù)后的獨(dú)立危險因素。年齡、就診時間及纖維蛋白原可影響急性缺血性腦卒中短期預(yù)后改善。

5-脂氧合酶激活蛋白基因 缺血性腦卒中 維吾爾族 短期預(yù)后

缺血性腦卒中是目前導(dǎo)致人類死亡的三大主要疾病之一[1,2]。引起急性缺血性腦卒中的病因，目前研究較多，分別指出年齡、性別、體重指數(shù)、家族史、血脂、血壓、血糖等與其發(fā)生均有關(guān)[3～6]。另外還提出某些遺傳基因也與其發(fā)生率有相關(guān)性，特別是2004年冰島科學(xué)家發(fā)現(xiàn)5-脂氧合酶激活蛋白(ALOX5AP)與缺血性腦卒中的發(fā)生具有相關(guān)性，可增加人群缺血性腦卒中的發(fā)生率[7，8]。

目前國內(nèi)急性缺血性腦卒中治療大部分遵循《中國急性缺血性腦卒中診治指南2010》。但仍發(fā)現(xiàn)在相同治療下部分急性缺血性腦卒中患者的短期預(yù)后存在一定差異性。針對此情況，國內(nèi)外對影響缺血性腦卒中預(yù)后因素進(jìn)行相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)大部分病因與預(yù)后相關(guān)，為其獨(dú)立危險因素[9～12]。但針對遺傳基因與預(yù)后關(guān)系研究相對較少，故本研究選擇新疆維吾爾族人群開展隊列研究，主要了解在維吾爾族人群中該疾病的發(fā)展趨勢和預(yù)后，探討及評定5-脂氧合酶激活蛋白基因以及某些危險因素與急性缺血性腦卒中預(yù)后的相關(guān)性。幫助臨床醫(yī)師調(diào)整完善治療決策，促進(jìn)治療水平的提高，并通過采取相應(yīng)對策干預(yù)疾病向良性轉(zhuǎn)歸。

對象與方法

1.研究對象：選擇新疆第一附屬醫(yī)院、阿克蘇地區(qū)醫(yī)院、和田地區(qū)醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2011年10月～2012年10月期間確診為急性缺血性腦卒中的維吾爾族住院患者為研究對象。

2.納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均符合1996年國際神經(jīng)系關(guān)聯(lián)病及卒中協(xié)會的缺血性腦卒中診斷標(biāo)準(zhǔn)，由神經(jīng)內(nèi)科專科醫(yī)師經(jīng)嚴(yán)格的神經(jīng)系統(tǒng)查體，具有陽性體征；并結(jié)合頭部CT和(或)MRI檢查等確診的首次急性缺血性腦卒中患者194例。(2)排除大動脈炎、外傷、血液病、藥物、惡性腫瘤、血管畸形等引起的繼發(fā)性缺血性腦卒中，且經(jīng)頭部CT檢查，排除腦出血，排除無癥狀及體征的靜止性腦梗死，排除短暫性腦缺血發(fā)作，排除既往有神經(jīng)功能缺損、心房顫動、急性心肌梗死、冠心病、支氣管哮喘病史的患者。(3)腦血管事件發(fā)生及就診時間均在急性期內(nèi)，均未給予溶栓治療，且住院接受治療天數(shù)≥2周。(4)入院后給予抗血小板聚集，降脂穩(wěn)斑，改善腦循環(huán)及營養(yǎng)神經(jīng)等藥物，積極改善和恢復(fù)缺血區(qū)的血液供應(yīng)，促進(jìn)腦微循環(huán)，預(yù)防和治療缺血性腦水腫，并給予相應(yīng)并發(fā)癥及危險因素對癥治療處理?？刂浦虏∫蛩?，加強(qiáng)護(hù)理，防治并發(fā)癥。積極進(jìn)行早期功能康復(fù)、針灸治療，降低致殘率。

3.研究方法：(1)本研究為隊列研究，比較194例維吾爾族缺血性腦卒中不同基因型患者經(jīng)治療后癥狀改善情況，以及影響其預(yù)后的危險因素。獲得新疆醫(yī)科大學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)，入選者均簽署知情同意書。(2)所有研究對象均提供了完整真實(shí)的臨床資料，包括性別、年齡、體重、身高、吸煙飲酒史、家族史、既往疾病史、血壓、血脂、血糖等血液檢查指標(biāo)，頭部CT和(或)MRI等影像學(xué)檢查資料。(3)在患者就診入院時及住院治療2周后均由神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)醫(yī)生采用美國國立研究院腦卒中評定表(NIH stroke Seale,NIHSS)進(jìn)行評分，并根據(jù)《美國成人卒中康復(fù)治療指南(2007)》及相關(guān)文獻(xiàn)建議:以2周后NIHSS<6為預(yù)后良好，NIHSS≥6為預(yù)后不良進(jìn)行分組[13]。(4)在每位研究對象知情同意后，抽取受檢者清晨空腹靜脈血4ml，EDTA抗凝，-80℃保存，用北京百泰克中量全血基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。應(yīng)用限制性片段長度多態(tài)性-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RFLP-PCR)方法進(jìn)行檢測，根據(jù)國外研究資料并結(jié)合數(shù)據(jù)庫(NCBI database)查出位點(diǎn)的RS號，由上海生工生物工程技術(shù)有限公司合成,上游引物序列5＇-GGC TTT ATG GTT AAA TGC AAG G-3＇，下游引物序列5＇-GAG AGT AGG ATG AAG GGC TGA A-3＇。該序列所擴(kuò)增產(chǎn)物為431bp，其包含一個對應(yīng)于內(nèi)切酶TaqαⅠ酶切位點(diǎn)。PCR反應(yīng)體系：總體積為20μl，包含上下游引物各0.5μl，基因組DNA 1μl，Mix 10μl(含有3mmol/L MgCl2、0.4mmol/L dNTP和2×PCR緩沖液)，去離子水8μl。PCR擴(kuò)增參數(shù):95℃預(yù)變性3min；反應(yīng)循環(huán):95℃變性30s；59℃退火1min，27個循環(huán)后；最后72℃繼續(xù)延伸5min后降至4℃終止。檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物后，取PCR產(chǎn)物10μl,10×Buffer 2μl，TaqαⅠ酶0.5μl，滅菌去離子水補(bǔ)充體積至20μl，置于65℃水浴箱消化15min后，經(jīng)5%瓊脂糖凝膠電泳，110V電壓，經(jīng)30min電泳分離后。EB染色并于紫外燈下觀察，凝膠成像系統(tǒng)(Unvitec,BTS-20M)照相、分型。并結(jié)合酶切結(jié)果，取部分PCR產(chǎn)物，送至上海生工進(jìn)行DNA測序。(5)所有患者臨床資料統(tǒng)一整理后錄入數(shù)據(jù)庫，并多次核對無誤。

4.統(tǒng)計學(xué)方法：所獲數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行處理。先行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)，正態(tài)分布的計量資料采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；多因素分析采用二分類Logistic逐步回歸分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1.臨床資料：194例急性缺血性腦卒中患者，男女性別比例為115∶79，患者年齡18～91歲,患者平均年齡60.90±11.98歲。

2.ALOX5AP基因SG13S32位點(diǎn)多態(tài)性檢測：ALOX5AP基因SG13S32位點(diǎn)以TaqαⅠ酶切PCR產(chǎn)物時，共有兩種基因型，即不能被切開，僅可見一431bp片段，與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小相同的突變純合子：AA基因型，共8例；被切割為431bp片段、241bp及190bp 3個片段的突變雜合子,AC基因型，共186例。

3.維吾爾族缺血性腦卒中ALOX5AP基因SG13S32位點(diǎn)不同基因型患者2周后NIHSS評分比較。194例維吾爾族缺血性腦卒中患者入院及治療2周后NIHSS比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=9.885，P=0.000)，認(rèn)為入院時NIHSS評分?jǐn)?shù)值較高，說明缺血性腦卒中經(jīng)治療后NIHSS評分降低，治療有效。為影響預(yù)后相關(guān)危險因素研究提供前提條件。以兩周后NIHSS<6為預(yù)后良好組，NIHSS≥6為預(yù)后不良組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析后發(fā)現(xiàn)，不同基因型間缺血性腦卒中短期預(yù)后改善差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.336，P=0.562，表1)。

表1 ALOX5AP基因SG13S32位點(diǎn)不同基因型間患者2周后NIHSS比較

4.短期預(yù)后多因素分析:以兩周后NIHSS<6為預(yù)后良好組，NIHSS≥6預(yù)后不良組，以性別(X1)、年齡(X2)、基因型(X3)、BMI(X4)、高血壓病史(X5)、高脂血癥史(X6)、糖尿病史(X7)、卒中家族史(X8)、就診時間(X9)、空腹血糖(X10)、總膽固醇TG(X11)、高密度脂蛋白HDL(X12)、纖維蛋白原(X13)、TOAST分型(X14)作為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析。年齡、就診時間及纖維蛋白原為影響急性缺血性腦卒中患者獨(dú)立的預(yù)后因素，建立的回歸方程：logitP=1.092-0.03X2-0.006X9+0.895X13，性別、基因型、BMI、高血壓病史、高脂血癥史、糖尿病史、卒中家族史、空腹血糖、總膽固醇(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、TOAST分型未進(jìn)入回歸方程(表2)。

表2 影響急性缺血性腦卒中患者獨(dú)立的預(yù)后因素

因變量及賦值.2周后NIHSS評分,以NIHSS<6 賦值為0,NIHSS≥6賦值為1;自變量賦值.纖維蛋白原(g/L)，2～4=0，>4=1，<2=2

討 論

急性缺血性腦卒中50%～70%患者在運(yùn)動、感覺和語言表達(dá)等遺留有不同程度功能障礙,嚴(yán)重影響了患者的身體健康和生活質(zhì)量，給社會和家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)。缺血性腦卒中臨床上通常分為急性期，恢復(fù)期及后遺癥期，而急性期(一般指發(fā)病后兩周內(nèi))為整個治療過程中的最佳時期，能有效改善和恢復(fù)缺血區(qū)的血液供應(yīng)，促進(jìn)腦微循環(huán)，挽救缺血半暗帶，減少腦細(xì)胞死亡數(shù)目[14]。對于急性缺血性腦卒中患者病情進(jìn)行正確評估，有助于指導(dǎo)醫(yī)護(hù)人員制定合理有效的治療方案，以使患者收到最好的療效，降低致殘率及死亡危險性。

美國國立研究院腦卒中評定表是1989年由Thmos等為了急性腦卒中治療，研究設(shè)計的一份由15個項(xiàng)目組成的神經(jīng)功能檢查量表，國內(nèi)外均認(rèn)為其內(nèi)容全面，對腦卒中患者的意識水平及視覺、運(yùn)動、感覺小腦功能缺損程度進(jìn)行綜合性評價，可信度高，適用于各種腦卒中類型。且國內(nèi)外大多數(shù)文獻(xiàn)表明NIHSS評分與急性腦卒中患者病情預(yù)后嚴(yán)重程度的關(guān)系,即評分≥6分者病情較危重,死亡的風(fēng)險較高,<6分者則預(yù)后較好[15]。

本研究中急性缺血性腦卒中患者在入院時及治療2周后均由神經(jīng)科?？漆t(yī)師對其進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評價。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)在治療前及治療后的NIHSS評分的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，治療后NIHSS評分低于治療前NIHSS評分，說明經(jīng)治療后急性缺血性腦卒中患者病情得到改善。在患者接受治療有效的前提下，鑒于維吾爾族患者的民族差異性，考慮5-脂氧合酶激活蛋白基因SG13S32位點(diǎn)不同基因型間急性腦卒中患者短期預(yù)后是否具有差異性。以住院治療2周后的NIHSS評分<6為預(yù)后良好，NIHSS≥6為預(yù)后不良分組比較，5-脂氧合酶激活蛋白基因SG13S32位點(diǎn)不同基因型間維吾爾族急性缺血性腦卒中患者短期預(yù)后改善差異無統(tǒng)計學(xué)意義，即不同基因型間維吾爾族急性缺血性腦卒中患者短期預(yù)后改善無明顯差異。提示此基因型之間經(jīng)過有效治療后在預(yù)后改善方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義。但因其中AA基因型僅出現(xiàn)8例，群體代表性欠佳，可能造成一定誤差。故仍需在以后實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，驗(yàn)證目前實(shí)驗(yàn)結(jié)論。

關(guān)于影響急性缺血性腦卒中預(yù)后的因素研究較多。研究表明，患者發(fā)病年齡、文化程度、腦梗死面積、部位及并發(fā)癥均是影響急性腦梗死預(yù)后的主要因素[16，17]。而楊翠英等[18]也指出代謝綜合征、TOAST分型、感染等是影響急性缺血性腦卒中預(yù)后的獨(dú)立危險因素。本研究通過對194例維吾爾族缺血性腦卒中患者進(jìn)行了短期預(yù)后多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，5-脂氧合酶激活蛋白基因SG13S32位點(diǎn)基因型并未進(jìn)入回歸方程，提示其并不是維吾爾族急性腦卒中患者短期預(yù)后的獨(dú)立危險因素。而TOAST分型亦未進(jìn)入回歸方程，與杜敢琴等[15]研究發(fā)現(xiàn)一致，均認(rèn)為TOAST分型不是影響急性缺血性腦卒中預(yù)后的獨(dú)立危險因素。但本研究中因需排除對5-脂氧合酶激活蛋白基因具有干擾性的疾病，TOAST分型中的心源性栓塞型(CE)及其他明確病因型(SDE)均未納入研究，故目前結(jié)論僅適用于其余3種分型。

本研究發(fā)現(xiàn)，新疆地區(qū)急性腦卒中維吾爾族患者的短期預(yù)后的獨(dú)立影響因素主要為發(fā)病年齡、就診時間、纖維蛋白原。此研究發(fā)現(xiàn)與Hankey等結(jié)論相同，均發(fā)現(xiàn)年齡是預(yù)測腦卒中病死率重要的獨(dú)立危險因素，指出急性缺血性腦卒中患者年齡與預(yù)后不良呈正比，即年齡越大，其不良預(yù)后發(fā)生率越高，傷殘率及病死率均有提高。而單慧勇通過分析比較100例急性缺血性腦卒中患者發(fā)現(xiàn)，急性缺血性腦卒中患者的早期治療能明顯降低病死率和致殘率。認(rèn)為縮短就診時間為可明顯提高急性缺血性腦卒中預(yù)后改善。另外目前大量研究還證明，高纖維蛋白原水平對疾病預(yù)后的影響等同甚至已超過高膽固醇血癥、高血壓等一些已公認(rèn)的危險因素。本研究發(fā)現(xiàn)纖維蛋白原是維吾爾族急性缺血性腦卒中患者的短期預(yù)后的獨(dú)立影響因素，考慮與其致病機(jī)制有關(guān)。纖維蛋白原是由肝臟合成、分泌的一種蛋白，對血液流變學(xué)、血小板聚集和血管內(nèi)皮細(xì)胞功能有重要影響，參與動脈粥樣硬化形成，可導(dǎo)致血管粥樣斑塊巨噬細(xì)胞帽的滲透性改變和斑塊帽變薄，能增加紅色血栓的形成，易引發(fā)缺血性腦卒中。若持續(xù)保持高纖維蛋白原水平，則可能繼續(xù)導(dǎo)致血栓形成及引起抗血小板聚集治療效果欠佳，對狹窄、閉塞血管再通造成困難。故考慮臨床治療中積極降低纖維蛋白原，理論上可改善急性缺血性腦卒中患者預(yù)后情況。

本研究從基因水平考慮維吾爾族急性缺血性腦卒中患者短期預(yù)后相關(guān)危險因素，但未明確發(fā)現(xiàn)5-脂氧合酶激活蛋白基因SG13S32位點(diǎn)不同基因型間急性缺血性腦卒中患者短期預(yù)后改善有差別，亦未發(fā)現(xiàn)是新疆維吾爾族急性缺血性腦卒中患者短期預(yù)后相關(guān)危險因素。但由于目前樣本量偏少，存在實(shí)驗(yàn)誤差，故仍不能排除此基因型與缺血性腦卒中預(yù)后改善無關(guān)聯(lián)，可于將來擴(kuò)大樣本量，繼續(xù)進(jìn)行此方面研究。另外還需縮短就診時間，積極使用降纖藥物，降低纖維蛋白原，提高纖溶活性，做好腦血管疾病的二級預(yù)防工作，減少急性缺血性腦卒中發(fā)生，有效降低病死率及致殘率。

1 王維治.神經(jīng)病學(xué)[M].4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001：130-131

2 Wardlaw JM.Diagnosis of stroke on neuroimaging[J]. BMJ,2004,328：655-656

3 Elkind MS,Epidemiology and risk factors[J]. Stroke Prevention, 2011，17: 1213-1232

4 徐建輝,元小冬,張楠楠,等.血漿纖維蛋白原Bβ鏈4個基因多態(tài)性位點(diǎn)單體型與其功能表達(dá)和腦梗死的關(guān)聯(lián)性分析[J].血栓與止血學(xué).2011，3:105-111

5 陳國軍,于永娜,張燕柳,等，青年缺血性腦卒中55例危險因素分析[J].中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2012，1：45-46

6 李波,徐世成,汪毅宏,等，血尿酸水平與缺血性腦卒中的相關(guān)性[J].中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2012，5：3-5

7 Gretarsdottir S, Thorleifsson G, Reynisdottir ST,etal. The gene encoding phosphodiesterase 4D confers risk of ischemic stroke. Nat Genet Oct， 2003；35(2):131-138

8 Helgadottir A, Manolescu A, Thorleifsson G,etal. The gene encoding 5-lipoxygenase activating protein confers risk of myocardial infarction and stroke[J].Nat Genet Mar，2004，36(3):233-239

9 Baird TA,Parsons MW,Phanh T,etal.Persistent poststroke hyperglycemia is independently associated with infarct expansion and worse clinical outcome[J].Stroke,2003,34:2208-2214

10 孫新芳,馮琳,肖桂榮.不同時期血壓控制對腦梗死預(yù)后的影響 [J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2006，2：176-178

11 朱以誠,崔麗英.臨床特征、影像和血管病變分型對腦梗死預(yù)后的預(yù)測[J].中華神經(jīng)科雜志,2006，1：16-21

12 鄧曉玲,趙斌,汪健,等.C反應(yīng)蛋白、白細(xì)胞計數(shù)與腦梗死體積及近期預(yù)后的關(guān)系[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，3：591-593

13 Liu XD,Lv YL,Wang B,etal.Prediction of functional outcome of ischemic stroke patients in northwest China.Clinical[J].Neurology and Neurosurgery,2007,109(4): 571-577

14 中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會腦血管病學(xué)組急性缺血性腦卒中診治指南撰寫組．中國急性缺血性腦卒中診治指南2010[J]．中華神經(jīng)科雜志，2010，43(2)：146-153

15 杜敢琴,黃麗娜,富奇志，等.腦卒中預(yù)后的影響因素[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué),2005,1(4):57-59

16 李富康,郭 毅，付學(xué)軍，等.腦梗死急性期預(yù)后因素分析[J].中國醫(yī)藥,2006,1(1):27-28

17 劉學(xué)東，呂亞麗，王波，等.老年缺血性腦卒中患者預(yù)后及其影響因素的研究[J].中華老年心腦血管病雜志，2007，9(4)：240-243

18 楊翠英，鄭華光，王立英，等.代謝綜合征對急性腦梗死早期預(yù)后的影響[J].中國卒中雜志,2007,2(7):581-585

(修回日期：2015-02-26)

Xinjiang Uygur Short-term Prognosis of Acute Cerebral Ischemic Stroke and 5-lipoxygenase-activating Gene SG13S32 Locus Polymorphisms，Risk Factors of the Correlation Research.

LiuMeng,YinLixin,MAJianhua,etal.

DepartmentofNeurosurgery,TheFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Xinjiang830054,China

Objective To investigate the relationship between the short-term prognosis of ischemic stroke in Uygur Xinjiang and SG13S32 locus of 5-lipoxygenase-activating(ALOX5AP) gene，age, gender, visiting time and so on. Methods One hundred and ninety-four Uygur patients who got acute ischemic stroke have the same drug therapy in Xinjiang.The SG13S32 locus ploymorphisms of ALOX5AP gene was determined by using PCR-restriction fragment length polymorphism technique. Cohort study is used to analyze the short-term prognosis of different genotypes. The independent prognostic factors was obtained by theLogisticanalysis. Results There were no statistical differences in the short-term prognosis of acute ischemic stroke among different genotypes of ALOX5AP gene SG13S32(χ2=0.336，P=0.562).TheLogisticsregression analysis by which we can get that age, visiting time and fibrinogen are independent prognostic factors in acute ischemic stroke in Uygur. Conclusion The short-term prognosis of acute ischemic stroke in Uygur whose independent risk factors is not the ALOX5AP gene SG13S32 but the age, visiting time and fibrinogen were independent risk factors.

5-lipoxygenase-activating gene; Stroke; Uygur; Short-term prognosis

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81060097)

830054 烏魯木齊，新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

馬建華，電子信箱：mjh9191@163.com

R74

A DOI 10.11969/j.issn.1673-548X.2015.10.033

2015-01-24)